劉明軍，張曉林，陳邵濤，仲崇文，太宇星，張 龍

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117)

單純性肥胖是機(jī)體攝入營養(yǎng)過剩，導(dǎo)致脂肪異常堆積和分布且體質(zhì)量增加的非病理性肥胖。目前全球肥胖人口大約6.3億[1]，中國肥胖人口接近1億。肥胖對健康的影響涉及多個器官，可誘發(fā)糖尿病、心腦血管疾病、脂肪肝、關(guān)節(jié)病變等，甚至導(dǎo)致睡眠障礙、記憶減退、認(rèn)知障礙等。研究[2-3]表明單純性肥胖慢性低度炎癥狀態(tài)及高氧化應(yīng)激狀態(tài)關(guān)系密切，研究發(fā)現(xiàn)脂肪組織中的IL-6、TNF-α、IL-1β等細(xì)胞因子和巨噬細(xì)胞分泌因子可能發(fā)揮旁分泌作用，激活胰島素靶細(xì)胞內(nèi)的炎癥信號通路，導(dǎo)致胰島素內(nèi)氨基末端激酶（Jun N-terminal kinase，JNK）、κB激酶抑制劑β（inhibitor of KB kinase，IKKβ）以及其他絲氨酸激酶激活。本研究分析中醫(yī)外治法指壓法對單純性肥胖模型大鼠炎性細(xì)胞因子的影響，旨在為單純性肥胖慢性病防控提供綠色無痛路徑參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物與分組

造模動物采用8周齡SPF級健康SD大鼠40只，雌雄各半，體質(zhì)量（180±20）g，購于長春市億斯實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限責(zé)任公司，動物許可證號：SCXK（吉）2019-003。于長春中醫(yī)藥大學(xué)SPF級動物房基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，將大鼠隨機(jī)分為空白組和模型組[4]?？瞻捉M8只大鼠給予普通飼料喂養(yǎng)，模型組32只大鼠以高脂高糖飼料喂養(yǎng)。造模成功后剔除體質(zhì)量排序較前與較后的大鼠，將剩余24只模型組大鼠采用電子隨機(jī)法分為模型組、指壓組、藥物組（奧利司他）。

1.2 試劑與儀器

瘦素（LP）檢測試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司），腫瘤壞死因子-α（TNF-α）檢測試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司），白介素-6（IL-6）檢測試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司），Elisa試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司）。Microcen 24高性能小型離心機(jī)（西班牙ANALYSIS公司，Microcen 24型），全波長酶標(biāo)儀（Thermo Fisher SCIENTIFIC公司，Multiskan Sky型）。

1.3 干預(yù)方法

指壓組在高脂高糖飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上，采用自制壓力顯示按摩棒用5 N的力度在中脘、天樞、關(guān)元、足三里進(jìn)行點(diǎn)按，每穴依次點(diǎn)按30 s，操作4遍，每日治療1次，7 d為1個療程，連續(xù)治療6個療程。穴位選取參考《獸醫(yī)針灸學(xué)》[4]及《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[5]中的腧穴定位。藥物組在高脂高糖飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上，給予奧利司他每天10 mg，將藥物摻雜在食物中并保證順利攝入，喂養(yǎng)6周?？瞻捉M和模型對照組分別繼續(xù)以普通飼料和高脂高糖飼料喂養(yǎng)6周。所有大鼠為保證環(huán)境相同，在相同時間段采用與指壓組相同的抓取和固定。

1.4 指標(biāo)采集

干預(yù)前后體質(zhì)量；細(xì)胞因子表達(dá)指標(biāo)，取全血和血清檢測，白介素-6（IL-6）、瘦素（LP）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）均使用酶聯(lián)免疫吸附法，由上海哈靈生物科技有限公司提供試劑盒。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過SPSS 26.0軟件進(jìn)行分析。首先對計量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)以及方差齊性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布且方差齊性，則采用方差分析，再用LSD法進(jìn)行2組間比較。符合正態(tài)分布，但方差不齊則采用非參數(shù)檢驗(yàn)。不符合正態(tài)分布應(yīng)用H檢驗(yàn)。分析結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組大鼠6周后體質(zhì)量變化情況比較

見表1。

表1 4組大鼠6周后體質(zhì)量變化情況比較（±s，n=8） g

表1 4組大鼠6周后體質(zhì)量變化情況比較（±s，n=8） g

注：與模型組比較，## P＜0.01

組別 干預(yù)前 干預(yù)后空白組 354.28±8.43 413.85±12.06模型組 461.51±18.36 518.60±18.23藥物組 459.93±17.15 429.92±16.31##指壓組 462.67±19.29 446.92±19.54##

2.2 4組大鼠6周后LP、TNF-α、IL-6細(xì)胞因子表達(dá)情況比較

表2 4組大鼠6周后LP、TNF-α、IL-6 細(xì)胞因子表達(dá)情況比較（±s，n=8）

表2 4組大鼠6周后LP、TNF-α、IL-6 細(xì)胞因子表達(dá)情況比較（±s，n=8）

注：與模型組比較，# P＜0.05，## P＜0.01；與藥物組比較，△△ P＜0.01

組別 LP/（ug·L-1）TNF-α/（pg·mL-1）IL-6/（pg·mL-1）空白組 8.58±0.45 14.21±1.45 93.20±11.32模型組 13.21±1.24 45.22±1.33 267.30±23.35藥物組 9.86±0.78## 36.23±4.56# 223.12±25.26##指壓組 9.12±0.85## 30.12±1.28#△△ 150.64±25.53##△

3 討論

指壓法主要通過持續(xù)點(diǎn)按刺激腧穴，有以指代針之意，因此又稱為“指針法”。劉明軍結(jié)合單純性肥胖“中滿內(nèi)熱”“六郁和絡(luò)滯”[6-7]的傳統(tǒng)及現(xiàn)代中醫(yī)病機(jī)認(rèn)識，基于王之虹、劉明軍等流派主要傳承人總結(jié)的“運(yùn)腹通經(jīng)”治療理念[8]，創(chuàng)造性提出“指針法”，其主要作用為健運(yùn)脾胃、消脂化痰[9-10]。通過臨床研究或基礎(chǔ)探索證實(shí)，推拿作為中醫(yī)傳統(tǒng)外治方法的代表，對單純性肥胖癥等糖脂代謝疾病具有良好的改善效果。

本研究主要通過指壓持續(xù)刺激天樞、中脘、關(guān)元、足三里等腧穴。天樞作為大腸募穴，是陽明脈氣所發(fā)，主疏調(diào)腸腑、理氣行滯、消食，推拿該穴對于改善腸腑功能具有顯著的療效；中脘為胃之募，腑之會，又系手太陰、少陽、足陽明、任脈之會所，故指壓該穴以及腹部任脈、臍部有調(diào)理中焦氣機(jī)、疏理中氣之效，可促進(jìn)腸胃蠕動、加速代謝，符合“臟腑-經(jīng)絡(luò)相關(guān)”理論，胸腹為五臟六腑之宮城，運(yùn)用上述手法在腹部干預(yù)，可起到斡旋氣機(jī)，恢復(fù)脾胃健運(yùn)之功效。

本研究初步證實(shí)，指壓法可通過持續(xù)刺激相關(guān)腧穴調(diào)節(jié)相關(guān)臟腑—經(jīng)絡(luò)功能，調(diào)控糖脂代謝，降低體脂率，可不同程度抑制單純性肥胖大鼠LP、TNF-α、IL-6的表達(dá)水平。機(jī)體內(nèi)部經(jīng)過系列關(guān)聯(lián)性的生物復(fù)雜過程，最終引發(fā)機(jī)體脂肪組織代謝性炎癥反應(yīng)發(fā)生?；蛴捎诖x組織細(xì)胞內(nèi)的營養(yǎng)過剩，引起機(jī)體細(xì)胞內(nèi)應(yīng)激反應(yīng)，活化內(nèi)質(zhì)網(wǎng)UPR 途徑（非折疊蛋白反應(yīng)途徑），促進(jìn)促炎癥因子產(chǎn)生[11]。體內(nèi)炎性因子水平升高，引起肥胖、胰島素抵抗、2型糖尿病、脂肪肝等糖脂代謝相關(guān)疾病發(fā)生[12]。有研究[13-14]表明，改善單純性肥胖患者脂肪細(xì)胞內(nèi)炎癥反應(yīng)減少炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生，能夠增加胰島素的敏感性，改善糖脂代謝紊亂，預(yù)防心血管事件發(fā)生，證明了炎癥狀態(tài)在機(jī)體肥胖發(fā)生發(fā)展過程中的重要地位。

綜上所述，單純性肥胖與細(xì)胞炎性反應(yīng)存在一定的內(nèi)在關(guān)系，且指壓法的干預(yù)效果可能與對炎性抑制有關(guān)。本研究結(jié)果初步證明了指壓法可有效降低單純性大鼠體質(zhì)量，對其炎性細(xì)胞因子表達(dá)均具有顯著抑制作用，且LP改善效果與藥物接近，僅TNF-α、IL-6改善略低于藥物，說明指壓法可作為單純性肥胖抑制炎性細(xì)胞因子表達(dá)的減藥干預(yù)方法。后續(xù)將深入研究指壓法對單純性肥胖炎性反應(yīng)的作用機(jī)制，探索推拿作為肥胖等代謝病的減藥手段可行性，為臨床開展推拿治療單純性肥胖等代謝病提供新的綠色治療路徑。