吳 萍，鄢必新，于艷輝，白 冰，閆立成，宮海泉，徐 建*

(1.吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司，吉林省中藥標(biāo)準(zhǔn)化關(guān)鍵工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)春130103；2.修正藥業(yè)集團(tuán)長(zhǎng)春高新制藥有限公司，長(zhǎng)春130103)

仙牛腰骶痛顆粒由淫羊藿、牛膝、千年健等4味中藥組成，具有溫陽(yáng)祛濕，通經(jīng)止痛的功效。經(jīng)過(guò)薄層色譜鑒別方法摸索，建立了方中淫羊藿、牛膝、千年健薄層鑒別方法，為驗(yàn)證新建方法在溫濕度、薄層板廠家及點(diǎn)樣方式變化的情況下對(duì)薄層鑒別檢查結(jié)果產(chǎn)生的影響，故對(duì)上述薄層鑒別方法分別進(jìn)行耐用性試驗(yàn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240型電子分析天平(梅特勒-托利多公司)；SB25-12DT超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；SLD-1型薄層色譜攝影儀(天津思利達(dá)色譜技術(shù)開(kāi)發(fā)公司)。

1.2 試藥

樣品來(lái)源:吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司(批號(hào):20190902)；對(duì)照品來(lái)源:淫羊藿 （批號(hào):121632-201502）、牛膝（批號(hào):121066-201809）、千年?。ㄅ?hào):121571-201202）、淫羊藿苷（批號(hào):110737-201516）、齊墩果酸（批號(hào):110709-201808），以上均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；薄層板:硅膠G薄層板(青島海洋化工廠、煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所)；試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 淫羊藿薄層鑒別耐用性試驗(yàn)

2.1.1試驗(yàn)方法

取本品2g，研細(xì)，加水20ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)。濾液用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。再取淫羊藿對(duì)照藥材、缺淫羊藿的陰性樣品，同法制成對(duì)照藥材溶液及陰性樣品溶液。另取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加60%乙醇制成每1ml含1mg的溶液作為對(duì)照品溶液。吸取上述四種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶1∶1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，105℃加熱約數(shù)分鐘后，置紫外光燈（365nm）下檢視。

2.1.2 試驗(yàn)條件

分別在常溫低濕 （25℃，18%）、常溫高濕 （25℃，58%）、低溫低濕（25℃，58%）、高溫高濕（35℃，88%）、2種不同廠家硅膠G薄層板、圓形及條形點(diǎn)樣方式條件下進(jìn)行薄層試驗(yàn)，考察方法的耐用性。

2.1.3 試驗(yàn)結(jié)果

供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，表明淫羊藿薄層鑒別方法耐用性較好。

2.2 牛膝薄層鑒別耐用性試驗(yàn)

2.2.1 試驗(yàn)方法

取本品1g，研細(xì)，置于錐形瓶中，加水20ml與濃鹽酸2ml，加熱回流2小時(shí)，趁熱濾過(guò)，濾渣用水洗至中性，80℃烘箱干燥4小時(shí)。取濾渣加無(wú)水乙醇2ml使溶解，取上清液作為供試品溶液。再取牛膝對(duì)照藥材、缺牛膝的陰性樣品，同法制成對(duì)照藥材溶液及陰性樣品溶液。另取齊墩果酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述四種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸（8∶1∶2∶0.1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸的乙醇溶液，105℃加熱約數(shù)分鐘至斑點(diǎn)顯色清晰。

2.2.2 試驗(yàn)條件

分別在常溫低濕 （25℃，18%）、常溫高濕 （25℃，58%）、低溫低濕（25℃，58%）、高溫高濕（35℃，88%）、2種不同廠家硅膠G薄層板、圓形及條形點(diǎn)樣方式條件下進(jìn)行薄層試驗(yàn)，考察方法的耐用性。

2.2.3 試驗(yàn)結(jié)果

供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，均顯相同顏色的斑點(diǎn)，表明牛膝薄層鑒別方法耐用性較好。

2.3 千年健薄層鑒別耐用性試驗(yàn)

2.3.1 試驗(yàn)方法

取本品0.5g，研細(xì)，置具塞錐形瓶中，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。再取千年健對(duì)照藥材、缺千年健的陰性樣品，同法制成對(duì)照藥材溶液及陰性樣品溶液。吸取上述三種溶液各4μl，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（8∶2∶0.4）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以茴香醛試液（臨用新配），105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

2.3.2 試驗(yàn)條件

分別在常溫低濕 （25℃，18%）、常溫高濕 （25℃，58%）、低溫低濕（25℃，58%）、高溫高濕（35℃，88%）、2種不同廠家硅膠G薄層板、圓形及條形點(diǎn)樣方式條件下進(jìn)行薄層試驗(yàn)，考察方法的耐用性。

2.3.3 試驗(yàn)結(jié)果

供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，表明千年健薄層鑒別方法耐用性較好。

3 討論

千年健薄層色譜鑒別受溫度影響較大，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意控制溫濕度條件。

新建淫羊藿、牛膝、千年健薄層鑒別方法在不同溫濕度、不同廠家薄層板、不同點(diǎn)樣方式條件下各斑點(diǎn)的分離度均較好，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上均顯相同斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，且斑點(diǎn)顯色清晰，表明三種薄層鑒別方法耐用性均較好，可作為仙牛腰骶痛顆粒的質(zhì)控方法。