衛(wèi)芳 王艷婷 趙靜雪 張二衛(wèi)

隨著科技的不斷發(fā)展和人們對高質(zhì)量生活水平的需求增長，許多新興的產(chǎn)業(yè)和物種不斷產(chǎn)生，在滿足條件的同時一個隱形的殺手——生物安全問題日益凸顯。因此，微生物實驗室的風(fēng)險評估和風(fēng)險控制具有相當(dāng)重要的意義。

為確保參與微生物實驗人員身體健康，環(huán)境不受污染，能夠正常開展微生物實驗，確保出具的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、有效，需要對微生物實驗室所有實驗活動進(jìn)行風(fēng)險識別和分析評估，并提出相應(yīng)的控制措施[1]。實驗室應(yīng)建立并維持風(fēng)險評估和風(fēng)險控制程序，以持續(xù)進(jìn)行危險識別、風(fēng)險評估和實施必要的控制措施。

生物因子危害及風(fēng)險控制措施

生物因子危害

實驗室使用的菌種基本包括大腸埃希氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌、單核增生李斯特氏菌、銅綠假單胞菌、副溶血性弧菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、糞鏈球菌等，存在一定的風(fēng)險，包括菌種保存不當(dāng)、未按照規(guī)定要求進(jìn)行菌株傳代、操作時菌液濺灑、廢棄物處理不當(dāng)?shù)取?/p>

風(fēng)險控制措施

菌種保存不當(dāng)：菌種保存應(yīng)設(shè)置生物安全員專人負(fù)責(zé)保管，保存菌種的低溫冰箱設(shè)置雙人雙鎖。每次拿放菌種需要做相應(yīng)的登記，由實驗室人員和生物安全員雙方簽字確認(rèn)。

菌株傳代：菌株傳代應(yīng)有完善的作業(yè)指導(dǎo)書和菌株傳代記錄，標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株應(yīng)在規(guī)定的時間內(nèi)轉(zhuǎn)種傳代，并做相應(yīng)的確認(rèn)試驗，記錄相關(guān)原始數(shù)據(jù)存檔保存。

菌液濺灑：實驗室應(yīng)具備防菌液濺灑措施，出現(xiàn)菌懸液濺灑時用消毒液進(jìn)行處理，防止對人員和環(huán)境造成傷害和污染。

廢棄物處理不當(dāng)：對于實驗室用過的帶菌的、污染過的培養(yǎng)基、試劑條、槍頭、接種環(huán)、玻璃器皿等廢棄物要采用相應(yīng)的消毒劑滅菌或者121℃，30min以上高溫高壓滅菌，廢棄物的處理應(yīng)有相應(yīng)的制度和廢棄物處置記錄。

人員風(fēng)險及風(fēng)險控制措施

人員風(fēng)險 由于微生物檢測人員專業(yè)知識欠缺，操作不規(guī)范導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)的不準(zhǔn)確，甚至生物安全事故的發(fā)生。

風(fēng)險控制措施 參與微生物檢測的人員應(yīng)具備微生物相關(guān)專業(yè)知識，學(xué)歷、工作經(jīng)驗應(yīng)符合檢驗檢測要求，實驗室人員應(yīng)熟悉生物檢測安全操作知識和消毒滅菌知識。

生物安全柜風(fēng)險及風(fēng)險控制措施

生物安全柜[2]風(fēng)險 生物安全柜未按規(guī)定要求校準(zhǔn)，參數(shù)不達(dá)標(biāo);未按照設(shè)備操作規(guī)程和使用說明進(jìn)行操作維護(hù)可能使生物安全柜喪失功能，無法保證生物安全。

風(fēng)險控制措施 應(yīng)設(shè)置專門的設(shè)備管理員負(fù)責(zé)設(shè)備的定期校準(zhǔn)和維護(hù);制作生物安全柜操作規(guī)程，由專業(yè)老師培訓(xùn)指導(dǎo)，考核通過方可上崗作業(yè)。

高壓滅菌器風(fēng)險及風(fēng)險控制措施

高壓滅菌器風(fēng)險 高壓滅菌器未按規(guī)定要求校準(zhǔn)，參數(shù)不達(dá)標(biāo)，未按照設(shè)備操作規(guī)程和使用說明進(jìn)行操作、維護(hù)，可能使滅菌效果降低或喪失。未定期做高壓滅菌器效果鑒定可能滅菌效果不達(dá)標(biāo)導(dǎo)致滅菌不徹底，易引起空白長菌，樣品污染導(dǎo)致實驗失敗。高壓滅菌器內(nèi)溫度過高，容易造成蒸汽燙傷。

風(fēng)險控制措施 設(shè)置專門的設(shè)備管理員負(fù)責(zé)設(shè)備的定期校準(zhǔn)和維護(hù)。參加高壓滅菌器的專業(yè)培訓(xùn)，持證上崗。

建立高壓滅菌器效果鑒定作業(yè)程序[3]，包括監(jiān)測方法和監(jiān)測頻率。并記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。

化學(xué)法監(jiān)測是指將滅菌指示條放入待滅菌的物品中，經(jīng)一個滅菌周期后，顏色和性狀符合規(guī)定要求則為合格，反之則不合格。

培養(yǎng)后指示管不變色（呈紫色），表示滅菌通過。培養(yǎng)后指示管變色（呈黃色），表示滅菌不通過。同時培養(yǎng)的對照管應(yīng)為陽性（呈黃色）。

待高壓滅菌器內(nèi)壓力降至0、溫度降至規(guī)定要求再拿取物品，可帶上防高溫手袋避免燙傷。

電熱鼓風(fēng)干燥箱風(fēng)險及風(fēng)險控制措施

電熱鼓風(fēng)干燥箱風(fēng)險 滅菌時間不夠，滅菌不徹底可能導(dǎo)致培養(yǎng)皿污染空白長菌。高溫設(shè)備使用不當(dāng)可能導(dǎo)致燒傷、燙傷等危害。

風(fēng)險控制措施 制作電熱鼓風(fēng)干燥箱作業(yè)指導(dǎo)書，包含規(guī)范的操作流程和滅菌時間，避免安全事故的發(fā)生。

紫外燈風(fēng)險及風(fēng)險控制措施

紫外燈風(fēng)險 紫外燈未定期更換，超過使用壽命，可能導(dǎo)致滅菌效果不達(dá)標(biāo)。操作時未關(guān)閉紫外燈，長期紫外燈光照可能導(dǎo)致操作人員皮膚受損。

風(fēng)險控制措施 完善紫外燈使用記錄，定期更換，加強(qiáng)人員監(jiān)督力度。制作安全使用警示標(biāo)識貼在紫外燈開關(guān)明顯位置，提醒操作人員，操作前關(guān)閉紫外燈。

生物安全實驗室風(fēng)險及風(fēng)險控制措施

生物安全實驗室風(fēng)險 布局不合理，無菌室、陽性對照室、培養(yǎng)間未獨立開可能造成交叉污染。未安裝壓差表，可能無法保證生物安全實驗室潔凈度。

風(fēng)險控制措施 生物安全實驗室[4] 應(yīng)設(shè)置無菌室、陽性對照室、培養(yǎng)間等功能間，能有效降低感染率。生物安全實驗室應(yīng)安裝壓差表，通過壓力差控制氣流方向，保證生物安全實驗室潔凈度。

洗眼器風(fēng)險及風(fēng)險控制措施

洗眼器風(fēng)險 未安裝洗眼器，當(dāng)發(fā)生有害物質(zhì)噴濺眼睛或者面部時不能起到有效的保護(hù)措施。

風(fēng)險控制措施 在實驗室的適當(dāng)位置安裝洗眼器，當(dāng)發(fā)生有害物質(zhì)噴濺眼睛或者面部時第一時間提供水沖洗，降低傷害。

培養(yǎng)基使用風(fēng)險及風(fēng)險控制措施

培養(yǎng)基使用風(fēng)險 培養(yǎng)基未按規(guī)定進(jìn)行驗收，可能原料不合格導(dǎo)致菌種生長異常影響實驗結(jié)果;培養(yǎng)基未按要求的環(huán)境條件儲存，造成培養(yǎng)基受潮結(jié)塊可能影響產(chǎn)品質(zhì)量;培養(yǎng)基未按標(biāo)準(zhǔn)要求滅菌，導(dǎo)致培養(yǎng)基滅菌不徹底或者營養(yǎng)物質(zhì)受損影響菌種生長。

風(fēng)險控制措施 制作培養(yǎng)基驗收[5]記錄，包括外觀驗收、內(nèi)容物檢查、產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)驗收（包含所用的標(biāo)準(zhǔn)菌株的信息）;培養(yǎng)基、試劑應(yīng)按照相應(yīng)的儲存環(huán)境保存，并在儲存柜里放置溫濕度表，每天監(jiān)測溫濕度變化，保證儲存環(huán)境符合培養(yǎng)基、試劑的儲存要求;培養(yǎng)基應(yīng)按照規(guī)定的壓力、溫度、時間要求滅菌。

玻璃器皿、酒精燈風(fēng)險及風(fēng)險控制措施

玻璃器皿、酒精燈風(fēng)險 玻璃器皿破損，可能造成操作員手被劃傷;有裂紋的玻璃器皿高溫加熱可能炸裂造成安全事故。未規(guī)范使用酒精燈導(dǎo)致酒精濺灑遇明火燃燒造成火災(zāi)。

風(fēng)險控制措施 避免使用有缺口的玻璃儀器、操作前檢查玻璃器皿有無破損裂紋。操作時注意安全，避免劃傷。加熱玻璃器皿時拿取應(yīng)戴上隔熱手套。酒精燈的使用應(yīng)注意酒精濺灑，一旦濺灑燃燒可用濕布撲滅。燈內(nèi)酒精不易裝得太滿，避免外溢。

無菌室潔凈度風(fēng)險及風(fēng)險控制措施

無菌室潔凈度風(fēng)險 未定期做無菌室潔凈度驗證，潔凈度不達(dá)標(biāo)，導(dǎo)致樣品污染。

風(fēng)險控制措施 制作無菌室潔凈度驗證作業(yè)指導(dǎo)書，包括驗證的方法及頻次并做好相應(yīng)的記錄，定期做無菌室潔凈度驗證[6] ，如大于所設(shè)定的風(fēng)險值則應(yīng)分析原因，并采取適當(dāng)措施。

結(jié)論

生物安全問題已經(jīng)受到普遍的關(guān)注，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來越多的科學(xué)研究、醫(yī)療機(jī)構(gòu)、企業(yè)生產(chǎn)等行業(yè)涉及到生物安全問題。微生物實驗室的風(fēng)險評估和風(fēng)險控制是一個持續(xù)進(jìn)行的過程，以上分析的風(fēng)險因素可能存在評估不全面、不到位、防控措施待改進(jìn)等缺點，我們將在以后的評估中不斷完善改進(jìn)。

參考文獻(xiàn)

[1]GB 19489-2008 實驗室 生物安全通用要求[S]. 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會發(fā)布，2008.

[2]YY 0569-2011 Ⅱ級生物安全柜[S]. 國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布，2011.

[3]CNAS-CL01-A001檢測和校準(zhǔn)實驗室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明[S]. 中國合格評定國家認(rèn)可委員會發(fā)布，2018.

[4] GB 50346-2011 生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范[S].北京：中國建筑工業(yè)出版社，2011.

[5]GB 4789.28-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求[S].中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會發(fā)布，2013.

[6]GB/T 27405-2008 實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢測[S]. 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會發(fā)布，2008.

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