凌軍 孫勝南 陳劍明 胡武 劉春波 盧真保 楊乾栩 趙世興 楊洪明 黃艷

摘要：【目的】對(duì)比云南清甜香典型片煙和非典型碎煙間揮發(fā)性致香成分含量的差異，為研究云南清甜香煙葉風(fēng)格特色關(guān)鍵致香成分和低次煙葉深加工提供參考依據(jù)?！痉椒ā恳?個(gè)云南清甜香典型片煙和9個(gè)非典型碎煙為原料，運(yùn)用氣相色譜/質(zhì)譜法（GC/MS）和熱脫附—?dú)庀嗌V/質(zhì)譜法（ATD-GC/MS）分別對(duì)2類煙葉的揮發(fā)性致香成分進(jìn)行對(duì)比分析，并以典型片煙中揮發(fā)性成分相對(duì)含量顯著高于非典型碎煙作為分析目的，深入挖掘2類煙葉具有顯著性差異的揮發(fā)性致香成分，并找出2種方法分析結(jié)果存在的規(guī)律性?！窘Y(jié)果】運(yùn)用GC/MS對(duì)所制備的11個(gè)煙葉樣本揮發(fā)性致香成分進(jìn)行檢測(cè)分析，共鑒定出40種揮發(fā)性成分，包含17種酮類、10種醇類、4種醛類、5種雜環(huán)類、2種烯烴類、1種酸類和1種內(nèi)酯類化合物，典型片煙的酮類和內(nèi)酯類化合物相對(duì)含量明顯高于非典型碎煙;典型片煙有14種揮發(fā)性成分的相對(duì)含量顯著高于非典型碎煙（P<0.05，下同），分別是甲基庚烯酮、2-乙酰基呋喃、4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、β-大馬酮、β-紫羅蘭酮環(huán)氧化物、桉油烯醇、脫氫二氫-β-紫羅蘭酮、3，4-脫氫-β-紫羅蘭酮、巨豆三烯酮的4個(gè)同分異構(gòu)體、二氫獼猴桃內(nèi)酯和3-羥基-β-二氫大馬酮;通過(guò)ATD-GC/MS對(duì)2類煙葉樣本設(shè)定的14種重要致香成分進(jìn)行半定量對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)典型片煙的成分總含量明顯高于各非典型碎煙，而β-大馬酮、巨豆三烯酮的4個(gè)同分異構(gòu)體、二氫獼猴桃內(nèi)酯、3-羥基-β-二氫大馬酮和3-氧代-α-紫羅蘭醇這8種成分在典型片煙中的相對(duì)含量也顯著高于非典型碎煙。2種分析方法存在含量顯著性差異的致香成分中有7種致香成分一致，包括β-大馬酮、巨豆三烯酮的4個(gè)同分異構(gòu)體、二氫獼猴桃內(nèi)酯和3-羥基-β-二氫大馬酮。【結(jié)論】通過(guò)2種分析方法對(duì)云南清甜香典型片煙和非典型碎煙的揮發(fā)性致香成分進(jìn)行對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)2類煙葉間部分揮發(fā)性致香成分存在顯著性差異，且2種方法的分析結(jié)果存在一定的規(guī)律。

關(guān)鍵詞： 云南;清甜香;片煙;碎煙;揮發(fā)性致香成分;差異性分析

中圖分類號(hào)： S572? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2021）02-0374-11

Abstract：【Objective】By comparing the differences of volatile aroma components between typical tobacco strips and non-typical tobacco fines of Yunnan fresh-sweetness scent. The results could provide technical reference for the study of key aroma components in Yunnan fresh-sweetness scent tobacco leaves and deep processing of low-grade tobacco leaves.【Method】Two typical tobacco strips of Yunnan fresh-sweetness scent and nine non-typical tobacco fines were used as raw materials. The volatile aroma components of two kinds of tobacco leaves were analyzed comparatively by gas chromato-graphy/mass spectrometry（GC/MS） and automatic thermal desorption-gas chromatography/mass spectrometry（ATD-GC/ MS）. The relative content of volatile components in typical tobacco strips significantly higher than that in non-typical tobacco fines was chosen as the analysis purpose. The volatile aroma components with significant differences between the two types of tobacco leaves were deeply explored， and the regularity of the analysis results of the two methods was found.【Result】The volatile aroma components of 11 tobacco samples were analyzed comparatively by GC/MS. There were 40 volatile components in the samples， including 17 ketones， 10 alcohols， 4 aldehydes， 5 heterocyclic compounds， 2 alkenes， 1 acid and 1 lactone. In terms of the total relative content of various compounds， the ketones and lactones in typical tobacco strips were significantly higher than those in non-typical tobacco fines.It was found that the relative contents of 14 components in typical tobacco strips were significantly higher than those in non-typical tobacco fines（P<0.05， the same below）， which were 6-methyl-5-hepten-2-one， 2-acetylfuran，4-cyclopentene-1，3-dione，β-damascenone，β-ionone epoxide， spathulenol， dehydrodihydro-β-ionone， 3，4-dehydro-β-ionone， 4 isomers of megastigmatrienone， dihydroactinidiolide， 3-hydroxy-β-damascone. The 14 important aroma components of the samples were semi quantitative comparatively analyzed by ATD-GC/MS. It was found that the relative content of total components in typical tobacco strips was significantly higher than that in non-typical tobacco fines. The contents of β-damascenone， four isomers of megastigmatrienone， dihydroactinidiolide， 3-hydroxy-β-damascone， 3-oxo-α-ionol in typical tobacco strips were also significantly higher than those in non-typical tobacco fines. In addition， seven aroma components with significant difference between the two methods were consistent， including β-damascenone，four isomers of megastigmatrienone，dihydroactinidiolide and 3-hydroxy-β-damascone. 【Conclusion】The volatile aroma components of typical tobacco strips and non-typical tobacco fines with Yunnan fresh-sweetness scent are compared by two different analysis methods. The results show that there are significant differences in some volatile aroma components between the two types of tobacco leaves， and there are certain rules in the two analysis results.

Key words： Yunnan; fresh-sweetness scent; strips; fines; volatile aroma and flavor components; difference analysis

Foundation item： Yunnan Scientific Research and Technology Plan Project（2017ZE027）

0 引言

【研究意義】云南煙葉作為西南高原生態(tài)區(qū)清甜香型的代表，以干草香、清甜香和青香為主香韻，以蜜甜香、醇甜香、烘焙香、木香、酸香、焦香和木香為輔助香韻（羅登山等，2019），其優(yōu)良的香韻特征和感官質(zhì)量是生產(chǎn)中式卷煙無(wú)法替代的重要煙葉原料。煙葉通過(guò)打葉復(fù)烤工藝被加工成煙片和煙梗，在此過(guò)程中，由于機(jī)械外力的作用，會(huì)產(chǎn)生部分碎煙。根據(jù)碎煙的尺寸規(guī)格進(jìn)行分類利用，一般分為>6.4 mm、3.2～6.4 mm、0.8～3.2 mm和<0.8 mm 4個(gè)規(guī)格，尺寸規(guī)格細(xì)小的碎煙由于耐加工性較差，且含有一定比例的短梗和梗簽，無(wú)法達(dá)到作為葉組配方原料直接應(yīng)用的要求，一般用作煙草薄片原料和煙草提取物原料（陳家東等，2000;徐若飛等，2005）。因此，運(yùn)用分析方法對(duì)云南清甜香典型片煙和非典型碎煙間的揮發(fā)性成分進(jìn)行對(duì)比，發(fā)掘2類煙葉在揮發(fā)性成分含量方面的差異性和規(guī)律性，對(duì)研究云南清甜香煙葉風(fēng)格特色關(guān)鍵致香成分及非典型碎煙深加工具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】近年來(lái)，關(guān)于云南煙葉的研究主要集中在常規(guī)化學(xué)成分分析、化學(xué)成分與相關(guān)要素相關(guān)分析、致香成分與產(chǎn)區(qū)或煙葉品種的相關(guān)分析、感官評(píng)價(jià)等方面。敖金成等（2015）研究發(fā)現(xiàn)云南8個(gè)烤煙有機(jī)生態(tài)產(chǎn)區(qū)的初烤煙葉常規(guī)化學(xué)成分存在明顯差異，區(qū)域特征明顯聚為4類，煙葉整體的安全性較高;黃愛纓等（2015）研究發(fā)現(xiàn)，云南昭通10個(gè)植煙生態(tài)區(qū)的上、中部煙葉致香物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯高于下部煙葉，并指出等級(jí)（部位）是對(duì)煙葉致香物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)綜合影響最大的因素;陳長(zhǎng)清等（2017）研究表明，云南煙葉與津巴布韋煙葉在常規(guī)化學(xué)成分、中性致香成分和感官評(píng)價(jià)方面差異相對(duì)突出，通過(guò)以云南煙葉為基礎(chǔ)，配以國(guó)內(nèi)外不同地區(qū)和等級(jí)的煙葉可達(dá)到替代津巴布韋煙葉的效果;陳劍明等（2017）研究發(fā)現(xiàn)，不同類型的水溶性糖含量與云南主產(chǎn)煙區(qū)煙葉感官質(zhì)量各指標(biāo)存在一定的相關(guān)性，水溶性糖含量在一定程度上影響煙葉的感官質(zhì)量;侯英等（2017）研究表明，總體上云南不同產(chǎn)區(qū)的紅花大金元煙葉在化學(xué)成分和感官質(zhì)量上均具有較強(qiáng)的區(qū)域特征，但煙區(qū)不同導(dǎo)致煙葉各項(xiàng)化學(xué)指標(biāo)顯著的差異性和變異程度;高占勇等（2019）以2018年的石林紅花大金元和文山硯山K326 2個(gè)打煙后煙片為研究對(duì)象，在分析出的六大類共計(jì)67種揮發(fā)性致香成分中，有五大類合計(jì)66種成分的含量與煙片面積呈負(fù)相關(guān)對(duì)數(shù)型趨勢(shì)，且不同片型煙片的化學(xué)特性存在明顯差異;范幸龍等（2020）將云南4個(gè)生態(tài)區(qū)482份中部煙葉作為研究對(duì)象，通過(guò)逐步回歸分析顯示，糖堿比和氮堿比是影響滇東、西2個(gè)生態(tài)區(qū)煙氣綜合品質(zhì)的主要因素，鉀氯比則是影響滇中、西、南3個(gè)生態(tài)區(qū)煙氣綜合品質(zhì)的主要因素?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，關(guān)于云南煙葉不同產(chǎn)區(qū)、不同品種和不同等級(jí)間的對(duì)比分析以及云南煙葉與國(guó)內(nèi)外煙葉的對(duì)比研究均有報(bào)道，但未見云南清甜香典型片煙和非典型碎煙間揮發(fā)性致香成分的對(duì)比分析。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】運(yùn)用氣相色譜/質(zhì)譜法（GC/MS）和熱脫附—?dú)庀嗌V/質(zhì)譜法（ATD-GC/MS）分別對(duì)2類煙葉的揮發(fā)性致香成分進(jìn)行對(duì)比分析，并以典型煙葉中揮發(fā)性成分的相對(duì)含量顯著高于非典型碎煙作為分析目的，深入挖掘2類煙葉具有顯著性差異的揮發(fā)性致香成分，為云南煙葉在中式卷煙葉組配方和加香加料配方設(shè)計(jì)中的應(yīng)用，以及低次煙葉深加工方面提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

選取2個(gè)云南清甜香典型片煙煙葉，分別為紅河上部桔黃色1級(jí)煙葉（簡(jiǎn)稱紅河B1F，品種為K326，2014年）和文山/硯山中部桔黃色3級(jí)煙葉（簡(jiǎn)稱文山/硯山C3F，品種為K326，2016年）;非典型碎煙共9個(gè)，以產(chǎn)區(qū)和等級(jí)分為3組，分別為紅河碎煙組：紅河中部桔黃色3級(jí)煙葉、上部桔黃色3級(jí)煙葉和下部桔黃色2級(jí)煙葉（分別簡(jiǎn)稱為紅河C3F、紅河B3F和紅河X(jué)2F，品種為K326，2018年）;曲靖碎煙組：曲靖中部桔黃色3級(jí)煙葉、上部桔黃色3級(jí)煙葉和下部桔黃色2級(jí)煙葉（分別簡(jiǎn)稱為曲靖C3F、曲靖B3F和曲靖X2F，品種為云煙87，2018年）;石林碎煙組：石林中部桔黃色3級(jí)煙葉、上部桔黃色3級(jí)煙葉和下部桔黃色2級(jí)煙葉（分別簡(jiǎn)稱為石林C3F、石林B3F和石林X2F，品種為紅花大金元，2018年）。煙葉樣品由云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司提供。乙醇（食用級(jí)）購(gòu)自中山市華士達(dá)生物科技有限公司。主要儀器設(shè)備：煙葉切絲機(jī)QS-1（開封捷利美嘉機(jī)械設(shè)備有限公司）、中藥磨粉機(jī)JYS-M01（杭州九陽(yáng)小家電有限公司）、冷凍離心機(jī)DL-6M（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）、旋轉(zhuǎn)濃縮器（上海申生科技有限公司）、熱脫附TurboMatrix 650 ATD（美國(guó)PerkinElmer公司）和HP 7890GC-5977MS氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫公司）。

1. 2 GC/MS分析煙葉揮發(fā)性致香成分

1. 2. 1 煙葉揮發(fā)性致香成分制備工藝流程 煙葉→切絲、粉碎、過(guò)篩→稱取煙絲→水蒸氣蒸餾→有機(jī)溶劑萃取→濃縮→快速層析分離→乙醇萃取→濃縮。將2個(gè)清甜香典型片煙煙葉和9個(gè)非典型碎煙分別按此工藝流程得到煙葉揮發(fā)性致香成分，每個(gè)煙葉樣本平行進(jìn)行3次試驗(yàn)。

1. 2. 2 GC/MS分析測(cè)定條件 GC條件：色譜柱HP-INNOWAX（30 m×250 μm×0.25 μm）;進(jìn)樣口溫度250 ℃;載氣為氮?dú)?柱溫箱為程序升溫，起始溫度40 ℃保持1 min，以1.5 ℃/min升至160 ℃保持5 min，以3 ℃/min升至250 ℃并保持10 min;分流比5∶1;橫流模式，流速5.0 mL/min。

MS條件：離子源溫度250 ℃;四級(jí)桿溫度150 ℃;EI離子源70 eV;質(zhì)量掃描范圍30～490 amu;采用NIST14進(jìn)行檢索。

1. 3 ATD-GC/MS分析煙葉中重要揮發(fā)性致香成分

選擇14種重要揮發(fā)性致香成分作為分析對(duì)象，包括茄酮、β-二氫大馬酮、β-大馬酮、香葉基丙酮、苯甲醇、苯乙醇、β-紫羅蘭酮、巨豆三烯酮4個(gè)同分異構(gòu)體、二氫獼猴桃內(nèi)酯、3-羥基-β-二氫大馬酮和3-氧代-α-紫羅蘭醇。這些致香成分對(duì)煙葉或卷煙的香氣特色及感官質(zhì)量影響顯著，且在煙用香精香料的開發(fā)上廣為應(yīng)用（閆克玉，2002）。

1. 3. 1 ATD-GC/MS分析前處理工藝 煙葉樣本切絲，40 ℃下烘干2 h，磨粉過(guò)篩后得60目規(guī)格煙末。熱脫附管用熱脫附儀進(jìn)行老化后，加入干凈的玻璃棉，然后稱取煙末樣品0.0200 g置于熱脫附管中，再塞入干凈玻璃棉堵住煙末上方;用微量注射器吸取5 μL濃度約0.015%的煙酸甲酯內(nèi)標(biāo)溶液，注射至煙末上，每個(gè)煙葉樣本平行進(jìn)行3次試驗(yàn)。

1. 3. 2 ATD-GC/MS分析測(cè)定條件 熱脫附ATD條件：一級(jí)脫附（樣品脫附）溫度100 ℃，脫附時(shí)間15 min;脫附流量45.0 mL/min;吸附阱溫度-30 ℃;二級(jí)脫附（吸附阱脫附）溫度300 ℃，脫附時(shí)間2 min;進(jìn)樣壓力103.425 kPa。

GC條件：色譜柱HP-INNOWAX（30 m×250 μm×0.25 μm）;載氣為氦氣;恒壓模式103.425 kPa;分流比1∶20;柱溫箱為程序升溫，起始溫度50 ℃保持3 min，以3 ℃/min升至200 ℃，以20 ℃/min升至220 ℃并保持10 min[。]

MS條件：傳輸線溫度240 ℃;EI離子源70 eV;離子源溫度230 ℃;四級(jí)桿溫度150 ℃;檢測(cè)模式選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）;溶劑延遲18 min。

1. 4 統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2010對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和統(tǒng)計(jì)，SPSS 18.0進(jìn)行顯著性差異分析。顯著性差異分析著重分析各煙葉組之間的差異，在每個(gè)煙葉樣本的3組平行分析結(jié)果中隨機(jī)挑選1組數(shù)據(jù)，各碎煙組分別由同產(chǎn)地3個(gè)不同部位碎煙的隨機(jī)1組分析數(shù)據(jù)組成，而典型片煙組僅有2個(gè)煙葉，因此在2個(gè)典型片煙的各自3組平行分析結(jié)果中隨機(jī)挑選1組分析數(shù)據(jù)后，在剩余4組分析結(jié)果中再隨機(jī)選擇1組分析數(shù)據(jù)，保證顯著性差異分析中典型片煙組和非典型碎煙組均有3組分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2. 1 云南清甜香典型片煙和非典型碎煙揮發(fā)性致香成分GC/MS分析結(jié)果

對(duì)11個(gè)煙葉樣本的揮發(fā)性致香成分進(jìn)行GC/MS分析，各樣本揮發(fā)性致香成分的總離子流見圖1～圖4。在成分鑒定的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)化合物種類沒(méi)有明顯差異，在保證盡可能地鑒定出揮發(fā)性致香成分中所有揮發(fā)性成分的基礎(chǔ)上，同時(shí)剔除掉無(wú)效峰和干擾峰，確定53個(gè)有效峰進(jìn)行鑒定，從11個(gè)煙葉樣本鑒定出共有的40個(gè)化合物（表1）。其中，酮類化合物種類最多，達(dá)17種，醇類化合物10種，醛類化合物4種，雜環(huán)類化合物5種（包括煙堿），烯烴類化合物2種，酸類和內(nèi)酯類化合物各1種。在鑒定出的化合物類型中，醇類和酮類化合物數(shù)量之和占總化合物數(shù)量的60%以上。

在11個(gè)煙葉樣本的揮發(fā)性致香成分中，相對(duì)含量較高的致香成分（相對(duì)含量平均值>1.000%）有茄酮（6.188%）、β-大馬酮（2.947%）、巨豆三烯酮I（1.518%）、巨豆三烯酮II（6.546%）、巨豆三烯酮III（1.121%）、巨豆三烯酮IV（5.365%）、苯甲醇（4.175%）、苯乙醇（2.120%）、二氫-β-紫羅蘭醇（1.050%）、西柏三烯二醇（12.677%）、糠醛（1.287%）、苯乙醛（2.205%）、煙堿（20.354%）、2-乙?；量?.103%）、吲哚（1.215%）和二氫獼猴桃內(nèi)酯（1.050%）。其中，西柏三烯二醇和煙堿的相對(duì)含量平均值最高，均超過(guò)10.000%;巨豆三烯酮的4個(gè)同分異構(gòu)體相對(duì)含量平均值也均超過(guò)1.000%，且相對(duì)含量平均值總和達(dá)14.550%。

由表1可看出，2個(gè)典型片煙中的酮類化合物相對(duì)含量較突出，分別達(dá)46.073%和45.188%，而9個(gè)非典型碎煙的酮類化合物相對(duì)含量均未超過(guò)30.000%;醇類和醛類化合物相對(duì)含量方面，典型片煙和非典型碎煙差異較小;烯烴類和酸類化合物種類較少，2類煙葉的總相對(duì)含量差異也不明顯。在雜環(huán)類化合物相對(duì)含量方面，2個(gè)典型片煙分別為5.896%和8.242%，9個(gè)非典型碎煙為16.067%～37.323%，然而將其中的煙堿去除后，典型片煙和非典型碎煙在總相對(duì)含量上差異不明顯，這也突出了典型片煙的煙堿相對(duì)含量明顯低于非典型碎煙的情況。此外，11個(gè)煙葉樣本揮發(fā)性致香成分中共有的內(nèi)酯類化合物——二氫獼猴桃內(nèi)酯，2個(gè)典型片煙的相對(duì)含量也明顯高于9個(gè)非典型碎煙。

2. 2 云南清甜香典型片煙和非典型碎煙揮發(fā)性致香成分相對(duì)含量顯著性差異分析結(jié)果

通過(guò)對(duì)云南清甜香典型片煙和非典型碎煙進(jìn)行GC/MS分析（表1）可知，在已鑒定出的40種揮發(fā)性成分中，典型片煙的大部分成分相對(duì)含量高于或接近非典型碎煙，為深入發(fā)掘2類煙葉揮發(fā)性成分相對(duì)含量的差異性，運(yùn)用SPSS 18.0對(duì)2類煙葉揮發(fā)性致香成分的GC/MS分析結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，并以典型片煙中揮發(fā)性成分相對(duì)含量顯著高于非典型碎煙作為分析目的，結(jié)果見表2。

從表2可看出，典型片煙中有14種揮發(fā)性致香成分含量均顯著高于非典型碎煙（P<0.05，下同）;其中有10種揮發(fā)性致香成分在3組非典型碎煙之間無(wú)顯著差異（P>0.05，下同），分別為甲基庚烯酮、4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、β-大馬酮、β-紫羅蘭酮環(huán)氧化物、脫氫二氫-β-紫羅蘭酮、3，4-脫氫-β-紫羅蘭酮、巨豆三烯酮I、巨豆三烯酮IV、二氫獼猴桃內(nèi)酯和3-羥基-β-二氫大馬酮;而2-乙酰基呋喃在石林碎煙中的相對(duì)含量顯著高于曲靖碎煙，曲靖碎煙的相對(duì)含量顯著高于紅河碎煙;桉油烯醇在紅河碎煙中的相對(duì)含量顯著高于曲靖碎煙，但石林碎煙的相對(duì)含量與紅河和曲靖碎煙無(wú)顯著差異;對(duì)于巨豆三烯酮II，石林碎煙的相對(duì)含量顯著高于紅河和曲靖碎煙，但后兩者間無(wú)顯著差異;對(duì)于巨豆三烯酮III，石林碎煙的相對(duì)含量顯著高于曲靖碎煙，但紅河碎煙的相對(duì)含量與石林和曲靖碎煙無(wú)顯著差異。

2. 3 云南清甜香典型片煙和非典型碎煙重要致香成分半定量分析結(jié)果

運(yùn)用ATD-GC/MS對(duì)11個(gè)煙葉樣本的14種重要致香成分進(jìn)行半定量分析，結(jié)果（表3）顯示，紅河片煙和文山/硯山片煙在14種重要致香成分的總含量上差異較小，而各致香成分的相對(duì)含量各有高低，由于紅河片煙和文山/硯山片煙在煙葉產(chǎn)區(qū)、部位和年份上存在差異，導(dǎo)致在這些重要致香成分的相對(duì)含量上未發(fā)現(xiàn)明顯規(guī)律。而在3組相同產(chǎn)區(qū)不同部位的非典型碎煙分析結(jié)果中，致香成分的相對(duì)含量大多表現(xiàn)為中部煙>上部煙>下部煙的趨勢(shì)，3組非典型碎煙同時(shí)顯示這種趨勢(shì)的揮發(fā)性致香成分有β-紫羅蘭酮、巨豆三烯酮I、巨豆三烯酮II、巨豆三烯酮IV、二氫獼猴桃內(nèi)酯和3-氧代-α-紫羅蘭醇，2組碎煙同時(shí)具有這種趨勢(shì)的致香成分有β-二氫大馬酮、β-大馬酮、巨豆三烯酮III和苯乙醇。此外，3組非典型碎煙的14種致香成分相對(duì)含量總和也表現(xiàn)為中部煙>上部煙>下部煙的趨勢(shì)。

2. 4 云南清甜香典型片煙和非典型碎煙重要致香成分半定量含量顯著性差異分析結(jié)果

為進(jìn)一步了解2類煙葉的14種致香成分在ATD-GC/MS分析方法中的含量對(duì)總量差異的影響，以及驗(yàn)證2.2中揮發(fā)性致香成分相對(duì)含量的差異性分析結(jié)果，同樣利用SPSS 18.0對(duì)云南清甜香典型片煙和非典型碎煙重要致香成分的ATD-GC/MS分析結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以典型片煙中顯著高于非典型碎煙的揮發(fā)性成分相對(duì)含量作為分析目的，分析結(jié)果見表4。

由表4可看出，在設(shè)定的14種重要致香成分中，典型片煙有8種揮發(fā)性致香成分含量顯著高于3組非典型碎煙，且3組非典型碎煙之間無(wú)顯著差異，包括β-大馬酮、巨豆三烯酮的4個(gè)同分異構(gòu)體、二氫獼猴桃內(nèi)酯、3-羥基-β-二氫大馬酮和3-氧代-α-紫羅蘭醇。這些成分作為煙草中有代表性的重要揮發(fā)性致香成分，在一定程度上證明云南清甜香典型片煙與非典型碎煙在致香成分上存在差異性，而這8個(gè)顯著差異性成分中有7個(gè)與2.2中揮發(fā)性致香成分相對(duì)含量存在顯著性差異的成分一致，僅3-氧代-α-紫羅蘭醇除外，而該成分未在2.1揮發(fā)性致香成分的分析中鑒定出來(lái)，可能與揮發(fā)性致香成分的制備工藝有關(guān)。

3 討論

香氣是衡量烤煙煙葉品質(zhì)的核心內(nèi)容之一，而烤煙煙葉的香氣主要來(lái)源于烤煙中的致香成分。煙草中的重要致香成分按照官能團(tuán)進(jìn)行分類包括酮類、醇類、酸類、醛類、酚類和烯烴類等化合物（倪弋婷等，2013），有研究表明酮類和醇類化合物是煙草中最重要的致香組分（宣曉泉等，2007），因此本研究將云南清甜香典型片煙和非典型碎煙共計(jì)11個(gè)煙葉樣本通過(guò)設(shè)計(jì)的工藝流程，制備出以酮類和醇類化合物為主的揮發(fā)性致香成分，并通過(guò)GC/MS對(duì)所制備的揮發(fā)性致香成分進(jìn)行分析。在已鑒定的40種共有揮發(fā)性成分中，2個(gè)典型片煙和9個(gè)非典型碎煙均以酮類和醇類化合物為主，兩者數(shù)量之和占總化合物數(shù)量的60%以上，達(dá)到了揮發(fā)性致香成分設(shè)計(jì)工藝的目的。烤煙煙葉中的重要致香成分按照香氣前體物分類法分成4類，分別為類胡蘿卜素類、類西柏烷類、苯丙氨酸類和棕色化反應(yīng)類化合物。本研究中ATD-GC/MS分析所設(shè)定的14種致香成分均為其中的代表性重要香氣物質(zhì)，這些成分也是煙葉中重要致香成分的研究熱點(diǎn)（李偉等，2013;堯珍玉等，2017;董惠忠等，2019）。其中，β-二氫大馬酮、β-大馬酮、香葉基丙酮、β-紫羅蘭酮、巨豆三烯酮、二氫獼猴桃內(nèi)酯、3-羥基-β-二氫大馬酮和3-氧代-α-紫羅蘭醇屬于類胡蘿卜素代表性的降解香氣產(chǎn)物，選擇多種該類香氣成分作為研究對(duì)象是因?yàn)轭惡}卜素降解香氣產(chǎn)物對(duì)煙葉的香氣影響較大（劉金霞等，2011;史宏志等，2012）;而茄酮是類西柏烷類化合物中的重要香氣物質(zhì)，苯甲醇和苯乙醇則是苯丙氨酸類化合物代表香氣物質(zhì)。由于棕色化反應(yīng)較復(fù)雜，部分反應(yīng)機(jī)理尚未明確（景延秋等，2005），因此本研究未選擇棕色化反應(yīng)類的香氣物質(zhì)作為研究對(duì)象。

非典型碎煙在卷煙適用性方面屬于低次煙葉，低次煙葉香氣差，雜氣明顯，吃味和余味均較差，無(wú)法直接在卷煙葉組配方中使用的同時(shí)，還造成一定的庫(kù)存和環(huán)境污染壓力（王建兵等，2017;陸炳祥和張德祥，2019）。而在內(nèi)在成分方面，有研究表明，低次煙葉和典型片煙在致香成分種類上差異不明顯，僅在含量方面存在一定差異，低次煙葉感官品質(zhì)較差主要是由于低次煙葉身份薄，油分少，內(nèi)在化學(xué)成分比例不協(xié)調(diào)（邱承宇等，2002;瞿先中等，2014）。為驗(yàn)證和探索典型片煙和非典型碎煙在致香成分上的差異，本研究著重結(jié)合2種分析方法的結(jié)果進(jìn)行致香成分含量方面的顯著性差異分析。

運(yùn)用SPSS 18.0對(duì)2類煙葉揮發(fā)性致香成分的GC/MS結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)典型片煙有14種揮發(fā)性香氣成分的相對(duì)含量顯著高于非典型碎煙，包括甲基庚烯酮、2-乙?；秽?、4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、β-大馬酮、β-紫羅蘭酮環(huán)氧化物、桉油烯醇、脫氫二氫-β-紫羅蘭酮、3，4-脫氫-β-紫羅蘭酮、巨豆三烯酮的4個(gè)同分異構(gòu)體、二氫獼猴桃內(nèi)酯和3-羥基-β-二氫大馬酮;針對(duì)11個(gè)煙葉樣本進(jìn)行ATD-GC/MS分析，在設(shè)定的14種重要致香成分的半定量分析結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)典型片煙的成分總含量明顯高于各非典型碎煙，而β-大馬酮、巨豆三烯酮的4個(gè)同分異構(gòu)體、二氫獼猴桃內(nèi)酯、3-羥基-β-二氫大馬酮和3-氧代-α-紫羅蘭醇這8種成分在典型片煙上顯著高于非典型碎煙。這與部分學(xué)者研究不同尺寸片煙內(nèi)在致香成分含量的差異性分析結(jié)果具有一致性。劉超等（2018）在對(duì)打葉后不同尺寸濃香型片煙的分析中發(fā)現(xiàn)，尺寸25.40～42.00 mm片煙的大部分中性致香成分含量及總量均為最高，尺寸2.36～6.35 mm的片煙相比高于該尺寸的片煙，除新植二烯之外的各類中性致香成分含量及總量均為最低。而本研究所篩選的云南清甜香典型片煙和非典型碎煙分別屬于25.40～42.00和2.36～6.35 mm的尺寸范圍內(nèi)，研究結(jié)果的一致性也表明片煙尺寸不同是影響片煙內(nèi)在化學(xué)成分差異的重要因素之一。

11個(gè)煙葉樣本揮發(fā)性致香成分GC/MS分析與重要致香成分ATD-GC/MS分析的成分含量差異存在較顯著的一致性，2種分析方法中存在含量顯著性差異的致香成分分別有14種和8種，其中有7種致香成分一致，分別為β-大馬酮、巨豆三烯酮的4個(gè)同分異構(gòu)體、二氫獼猴桃內(nèi)酯和3-羥基-β-二氫大馬酮。說(shuō)明分析方法建立的合理性，也基本達(dá)到預(yù)定的分析目的，更佐證了2種分析方法均呈現(xiàn)含量顯著差異性的7種致香成分的重要性，在一定程度上可作為影響典型和非典型煙葉特征香韻與感官品質(zhì)的重要致香成分。

此外，在ATD-GC/MS的重要致香成分半定量分析結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)各組同產(chǎn)區(qū)非典型碎煙存在致香成分含量以中部煙>上部煙>下部煙的趨勢(shì)，其中3組碎煙同時(shí)存在這種趨勢(shì)的致香成分有6種，2組碎煙同時(shí)存在這種趨勢(shì)的致香成分有4種，且3組碎煙的14種致香成分含量總和也同樣表現(xiàn)出該趨勢(shì)，與王東山等（2005）對(duì)云南保山不同等級(jí)煙葉重要香味物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析發(fā)現(xiàn)巨豆三烯酮的4個(gè)同分異構(gòu)體及醇類、酮類化合物的總含量存在中部煙>上部煙>下部煙的趨勢(shì)，周桂園等（2014）對(duì)云南主產(chǎn)煙區(qū)不同煙葉致香成分含量進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)紅大煙葉的苯丙氨酸類含量和NC297煙葉的致香成分總含量、類西柏烷類及苯丙氨酸類含量出現(xiàn)中部煙>上部煙>下部煙的趨勢(shì)一致，但也存在一些差別，可能是由于在研究中針對(duì)的煙葉樣本和運(yùn)用的分析方法不同所造成的。但在一定程度上共同佐證了煙葉部位是影響煙葉中致香成分含量差異的重要因素之一。

本研究開展云南清甜香典型片煙和非典型碎煙間揮發(fā)性致香成分的對(duì)比分析，從中找到2類煙葉間具有差異性和規(guī)律性的揮發(fā)性致香成分，下一步可在此基礎(chǔ)上有針對(duì)性地增加煙葉樣本范圍和分析方法的多樣性，深入研究云南各類型煙葉的內(nèi)在致香成分的差異和規(guī)律，對(duì)云南清甜香煙葉致香機(jī)理的研究具有一定的參考意義，也可為低次煙葉的深加工和價(jià)值提升提供基礎(chǔ)研究方面的技術(shù)信息。

4 結(jié)論

通過(guò)GC/MS和ATD-GC/MS對(duì)云南清甜香典型片煙和非典型碎煙的揮發(fā)性致香成分進(jìn)行差異性分析，發(fā)現(xiàn)2類煙葉間部分揮發(fā)性致香成分存在顯著性差異，且2種方法的分析結(jié)果存在一定的規(guī)律，可為云南煙葉清甜香韻致香機(jī)理研究和非典型碎煙的深加工再利用提供一定的技術(shù)參考。

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（責(zé)任編輯 羅 麗）