邢海燕

(池州市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽 池州 247000)

罌粟堿在臨床上主要用于緩解伴有動(dòng)脈痙攣的大腦及外周血管疾病，可治療腦血栓、肺栓塞、肢端動(dòng)脈痙攣及動(dòng)脈栓塞性疼痛等疾病。那可丁和蒂巴因都能從罌粟屬植物鴉片中提取得到。那可丁為支氣管解痙性鎮(zhèn)咳藥，其作用與罌粟堿相似；蒂巴因的藥理作用與嗎啡相反，它的痙攣毒性超過(guò)麻醉作用。可待因是一種鴉片類藥物，可用于鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜，長(zhǎng)期應(yīng)用亦可產(chǎn)生耐受性、成癮性。嗎啡為阿片受體激動(dòng)劑，是臨床解除劇烈疼痛的主要藥物，其最大缺點(diǎn)是易成癮，這使得長(zhǎng)期吸食者無(wú)論從身體上還是心理上都會(huì)對(duì)嗎啡產(chǎn)生嚴(yán)重的依賴性，導(dǎo)致嚴(yán)重的毒物癖，從而對(duì)自身和社會(huì)均造成極大的危害。這五種生物堿都屬于精神藥物。《中華人民共和國(guó)食品安全法》明確規(guī)定：“不得在食品生產(chǎn)中使用食品添加劑以外的化學(xué)物質(zhì)和其他可能危害人體健康的物質(zhì)。”食品中禁止添加罌粟堿、那可丁、蒂巴因、可待因、嗎啡，但是依然有不法商家為了利潤(rùn)鋌而走險(xiǎn)，在火鍋底料、鹵味、麻辣燙等食品中非法添加這類物質(zhì)，對(duì)消費(fèi)者的身體健康造成極大危害。

目前，人們?cè)絹?lái)越重視食品安全問(wèn)題，針對(duì)罌粟堿、那可丁、蒂巴因、可待因、嗎啡等生物堿的檢測(cè)建立了比色法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法、液質(zhì)串聯(lián)法等方法。其中，液相-質(zhì)譜串聯(lián)法具有分離能力強(qiáng)、分析范圍廣、定性分析結(jié)果可靠、檢測(cè)限低等優(yōu)勢(shì)。由于食品樣品基質(zhì)復(fù)雜，本研究選擇火鍋底料和半固體調(diào)味料這兩種具有代表性且成分復(fù)雜的基質(zhì)驗(yàn)證和優(yōu)化檢驗(yàn)方法。

1 材料

1.1 主要儀器

1290II/6470A三重四極桿液相-色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，HC-3018高速離心機(jī)，KQ5200DE超聲波清洗器，JA3103N分析天平(精確到0.001 g)，粉碎機(jī)，XW-80A微型渦旋混合器。

1.2 主要試劑

甲醇、乙腈、甲酸、甲酸銨，均為色譜純；鹽酸、無(wú)水醋酸鈉、無(wú)水硫酸鎂，均為分析純；水為符合GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。

1.3 儀器條件

1.3.1 液相條件

色譜柱：BEH HILIC色譜柱(Waters，粒徑1.7 μm，2.1 mm×100 mm)；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：25 ℃；柱流速：0.3 mL/min；流動(dòng)相：A相為含0.1%甲酸的甲酸銨溶液(甲酸銨濃度為5 mmol/L)，B相為含0.1%甲酸的乙腈溶液。按表1的程序進(jìn)行梯度洗脫。

表1 液相梯度洗脫程序

續(xù)表1:

1.3.2 質(zhì)譜條件

離子化方式：電噴霧電離；

掃描方式：正離子掃描；

檢測(cè)方式：MRM多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。

質(zhì)譜優(yōu)化后的方法條件具體見(jiàn)表2(帶*為定量離子)。

表2 7種化合物的定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、裂解電壓及碰撞能量

2 方法和結(jié)果

2.1 樣品QuEChERS前處理

稱取試樣2 g(精確至0.01 g)于50 mL帶塞離心管中，加入60 μL 5.0 μg/mL的同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液，液體樣品和半固體樣品可加入2 mL水，固體樣品加入5 mL鹽酸溶液。渦旋振蕩40 s，然后準(zhǔn)確加入乙腈15 mL，蓋緊管塞，渦旋振蕩1 min，再超聲30 min 后取出。將6 g無(wú)水硫酸鎂和1.5 g無(wú)水醋酸鈉的混合粉末加入離心管，立即渦旋振蕩 3 min，以吸附樣品中的全部水分，以5000 r/min轉(zhuǎn)速離心4 min，取上清液過(guò)0.22 μm的濾膜。取 1 mL續(xù)濾液進(jìn)樣，用于測(cè)定可待因、嗎啡兩種化合物；準(zhǔn)確吸取500 μL續(xù)濾液至10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，混勻后進(jìn)樣，用于測(cè)定那可丁、蒂巴因、罌粟堿三種化合物。選取不含五種生物堿的火鍋底料、半固體調(diào)味料作為空白樣品基質(zhì)，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)，用于計(jì)算加標(biāo)回收率。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別吸取相應(yīng)體積的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(那可丁、蒂巴因和罌粟堿的濃度為10 μg/mL，嗎啡和可待因的濃度為50 μg/mL)于10 mL容量瓶中，用乙腈定容配制成所需的標(biāo)準(zhǔn)系列。那可丁、罌粟堿和蒂巴因的濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10、20 ng/mL；可待因和嗎啡的濃度分別為2.5、5.0、10、20、50、100 ng/mL。

嗎啡-D3同位素和可待因-D3同位素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為5.0 μg/mL，在標(biāo)準(zhǔn)系列中內(nèi)標(biāo)溶液濃度為20 ng/mL。

2.3 測(cè)定

2.3.1 定性測(cè)定

在相同的實(shí)驗(yàn)條件下分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液。如果樣品溶液中檢出的色譜峰保留時(shí)間和相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰的保留時(shí)間一致，并且樣品溶液的質(zhì)譜離子對(duì)相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)譜離子對(duì)相對(duì)豐度相比較，相對(duì)離子豐度(k)允許的相對(duì)偏差在表3規(guī)定的范圍內(nèi)，即可以判定此樣品中存在該組分。

表3 定性測(cè)定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差范圍

2.3.2 定量測(cè)定

取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣，以那可丁、蒂巴因和罌粟堿三種化合物的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，以那可丁、蒂巴因和罌粟堿三種化合物的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，采用外標(biāo)法定量；以可待因和嗎啡的峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值作為縱坐標(biāo)，以可待因和嗎啡的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，采用內(nèi)標(biāo)法定量。

2.4 分析結(jié)果

2.4.1 五種化合物的提取離子質(zhì)譜圖

在上述的色譜和質(zhì)譜條件下，五種化合物的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)提取離子質(zhì)譜圖見(jiàn)圖1—圖5。

圖1 罌粟堿提取離子質(zhì)譜圖

圖2 那可丁提取離子質(zhì)譜圖

圖3 蒂巴因提取離子質(zhì)譜圖

圖4 嗎啡提取離子質(zhì)譜圖

圖5 可待因提取離子質(zhì)譜圖

2.4.2 五種化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線

五種化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)表4。

表4 五種化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4.3 加標(biāo)回收結(jié)果

五種化合物的加標(biāo)回收結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 加標(biāo)回收結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

以火鍋底料為空白基質(zhì)時(shí)，罌粟堿、那可丁、蒂巴因的加標(biāo)回收率為74.0%～102.3%，嗎啡、可待因的加標(biāo)回收率為75.7%～103.8%，均在回收率為75%～120%的準(zhǔn)確度范圍內(nèi)。以半固體調(diào)味料為空白基質(zhì)時(shí)，罌粟堿、那可丁、蒂巴因的加標(biāo)回收率為75.0%～93.2%，嗎啡、可待因的加標(biāo)回收率為76.8%～105.9%，均在回收率為65%～120%的準(zhǔn)確度范圍內(nèi)。

火鍋底料和半固體調(diào)味料中的脂肪和鹽含量高，添加成分多，基質(zhì)復(fù)雜。本文中的QuEChERS前處理方法，操作簡(jiǎn)便，通過(guò)加標(biāo)回收率驗(yàn)證，能夠滿足準(zhǔn)確度的要求。