何瓊 吳龍波 王志華 杜軍 王鈺婷

作者單位：安徽省廬江縣人民醫(yī)院病理科，安徽，合肥231500

肺腺癌（Lung adenocarcinoma cells，LAC）是非小細(xì)胞肺癌常見亞型之一，發(fā)生率約占肺癌總?cè)藬?shù)的50.0%，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，喪失手術(shù)治療最佳時(shí)機(jī)，療效及生存率均較低［1?2］。近年來，隨分子生物學(xué)及肺癌驅(qū)動(dòng)基因不斷深入，以特定分子為靶點(diǎn)的靶向治療成為臨床研究熱點(diǎn)。肉瘤致癌因子?受體酪氨酸激酶（c?ros oncogene 1，receptor tyrosine kinase，ROS1）異常表達(dá)可持續(xù)傳遞生長(zhǎng)增殖信號(hào)，異常增殖癌細(xì)胞。間變性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）屬胰島素受體家族，利用基因重排，可刺激下游信號(hào)通路表達(dá)，增加癌變風(fēng)險(xiǎn)［3］。表皮生長(zhǎng)因子受體（Epi?dermal growth factor receptor，EGFR）作為肺癌驅(qū)動(dòng)基因，與EGF 等配體結(jié)合，可誘導(dǎo)正常細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，提高癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力［4］?；诖耍狙芯繃L試分析LAC 病理特征及EGFR基因突變、ROS1、ALKmRNA 在LAC 組織中的表達(dá)和臨床意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2016年7月至2020年1月安徽省廬江縣人民醫(yī)院經(jīng)手術(shù)病理檢查確診的83 例LAC 患者，收集癌組織及癌旁正常組織標(biāo)本，其中女46 例，男37 例，年齡平均（63.21±6.37）歲，吸煙23 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合《2011 IASLC/ATS/ERS 肺腺癌國(guó)際多學(xué)科分類》［5］中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，并均經(jīng)手術(shù)病理檢查證實(shí)為L(zhǎng)AC；②預(yù)計(jì)生存期>6 個(gè)月；③有足夠質(zhì)量與數(shù)量甲醛固定的石蠟包埋組織切片可供分析。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近3 個(gè)月內(nèi)有放化療治療史者；②合并肝腎等其他重要臟器功能障礙者；③合并心源性休克、永久性心臟內(nèi)傳導(dǎo)紊亂等嚴(yán)重心腦血管疾病者；④伴有明顯出血傾向者；⑤昏迷或精神行為異常者。本院倫理委員會(huì)經(jīng)審核評(píng)議同意本研究，所有研究對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 方法

取病理科手術(shù)切除的LAC 癌組織及距癌邊緣6 cm 以內(nèi)癌旁正常組織，常規(guī)石蠟包埋，切片（厚度約為8 μm），蘇木精?伊紅染色后，顯微鏡下對(duì)癌組織區(qū)域進(jìn)行標(biāo)記，常規(guī)二甲苯無水乙醇脫蠟水化。通過Quant Studio5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀以實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（real?time quanti?tative reverse transcriptase?polymerase chain reac?tion，RT?PCR）技術(shù)檢測(cè)EGFR基因突變，嚴(yán)格按照廈門艾德公司提供提供的試劑盒說明書操作。通過熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridiza?tion，F(xiàn)ISH）檢測(cè)ALK、ROS1基因融合，嚴(yán)格按照武漢康錄公司提供的試劑盒說明書操作。依據(jù)突變Ct 值判定檢測(cè)結(jié)果，標(biāo)準(zhǔn)如下［6］：Ct 值<26 為陽性，26≤Ct 值<29 為弱陽性，Ct 值≥29 為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0 處理數(shù)據(jù)；計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；采用Cox 回歸分析LAC 患者1年病死影響因素；卡普蘭?邁耶曲線（Kaplan?Meier，K?M）分析EGFR基因突變、ROS1、ALK mRNA表達(dá)對(duì)LAC1年病死的影響，Log?Rank 檢驗(yàn)不同EGFR基因突變、ROS1、ALK mRNA表達(dá)LAC 患者1年病死率差異性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織與癌旁正常組織EGFR 基因突變、ROS1、ALK mRNA 比較

癌組織EGFR基因突變、ROS1、ALKmRNA 陽性表達(dá)率均高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 癌組織與癌旁正常組織EGFR 基因突變、ROS1、ALK mRNA 比較［n（%）］Table 1 Comparison of EGFR gene mutation，ROS1 and ALK mRNA between cancer tissues and adjacent normal tissues［n（%）］

2.2 不同病理特征患者EGFR 基因突變、ROS1、ALK mRNA 陽性表達(dá)

LAC 患者癌組織內(nèi)EGFR基因突變、ROS1、ALKmRNA陽性表達(dá)率在臨床分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在性別、年齡、吸煙史、病灶大小方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

表2 不同病理特征患者EGFR 基因突變、ROS1、ALK mRNA 比較［n（%）］Table 2 Comparison of EGFR gene mutation，ROS1 and ALK mRNA in patients with different pathological features［n（%）］

2.3 LAC 患者1年病死情況

不同臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、EGFR基因突變、ROS1、ALKmRNA 表達(dá)患者1年病死率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

表3 LAC 患者1年病死情況［n（%）］Table 3 One year mortality of LAC patients［n（%）］

2.4 LAC 患者1年病死情況Cox 回歸分析

納入Cox 回歸分析，調(diào)整其他混雜因素后，臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及EGFR基因突變、ROS1、ALKmRNA 表達(dá)均為L(zhǎng)AC 患者1年病死的危險(xiǎn)因素（P<0.05）。見表4。

表4 LAC 患者1年病死情況Cox 回歸分析Table 4 Cox regression analysis of 1?year mortality of LAC patients

2.5 生存曲線

K?M 曲線分析，EGFR基因突變、ROS1、ALKmRNA 陽性表達(dá)患者1年病死率高于陰性表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=28.557、23.340、12.793，P<0.05）。見圖1。

圖1 生存曲線Figure 1 Survival curve

3 討論

EGFR為跨膜受體酪氨酸激酶，主要存在于基質(zhì)細(xì)胞、表皮細(xì)胞及部分平滑肌細(xì)胞內(nèi)，可通過磷酸化調(diào)控癌細(xì)胞增殖及生長(zhǎng)相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)。國(guó)外相關(guān)研究指出［7］，在亞裔人群不吸煙LAC 患者中EGFR突變比例約達(dá)60.0%。國(guó)內(nèi)學(xué)者白冬雨等［8］研究也證實(shí)，EGFR突變?cè)谙侔┤巳褐邪l(fā)生頻率較高。本研究結(jié)果提示EGFR基因突變可能參與LAC 發(fā)生、發(fā)展。本研究還發(fā)現(xiàn)，隨臨床分期增加、分化程度下降、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，LAC 患者出現(xiàn)EGFR基因突變現(xiàn)象，結(jié)合蔣萱等［9］研究考慮可能為EGFR基因突變一方面可促使EGR?TKI 結(jié)構(gòu)域沉積，選擇性刺激下游Janus 激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄激活子和磷脂酰肌醇?3?激酶/絲氨酸?蘇氨酸蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，增加EGFR表達(dá)，異常增殖癌細(xì)胞，抑制癌細(xì)胞凋亡；進(jìn)一步經(jīng)Cox 回歸分析表明EGFR基因突變可對(duì)LAC 生存狀況產(chǎn)生顯著影響。建議臨床根據(jù)EGFR基因突變選取適宜靶向藥物治療，以阻斷癌細(xì)胞增殖，提高LAC 患者生存率。

ALK現(xiàn)已被證實(shí)是肺癌形成與發(fā)展中至關(guān)重要的通路，相關(guān)報(bào)道指出，ALK陽性率約占非小細(xì)胞肺癌的3.0%～7.0%［10］。ROS1屬酪氨酸激酶胰島素受體基因，代表一類新的非小細(xì)胞肺癌分子亞型，其發(fā)生頻率相較于EGFR突變、ALK重排變異更低，約為1.0%～2.0%［11］。本研究結(jié)果與劉光峨等［12］研究結(jié)果相似。本研究還分別分析了ROS1、ALKmRNA 在LAC 不同病理特征中的表達(dá)，數(shù)據(jù)表明，ROS1、ALKmRNA 陽性表達(dá)可能增加LAC患者臨床分期，誘導(dǎo)癌組織分化，促使淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，這可能與ROS1、ALKmRNA 陽性表達(dá)激活多條下游信號(hào)傳導(dǎo)通路、調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖與分化有關(guān)。由此可見，ROS1、ALKmRNA 表達(dá)可能在LAC 病理進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。但Zhang Q 等［13］觀點(diǎn)認(rèn)為，ROS1融合在年輕、永不吸煙的非小細(xì)胞肺癌患者中更為普遍，與本研究結(jié)果存在一定差異，可能與納入樣本量、選取年齡段、肺癌類型不同等因素有關(guān)。進(jìn)一步經(jīng)K?M 曲線分析可知，EGFR、ROS1、ALKmRNA 陽性表達(dá)LAC 患者1年病死率均高于陰性表達(dá)患者，有力佐證了EGFR、ROS1、ALKmRNA 可為臨床評(píng)估LAC 預(yù)后提供有效指標(biāo)，建議臨床對(duì)LAC 組織進(jìn)行EGFR、ROS1、ALKmRNA聯(lián)合檢測(cè)，進(jìn)而為臨床靶向用藥提供更多選擇。

綜上可知，LAC 患者EGFR基因突變、ROS1、ALKmRNA 陽性表達(dá)人群具有不同病理特征，檢測(cè)上述指標(biāo)，可為分析臨床病理特征、尋找靶向用藥合適人群、改善預(yù)后提供科學(xué)指導(dǎo)。