謝飛宇，毛 昀，褚雪鐳，蔡亞芳，薛 鵬，朱世杰

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，北京 100029；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院腫瘤科，北京 100102）

肺癌是全球死亡率最高的腫瘤，其中約85%的肺癌患者的病理類型為非小細(xì)胞肺癌（non‐small cell lung cancer，NSCLC）［1］。隨著對(duì)NSCLC 病、生理機(jī)制研究的深入，治療方式也取得巨大突破，內(nèi)科治療手段可歸納為：化療、靶向治療、免疫治療［2］。但是，NSCLC 的總體5 年生存率仍較低，因此，探索新的疾病靶點(diǎn)及藥物組合對(duì)于治療NSCLC 具有重要意義［3］。中醫(yī)藥在我國(guó)腫瘤治療領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，在改善癥狀、處理并發(fā)癥、減毒增效、提高患者生存活質(zhì)量等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用［4］。目前，多種中成藥已被證實(shí)治療NSCLC 有效，如華蟾素［5］、斑蝥［6］等。中醫(yī)藥成分豐富，參與調(diào)控的靶點(diǎn)、通路眾多，因此探索中藥在治療NSCLC 中的作用機(jī)制意義深遠(yuǎn)。

葦莖湯見(jiàn)于孫思邈所著《備急千金要方》，由葦莖、桃仁、薏苡仁、冬瓜子四藥組成。其中葦莖甘寒輕浮，善清肺熱，《本草逢原》謂其“專于利竅，善治肺癰”，故為君藥。冬瓜子清熱化痰，利濕排膿，能清上徹下，肅降肺氣，與葦莖配合則清肺宣壅，滌痰排膿；薏苡仁甘淡微寒，上清肺熱而排膿，下利腸胃而滲濕，二者共為臣藥；桃仁活血化瘀，是為佐藥。四藥合用，共奏清熱化痰，逐瘀排膿之功。目前，葦莖湯被用于治療非小細(xì)胞肺癌及相關(guān)并發(fā)癥如上腔靜脈綜合征、惡性胸腔積液等［7，8］。但是，關(guān)于葦莖湯治療NSCLC 的活性成分和分子學(xué)作用機(jī)制尚未完全明確，有待進(jìn)一步探索。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作為一門新興技術(shù)，融合了計(jì)算機(jī)虛擬計(jì)算、高通量組學(xué)數(shù)據(jù)分析、多種數(shù)據(jù)庫(kù)檢索等手段，通過(guò)多層次網(wǎng)絡(luò)闡明藥物的化學(xué)成分及作用機(jī)制，為研究藥物與疾病開(kāi)拓了新的視角［9］。本研究通過(guò)檢索TCMSP、Swiss Target Prediction、OMIM、Drugbank、TTD 等公共數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選出葦莖湯的有效活性成分及潛在作用靶點(diǎn)，分析其治療NSCLC 的關(guān)鍵靶點(diǎn)、生物進(jìn)程與信號(hào)通路，為后續(xù)進(jìn)一步的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 葦莖湯活性成分的收集與篩選

通過(guò)傳統(tǒng)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)TCMSP（http：//tcmspw.com/tcmsp.php）并結(jié)合檢索CNKI 數(shù)據(jù)庫(kù)、Pubmed 數(shù)據(jù)庫(kù)中的相關(guān)文獻(xiàn)，獲得葦莖、桃仁、薏苡仁、冬瓜子四藥的化學(xué)成分。再將口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%、類藥性指數(shù)（drug‐like index，DL）≥0.18 作為進(jìn)一步篩選的依據(jù)。

1.2 葦莖湯活性成分靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)及“中藥‐活性成分‐靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)獲取葦莖湯中篩選出的每個(gè)活性成分對(duì)應(yīng)的潛在靶點(diǎn)信息，對(duì)于沒(méi)有靶點(diǎn)的成分在PubChem 數(shù)據(jù)庫(kù)輸入這些成分的InChIKey號(hào)碼，下載它們的2D 結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)式SDF 文件，上傳至Swiss Target Prediction 進(jìn)行預(yù)測(cè)，并選取Probabili‐ty 值≥0.7 的高置信度靶點(diǎn)。借助Uniprot（http：//www.uniprot.org）數(shù)據(jù)庫(kù)中的UniprotKB 功能，將篩選出的靶點(diǎn)全部校正為標(biāo)準(zhǔn)基因名。刪去沒(méi)有作用靶點(diǎn)的成分，運(yùn)用Cytoscape3.7.2 軟件構(gòu)建“中藥‐活性成分‐靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖。

1.3 非小細(xì)胞肺癌靶點(diǎn)的挖掘

將“non‐small cell lung cancer”作為關(guān)鍵詞在以下4 個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，獲得NSCLC 靶點(diǎn)的信息：（1）OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.omim.org/）；（2）DrugBank 數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.drugbank.ca/）；（3）GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www. genecards.org/），選取前100 個(gè)高相關(guān)度的靶點(diǎn)；（4）TTD 數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//db.idrblab.net/ttd/）。將所得的靶點(diǎn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化去重。

1.4 葦莖湯治療NSCLC 的靶點(diǎn)映射

通過(guò)在線繪圖軟件Venny2.1（https：//bioin‐fogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html），制作韋恩圖，將葦莖湯所預(yù)測(cè)的靶點(diǎn)與NSCLC 所對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)進(jìn)行映射，獲取葦莖湯治療NSCLC 的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)。

1.5 交集靶點(diǎn)蛋白與蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析

將葦莖湯和NSCLC 的交集靶點(diǎn)輸入在線STRING11.0 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string‐db.org/），以置信度蛋白質(zhì)參數(shù)＞0.7 為條件進(jìn)行篩選，去掉網(wǎng)絡(luò)中的孤立節(jié)點(diǎn)。將所獲得的tsv 格式文件導(dǎo)入Cyto‐scape3.7.2 軟件進(jìn)行可視化分析。同時(shí)，借助軟件中Molecular Complex Detection（MCODE）插件，對(duì)相關(guān)靶標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得出葦莖湯治療NSCLC 的核心靶點(diǎn)。

1.6 交集靶點(diǎn)的GO/KEGG 富集分析

利用Cytoscape3.7.2 軟件中的Clue GO 插件進(jìn)行GO/KEGG 通路富集分析。其中，GO 富集分析可以表明基因靶點(diǎn)分子功能、細(xì)胞成分、生物進(jìn)程。KEGG 分析可體現(xiàn)葦莖湯治療NSCLC 所涉及的靶點(diǎn)信號(hào)通路富集情況，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 葦莖湯主要活性成分

以O(shè)B≥30%、DL≥0.18 為篩選標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化去重后總共篩選出33 個(gè)有效成分，其中葦莖3 個(gè)，桃仁23 個(gè)，薏苡仁9 個(gè)，冬瓜子2 個(gè)，結(jié)果見(jiàn)表1。阿魏酸雖不符合篩選標(biāo)準(zhǔn)，因具有抗腫瘤活性，因此納入。

表1 葦莖湯主要活性成分Tab 1 The main active components of Weijing decoction

2.2 葦莖湯活性成分的靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建

借助TCMSP、PubChem、Swiss Target Predic‐tion、Uniprot 數(shù)據(jù)庫(kù)，共得到葦莖湯活性成分的靶點(diǎn)85 個(gè)。運(yùn)用Cytoscape3.7.2 軟件構(gòu)建“中藥‐活性成分‐靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖1。

圖1 中藥‐活性成分‐靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖Fig 1 The network of drugs-active components-targets

2.3 NSCLC 疾病靶點(diǎn)的獲取及葦莖湯治療NSCLC 靶點(diǎn)映射

以“non‐small cell lung cancer”為關(guān)鍵詞檢索OMIM、DrugBank、GeneCards、TTD 數(shù)據(jù)庫(kù)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化去重后共獲得NSCLC 相關(guān)靶點(diǎn)619 個(gè)。通過(guò)韋恩圖將葦莖湯所預(yù)測(cè)的靶點(diǎn)與NSCLC 的靶點(diǎn)進(jìn)行映射，發(fā)現(xiàn)共有54 個(gè)交集靶點(diǎn)，即葦莖湯治療NSCLC 的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)，見(jiàn)圖2。

圖2 葦莖湯‐NSCLC 共同靶點(diǎn)數(shù)Fig 2 The number of intersection targets of Weijing decoction-NSCLC

2.4 蛋白質(zhì)‐蛋白質(zhì)相互作用信息（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶標(biāo)篩選

結(jié)合Cytoscape3.7.2 與STRING11.0 數(shù)據(jù)庫(kù)所獲得的tsv 文件，構(gòu)建交集靶點(diǎn)的PPI 網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖3；通過(guò)MCODE 插件進(jìn)行聚類分析，篩選網(wǎng)絡(luò)圖中核心靶點(diǎn)，見(jiàn)圖4。連接度（Degree）表示某點(diǎn)與某點(diǎn)連接的邊的數(shù)目，其值越大，表明該靶點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中越重要，在圖中所對(duì)應(yīng)的圓圈越大，顏色越深。綜合評(píng)分用來(lái)衡量靶點(diǎn)之間的聯(lián)系，其值越大，在圖像上表現(xiàn)為連線越粗，顏色越深，說(shuō)明靶點(diǎn)之間聯(lián)系越緊密。

圖3 葦莖湯治療NSCLC 交集靶點(diǎn)蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖Fig 3 PPI of intersection targets in the treatment of NSCLC with Weijing decoction

圖4 葦莖湯治療NSCLC 核心靶點(diǎn)蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖Fig 4 PPI of hub genes in the treatment of NSCLC with Weijing decoction

2.5 GO 富集分析結(jié)果

葦莖湯治療NSCLC 主要涉及99 個(gè)生物進(jìn)程，見(jiàn)圖5。這些生物進(jìn)程主要與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞核活動(dòng)、血管調(diào)節(jié)方面相關(guān)。富集分析較集中的生物學(xué)過(guò)程有：外源性凋亡信號(hào)傳導(dǎo)（extrinsic apoptotic signaling pathway）、凋亡信號(hào)通路中半胱氨酸型內(nèi)肽酶活性的激活（activation of cysteine‐type endo‐peptidase activity involved in apoptotic signaling path‐way）、凋亡信號(hào)通路中線粒體外膜通透性的正調(diào)控（positive regulation of mitochondrial outer membrane permeabilization involved in apoptotic signaling path‐way）、核受體活動(dòng)（nuclear receptor activity）、血管直徑的正向調(diào)節(jié)（positive regulation of blood vessel di‐ameter）。

圖5 葦莖湯治療NSCLC 關(guān)鍵交集靶點(diǎn)GO 分析Fig 5 GO analysis of the key intersection targets of Weijing decoction in the treatment of NSCLC

2.6 KEGG 富集分析結(jié)果

對(duì)葦莖湯治療NSCLC 關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 富集分析，共確定49 條相關(guān)信號(hào)通路，主要涉及腫瘤、細(xì)胞凋亡、炎癥、抗血管生成、代謝等方面，富集排名靠前的通路主要有腫瘤相關(guān)通路、乙型肝炎信號(hào)通路、p53 信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡信號(hào)通路、VEGF 信號(hào)通路、糖尿病并發(fā)癥的AGE‐RAGE 信號(hào)通路等，見(jiàn)圖6。

圖6 葦莖湯治療NSCLC 關(guān)鍵交集靶點(diǎn)KEGG 分析Fig 6 KEGG analysis of the key intersection targets of Weijing decoction in the treatment of NSCLC

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于NSCLC 發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制研究取得了重大突破，主要集中在驅(qū)動(dòng)基因突變、抗血管生成、免疫治療等方面。表皮生長(zhǎng)因子受體(EG‐FR）突變是NSCLC 中最常見(jiàn)的驅(qū)動(dòng)基因突變，約見(jiàn)于27% 的肺腺癌患者及9% 的肺鱗癌患者［10］。EGFR 與活化的配體相結(jié)合形成二聚體，通過(guò)酪氨酸激酶殘基的磷酸化激活下游信號(hào)通路，參與細(xì)胞增殖、生存、侵襲、血管生成［11］。PD‐1 受體是表達(dá)在T 細(xì)胞表面的具有免疫抑制功能的受體，可與腫瘤細(xì)胞分泌的PD‐L1 相結(jié)合，使得T 細(xì)胞無(wú)法識(shí)別殺傷腫瘤細(xì)胞，引起腫瘤免疫逃逸［12］?；诖耍琋SCLC 的內(nèi)科治療方案也產(chǎn)生了較大變化，從以鉑類藥為基礎(chǔ)的雙藥化療為主，發(fā)展成化療、靶向治療、免疫治療多方案聯(lián)合的格局。雖然上述方案取得顯著療效，但仍面臨著5 年生存率較低、易產(chǎn)生耐藥性和受益人群較窄的問(wèn)題。古代中醫(yī)典籍中雖然沒(méi)有對(duì)肺癌的記載，但根據(jù)本病的臨床表現(xiàn)，肺癌與“咳嗽”、“肺痿”、“肺積”、“息責(zé)”、“肺癰”等具有共通之處。流行病學(xué)表明，吸煙是肺癌最大的危險(xiǎn)因素之一［13］，煙毒長(zhǎng)期熏蒸肺臟，耗傷陰液，煉津成痰，痰聚化火，進(jìn)一步耗傷氣陰，損傷肺絡(luò)，導(dǎo)致痰瘀互結(jié)［14］。根據(jù)清代《醫(yī)門補(bǔ)要》言：“表邪遏伏于肺，失于宣散，并嗜煙酒，火毒上熏，久郁熱熾，爍腐肺葉”；《雜病源流犀燭·積聚癥瘕痃癖痞源流》記載：“邪積胸中，阻塞氣道，氣不得通，為痰，為食，為血，皆邪正相搏，邪既勝，正不得制之，遂結(jié)成形而有塊?！保M(jìn)一步佐證了肺癌的核心病機(jī)為痰瘀互結(jié)，火毒熏肺。而葦莖湯不僅擅長(zhǎng)清熱排膿，葉天士在運(yùn)用此方時(shí)取其行氣、活血、逐瘀之功［15］?；诖耍斍o湯可有效治療NSCLC，但其作用機(jī)制尚未明確。

本研究篩選出葦莖湯的有效成分，構(gòu)建有效成分與靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)圖發(fā)現(xiàn)四味中藥的主要成分為β‐谷甾醇、豆甾醇、金色酰胺醇酯、阿魏酸。其中，豆甾醇為蘆根、薏苡仁、冬瓜子共同成分。該4 種成分均被證實(shí)具有抗腫瘤作用，如金色酰胺醇酯、阿魏酸可顯著抑制肺癌細(xì)胞A549 生長(zhǎng)［16］。有研究發(fā)現(xiàn)從植物中提取的豆甾醇、β‐谷甾醇可以在不損傷正常肺組織細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)人肺腺癌細(xì)胞A549 有著較強(qiáng)的抑制作用［17，18］。此外，β‐谷甾醇可以與小腸刷狀緣酶競(jìng)爭(zhēng)，降低機(jī)體對(duì)膽固醇的吸收，從而降低肺癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)［19］。Vundru 等［20］發(fā)現(xiàn)，β‐谷甾醇可通過(guò)下調(diào)人肺腺癌A549 細(xì)胞中CDK4、細(xì)胞周期蛋白D1 的表達(dá)水平，上調(diào)p21/Cip1 和p27/Kip1 蛋白的表達(dá)，將細(xì)胞周期阻滯于G0∕G1期，從而誘導(dǎo)人肺腺癌A549 細(xì)胞的凋亡。

通過(guò)String、Cytoscape3.7.2 軟件MCODE 插件構(gòu)建葦莖湯治療非小細(xì)胞肺癌的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果發(fā)現(xiàn) EGFR、JUN、TNF、MAPK8、CASP3、HSP90AA1、JAK2、PTGS2 是治療非小細(xì)胞肺癌的核心靶點(diǎn)。EGFR 又稱表皮生長(zhǎng)因子受體，是酪氨酸激酶受體ErbB 家族的4 個(gè)成員之一?；蛲蛔兛蓪?dǎo)致 EGFR 異?；罨?，從而啟動(dòng) EG‐FR‐Ras‐Raf‐MEK‐ERK 和PI3K/Akt 信號(hào)通路引起腫瘤細(xì)胞的異常增殖［21］。EGFR 突變廣泛見(jiàn)于非小細(xì)胞肺癌患者，使用針對(duì)EGFR 突變的靶向藥物進(jìn)行治療也取得顯著療效［22］。相關(guān)研究表明，葦莖湯可以延長(zhǎng)肺癌Lewis 小鼠的生存期，并下調(diào)其腫瘤組織中EGFR 的表達(dá)［23］。HSP90AA1 為熱休克蛋白家族成員，該家族在惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用，且在NSCLC 患者中高度表達(dá)［24］。相關(guān)研究表明，HSP90 抑制劑17‐AAG可誘導(dǎo)人肺癌A549 及H446 細(xì)胞的凋亡［25］。JAK2是Janus 激酶家族的成員，可激活特定STAT（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄活化子），調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄［26］。JAK/STAT 信號(hào)通路被認(rèn)為與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、耐藥機(jī)制的形成密切相關(guān)［27‐29］。姜澤群等［30］通過(guò)檢測(cè)Lewis 肺癌原位移植小鼠腫瘤組織lncRNA、mRNA 的水平，發(fā)現(xiàn)葦莖湯干預(yù)組小鼠下調(diào)的靶基因顯著富集于JAK/STAT 信號(hào)通路，提示葦莖湯可能通過(guò)抑制JAK/STAT 信號(hào)通路來(lái)治療非小細(xì)胞肺癌。

GO 功能富集分析和KEGG 通路富集分析的結(jié)果顯示，葦莖湯治療非小細(xì)胞肺癌的作用機(jī)制主要涉及細(xì)胞凋亡、p53、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）信號(hào)通路。細(xì)胞凋亡信號(hào)通路主要分為內(nèi)源性與外源性兩種，二者相對(duì)獨(dú)立，又交互作用。研究證實(shí)，當(dāng)發(fā)生內(nèi)源性細(xì)胞凋亡時(shí)，缺血、缺氧等病理因素首先引起線粒體膜滲透性改變，并使線粒體釋放凋亡相關(guān)蛋白，如線粒體細(xì)胞色素c，介導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)一步的凋亡［31］。外源性細(xì)胞凋亡途徑多指由膜死亡受體所介導(dǎo)的凋亡途徑。死亡配體能與相應(yīng)死亡受體相結(jié)合，形成三聚體，多聚化的死亡受體的死亡結(jié)構(gòu)域發(fā)生改變，從而與其他接頭蛋白進(jìn)行結(jié)構(gòu)域同源配對(duì)結(jié)合，形成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體，進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［32］。相關(guān)研究表明，p53 是NSCLC 中突變率最高的基因之一，而p53 作為轉(zhuǎn)錄因子，可促進(jìn)凋亡相關(guān)基因如Bax、Fas 等的表達(dá)上調(diào)，并通過(guò)這些蛋白參與線粒體介導(dǎo)的和死亡受體介導(dǎo)的凋亡途徑［33］。而不論是死亡受體介導(dǎo)的凋亡途徑所激活的caspase‐8、caspase‐10，還是線粒體介導(dǎo)的凋亡所激活得caspase‐9，均可水解激活caspase‐3、‐6和‐7 從而引發(fā)下游caspase 級(jí)聯(lián)反應(yīng)，通過(guò)滅活凋亡抑制因子、激活促凋亡因子Bid、直接降解細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白三條途徑引起腫瘤細(xì)胞凋亡［34］。葦莖湯中的多種成分可參與誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，Rajavel等［35］發(fā)現(xiàn)桃仁所富含的β‐谷甾醇可以顯著上調(diào)Cas‐pase 3、9 以及p53 的表達(dá)水平，可通過(guò)內(nèi)、外源性凋亡途徑誘導(dǎo)肺腺癌A549 細(xì)胞凋亡；此外吳競(jìng)等［36］使用葦莖主要成分阿魏酸干預(yù)裸鼠肺癌A549 模型，發(fā)現(xiàn)阿魏酸可以上調(diào)Caspase‐3 蛋白的表達(dá)，降低mTOR 的水平，激活細(xì)胞凋亡與自噬進(jìn)程，抑制腫瘤細(xì)胞生存。

腫瘤新生血管活躍在NSCLC 的發(fā)展中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，VEGF 可在缺氧誘導(dǎo)因子（HIF‐α）等的活化作用下，與VEGFR 結(jié)合，激活PI3K‐AKT、MAPK 信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤血管的增殖［37］。目前，VEGF‐A 抑制劑貝伐珠單抗已被FDA 列為NSCLC 非鱗狀細(xì)胞癌在無(wú)驅(qū)動(dòng)基因突變的一線用藥。周珊珊等［38］通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)，同樣富含β‐谷甾醇的大黃可以降低腎小管上皮細(xì)胞中VEGF 蛋白的表達(dá)水平。除此以外，VEGF 還參與了腫瘤免疫抑制微環(huán)境的形成，促使腫瘤發(fā)生免疫逃逸［39］。相關(guān)研究表明，Treg 細(xì)胞是一類具有免疫抑制功能的T 細(xì)胞亞群，VEGF 對(duì)Treg 具有趨化作用，在小鼠黑色素瘤模型中發(fā)現(xiàn)，NRP1 在Foxp3+Treg 中高表達(dá)，腫瘤細(xì)胞自分泌的VEGF 作為趨化因子，可以引導(dǎo)Treg 浸潤(rùn)腫瘤組織，從而負(fù)向調(diào)控抗腫瘤免疫效應(yīng)［40］。而一項(xiàng)臨床試驗(yàn)表明，葦莖湯可以明顯降低重癥肺炎患者CD4+CD25+Treg 細(xì)胞數(shù)目，差異較對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）［41］。因此，筆者預(yù)測(cè)葦莖湯可能通過(guò)減少Treg 細(xì)胞的數(shù)目來(lái)改善NSCLC 免疫抑制微環(huán)境。

綜上所述，葦莖湯可能作用于Caspase‐3、Caspase‐8、Caspase‐9、p53、VEGF 等關(guān)鍵靶點(diǎn)，通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡通路、p53 信號(hào)通路、VEGF 通路以及下調(diào)Treg 細(xì)胞表達(dá)來(lái)治療NSCLC。本研究仍存在一些局限，如藥物成分與靶點(diǎn)之間的作用、葦莖湯對(duì)免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)，尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明。