陳與豐 陳建新 王雅蕾

摘要 目的：通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討澤瀉湯治療梅尼埃?。∕eniere Disease，MD）的作用機(jī)制。方法：利用SymMap、TCMSP、TCMID、BATMAN-TCM等中醫(yī)藥數(shù)據(jù)庫及TargetNet藥物-靶點(diǎn)譜在線計(jì)算平臺，獲取澤瀉湯有效成分及作用靶點(diǎn);通過OMIM、Gene Cards、TTD、CTD等疾病基因數(shù)據(jù)庫，獲取MD相關(guān)靶標(biāo)基因;利用STRING蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò);利用Cytoscape信息分析軟件，獲取關(guān)鍵靶標(biāo)基因、構(gòu)建中藥-有效成分-靶標(biāo)基因網(wǎng)絡(luò)圖;利用R軟件進(jìn)行信號通路分析。結(jié)果：澤瀉湯中69種有效成分可作用于88個MD相關(guān)基因，以核受體（如糖皮質(zhì)激素受體）為主要作用靶點(diǎn)，參與IL-17、腫瘤壞死因子（TNF）相關(guān)的核因子κB信號通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。結(jié)論：由核受體糖皮質(zhì)激素受體-核因子κB介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)通路，可能是澤瀉湯減少M(fèi)D炎癥反應(yīng)，緩解膜迷路水腫的重要作用途徑之一。

關(guān)鍵詞 梅尼埃病;糖皮質(zhì)激素受體;澤瀉湯;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);炎癥反應(yīng)

Abstract Objective：To explore the mechanism of Zexie Decoction in the treatment of Meniere disease（MD） based on network pharmacology.Methods：SymMap，TCMSP，TCMID，BATMAN-TCM and other Chinese medicine databases and TargetNet drug-target spectrum online computing platform were used to obtain the effective ingredients and targets of Zexie Decoction; through OMIM，Gene Cards，TTD，CTD and other disease gene databases，MD-related target genes were obtained; STRING protein database were used to construct a protein interaction network; Cytoscape information analysis software was used to obtain key target genes，a network diagram of traditional Chinese medicine-active ingredients-target genes was constructed; R software was used to analyze signal pathways.Results：A total of 69 active components were screened from Zexie Decoction.These components acted on 88 related targets of MD.It took nuclear receptors （such as glucocorticoid receptors） as the main targets，and participated in the inflammatory response mediated by IL-17 and TNF-related NFκB signaling pathways.Conclusion：The inflammatory response pathway mediated by the nuclear receptor glucocorticoid receptor-NFκB may be one of the important pathways for Zexie Decoction to reduce MD inflammatory response and relieve membrane labyrinth edema.

Keywords Meniere Disease; Glucocorticoid receptor; Zexie Decoction; Network pharmacology; Inflammation

中圖分類號：R289.5;R276文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.07.008

梅尼埃病（Meniere Disease，MD）是一種病因復(fù)雜、發(fā)病機(jī)制尚不明確的內(nèi)耳疾病，以自發(fā)性的發(fā)作性眩暈、感音神經(jīng)性耳聾（Sensorineural Hearing Loss，SNHL）、耳鳴和耳脹悶感為主要臨床表現(xiàn)，膜迷路積水為主要病理學(xué)特征[1]。流行病學(xué)研究顯示，MD在全球范圍內(nèi)均有發(fā)生，10萬人中有3.5～513人患病，近10年來發(fā)病率呈上升趨勢[2-3]。MD高發(fā)年齡為40～60歲，且患病率隨年齡增長而增加，發(fā)病時常表現(xiàn)為單側(cè)耳癥狀，并可持續(xù)數(shù)十年，每年發(fā)作6～11次[3]。近50%的MD患者合并抑郁癥，78%～89%的MD患者正常工作、生活受到限制，嚴(yán)重影響生命質(zhì)量[4-6]。盡管MD發(fā)病機(jī)制尚不明確，但研究普遍認(rèn)為，膜迷路積水是其主要病理機(jī)制之一。氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)是膜迷路積水發(fā)生的核心[7];自由基過量產(chǎn)生和氧化應(yīng)激引起的微血管損傷參與膜迷路積水的發(fā)展[8]。

目前，美國耳鼻喉頭頸外科學(xué)會（American Academy of Otolaryngology-Head and Neck Surgery Foundation，AAO-HNSF）指出，MD治療的目標(biāo)是預(yù)防或降低眩暈發(fā)作的嚴(yán)重程度和頻率，緩解或預(yù)防聽力損失、耳鳴和耳脹滿感，改善整體生命質(zhì)量[10]。西醫(yī)多以利尿、改善微循環(huán)、免疫調(diào)節(jié)等原則，依據(jù)病程選擇藥物或手術(shù)改善臨床癥狀，以眩暈發(fā)作次數(shù)減少為療效指標(biāo)，然而，對于長期發(fā)作造成的聽力損害難以恢復(fù)[10]。戴春富和李軒毅[11]研究顯示，鼓室內(nèi)慶大霉素注射可有效控制90%的眩暈，通過鼓室內(nèi)給藥后，僅5%～10%的MD患者眩暈控制不佳，需要手術(shù)治療。中醫(yī)在MD治療中也具有明顯優(yōu)勢。2018年中華中醫(yī)藥學(xué)會提出，MD是中醫(yī)治療的優(yōu)勢病種，以澤瀉湯為代表的中藥配伍，可以有效改善MD患者眩暈、耳鳴等癥狀[12]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，加味澤瀉湯聯(lián)合敏使朗治療多種證型MD，可明顯緩解眩暈、耳鳴及耳悶癥狀，療效優(yōu)于單用敏使朗[13-14]。循證醫(yī)學(xué)研究顯示，澤瀉湯在治療MD方面有頻次眾多的大樣本臨床對照試驗(yàn)支持，且其中的中高級質(zhì)量證據(jù)較多，屬于治療MD的優(yōu)勢高頻方[15]。

然而，澤瀉湯治療MD的作用靶點(diǎn)以及分子機(jī)制尚不明確。為探討這一問題，我們采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)融合傳統(tǒng)藥理學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)，研究“藥物-靶點(diǎn)-疾病”復(fù)雜關(guān)系，在大數(shù)據(jù)背景下展開中藥復(fù)方多靶點(diǎn)、多通路作用機(jī)制的探討，為澤瀉湯治療MD有效成分篩選、作用靶點(diǎn)及分子途徑等，提供數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 MD相關(guān)靶點(diǎn)的獲得

基于OMIM（https：//omim.org/search/advanced/geneMap）、TTD（http：//db.idrblab.net/ttd/）、CTD（http：//ctdbase.org/）、Gene Cards（https：//www.genecards.org/）等疾病基因數(shù)據(jù)庫，以“Meniere Disease”（MeSH ID D008575）為檢索詞，搜索關(guān)于MD的相關(guān)靶點(diǎn)。整合各數(shù)據(jù)庫結(jié)合Uniprot（https：//www.uniprot.org/），校正得到MD相關(guān)靶蛋白點(diǎn)。

1.2 澤瀉湯有效成分和靶點(diǎn)的獲得

通過SymMap（https：//www.symmap.org/）、TCMSP（http：//tcmspw.com/tcmsp.php）、TCMID（http：//www.megabionet.org/tcmid/）等中醫(yī)藥數(shù)據(jù)庫，查詢澤瀉、白術(shù)的所有化學(xué)成分。在中醫(yī)藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺（TCMSP）數(shù)據(jù)庫中設(shè)定口服生物利用度（OB）≥30%、類藥性（DL）≥0.18為篩選條件，在SymMap數(shù)據(jù)庫中設(shè)定DL≥30%為篩選條件獲得有效成分。利用BATMAN-TCM（http：//bionet.ncpsb.org/batman-tcm/index.php）、SymMap獲取澤瀉、白術(shù)有效成分對應(yīng)的靶點(diǎn)基因，利用TargetNet（http：//targetnet.scbdd.com/）對靶點(diǎn)基因進(jìn)行補(bǔ)充。BATMAN-TCM靶點(diǎn)篩選條件為Score off≥48，P-value為0.5，TargetNet靶點(diǎn)篩選條件為曲線下面積（AUC≥0.7），可能性（Probability>0.9）。通過Uniprot校正得到澤瀉、白術(shù)有效成分及相關(guān)靶點(diǎn)基因。

1.3 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與關(guān)鍵靶點(diǎn)基因篩選

通過Venny2.1.0（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）將MD相關(guān)基因與澤瀉、白術(shù)靶點(diǎn)基因映射篩選出共同基因，作為澤瀉湯治療MD的潛在作用靶點(diǎn)。通過STRING 11.0（https：//string-db.org/cgi/input.pl）構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（Protein-Protein Interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)?；騺碓礊槿祟悾℉omo sapiens），最低交互分?jǐn)?shù)（Minimum Required Interaction Score）要求為高置信度（High Confidence）（0.700）。接著通過Cytoscape3.8.0中CytoHubba插件，分別使用MCC、DMNC、MNC、Degree、EPC、BottleNeck、EcCentricity、Closeness、Radiality、Betweenness、Stress、ClusteringCoefficient共12種算法得到關(guān)鍵靶點(diǎn)基因，算法的不同可能導(dǎo)致某些重要靶點(diǎn)基因的遺漏或過度評價某些作用較小的靶點(diǎn)，因此對每種算法得出的評分在前20的關(guān)鍵靶點(diǎn)基因進(jìn)行整合，得到在12種算法結(jié)果中至少出現(xiàn)2次的35個關(guān)鍵靶標(biāo)基因。

1.4 GO功能和KEGG通路分析

利用R軟件“BiocManager”及“org.Hs.eg.db”工具包，對潛在作用靶點(diǎn)進(jìn)行ID轉(zhuǎn)換，之后利用“clusterProfiler”工具包對其進(jìn)行基因本體（Gene Ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）信號通路分析，得到細(xì)胞組分（Cellular Component，CC）、分子功能（Molecular Function，MF）、生物學(xué)過程（Biological Process，BP）和KEGG通路分析結(jié)果。利用R軟件“clusterProfiler”工具包，對88個潛在作用靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能分析，包括它們的細(xì)胞組分（Cellular Component，CC），參與的分子功能（Molecular Function，MF）和生物學(xué)過程（Biological Process，BP）。進(jìn)一步，利用R軟件“clusterProfiler”工具包，對88個潛在作用靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG信號通路分析，探討澤瀉湯調(diào)節(jié)潛在作用靶點(diǎn)的作用途徑。

2 結(jié)果

2.1 MD和澤瀉湯相關(guān)靶點(diǎn)

通過OMIM、Gene Cards、TTD、CTD等疾病基因數(shù)據(jù)庫共得到MD相關(guān)靶點(diǎn)2 891個。通過TCMSP、SymMap、TCMID、BATMAN-TCM等中醫(yī)藥數(shù)據(jù)庫檢索澤瀉湯中2味中藥的化合物，結(jié)合OB和DL等指標(biāo)篩選，得到潛在活性成分：澤瀉27個，白術(shù)42個。將1.2預(yù)測的靶點(diǎn)去重后，共得到澤瀉湯的活性成分作用靶點(diǎn)共222個。將澤瀉湯活性成分作用靶點(diǎn)與MD疾病靶點(diǎn)相匹配，得到澤瀉湯治療MD的潛在作用靶點(diǎn)88個，將活性成分和潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，得到“藥物-活性成分-潛在作用靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖（圖1）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，白術(shù)中的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ（Atractylenolide Ⅰ）、甘氨酸（Gly）、刺芒柄花素（Formononetin），澤瀉中的澤瀉二萜醇（Oriediterpenol）、谷甾醇（Sitosterol）與9個以上靶點(diǎn)相連接。

為預(yù)測澤瀉湯治療MD的作用靶點(diǎn)，首先，在“藥物-活性成分-潛在作用靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖中得出，4個靶點(diǎn)與藥物成分關(guān)系密切，即與成分連接>10次的靶點(diǎn)，這些靶點(diǎn)依次是：前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2（Prostaglandin G/H Synthase 2 Precursor，PTGS2）連接29次，前列腺素內(nèi)過氧化物合酶1（Prostaglandin G/H Synthase 1 Precursor，PTGS1）連接20次，核孕酮受體（Progesterone Receptor，PGR）連接12次，核受體亞家族3 C組成員1（Nuclear Receptor Subfamily 3 Group C Member 1，NR3C1）連接11次。

為進(jìn)一步驗(yàn)證上述預(yù)測結(jié)果，使用Venny 2.1.0，將澤瀉、白術(shù)和MD的靶點(diǎn)相映射，并繪制韋恩圖。見圖2。與上述結(jié)果一致，篩選出包含PGR、NR3C1、PTGS1、PTGS2，以及BCL2、JUN、PON1、CYP17A1、CDC25B、ESR1、ACHE、ANXA1、NOS2、GRIN1、TRPA1、KCNH2、GRIA2在內(nèi)的17個靶點(diǎn)。

2.2 GO功能分析

得到CC、MF、BP前20個結(jié)果，澤瀉湯作用于MD的基因主要在膜筏、膜微區(qū)、膜區(qū)等細(xì)胞膜區(qū)域表達(dá)（圖3）;這些靶基因主要參與配體門控離子通道的分子功能（圖4），與類固醇代謝生物學(xué)過程密切相關(guān)（圖5）。

2.3 KEGG信號通路分析

發(fā)現(xiàn)IL-17信號通路、Th17細(xì)胞分化、TNF信號通路等炎癥反應(yīng)相關(guān)通路為澤瀉湯治療梅尼埃病的主要作用通路。見圖6。

3 討論

3.1 澤瀉湯治療梅尼埃病的中醫(yī)理論依據(jù)

中醫(yī)認(rèn)為MD屬于“耳眩暈”，是一種由耳病所致的以頭暈?zāi)垦?、天旋地轉(zhuǎn)為主要特征的疾病[16]。早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》時期就有關(guān)于眩暈與耳病相關(guān)的記載：“厥陰之勝，耳鳴頭眩，憒憒欲吐，胃鬲如寒?！睗蔀a湯出自《金匱要略》，由澤瀉、白術(shù)兩味藥物組成，具有健脾化飲、降逆止眩之效，系治療痰飲所致眩暈之經(jīng)方[17]。方中澤瀉甘、淡，寒，有利水滲濕，行痰飲之功;白術(shù)甘、苦、溫，歸脾、胃經(jīng)，可補(bǔ)氣健脾以制水，杜生痰之源[18]。二者合用使水濕從小便而出，水飲下滲，濁陰得降，清陽可升，利水滲濕而不傷陰，從而共制痰飲上犯清竅，使眩暈得止[19]。

3.2 澤瀉湯治療梅尼埃病的成分分析

本研究發(fā)現(xiàn)，白術(shù)中的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ（Atractylenolide Ⅰ）、甘氨酸（Gly）、刺芒柄花素（Formononetin），澤瀉中的澤瀉二萜醇（Oriediterpenol）、谷甾醇（Sitosterol）這5個成分可能是澤瀉湯治療MD的主要活性成分。邱美榕等[20]實(shí)驗(yàn)也表明，澤瀉湯中白術(shù)多糖+澤瀉多糖組分群可能是抗膜迷路積水的有效組分群;澤瀉湯瀉醇B、白術(shù)內(nèi)酯的超臨界萃取物可通過直接抑制內(nèi)耳血管紋、螺旋韌帶的水通道蛋白AQP2表達(dá)，通過AVP-V2R-cAMP途徑，減輕耳蝸積水，治療MD[21]。臨床上，除膜迷路積水病理現(xiàn)象外，越來越多研究發(fā)現(xiàn)，MD患者伴有內(nèi)耳局部甚至全身的炎癥反應(yīng)。Gazquez等[22]通過對690例MD患者的調(diào)查發(fā)現(xiàn)這些患者合并自身免疫性疾病的比例顯著高于普通人群，B淋巴細(xì)胞數(shù)量的增加與耳聾和眩暈的持續(xù)正相關(guān);Kim等[23]收集MD患者內(nèi)耳淋巴液，發(fā)現(xiàn)分子量在23～48 kDa和63～75 kDa間的抗原抗體復(fù)合物，尤其是γ干擾素比正常對照組高10倍?；仡櫻装Y反應(yīng)的反應(yīng)類型，以炎癥反應(yīng)蛋白產(chǎn)物如γ干擾素為特征的炎癥反應(yīng)屬于急性期炎癥反應(yīng)的一種;慢性炎癥反應(yīng)主要以單核細(xì)胞增高為主要特征。這些臨床發(fā)現(xiàn)表明，MD無論是急性發(fā)作期還是恢復(fù)期，都具有炎癥反應(yīng)的典型特征。

3.3 澤瀉湯治療梅尼埃病的關(guān)鍵靶點(diǎn)分析

基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析，我們發(fā)現(xiàn)PTGS1和PTGS2二者在治療MD中居于重要地位。其中，PTGS1和PTGS2屬于前列腺素內(nèi)過氧化物合酶（PTGS），是前列腺素（PG）生物合成中的關(guān)鍵酶，PG是一種炎癥介質(zhì)，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)發(fā)生，抑制表達(dá)PTGS能減少炎癥反應(yīng)發(fā)生[24]。PGR是核孕酮受體，可被類固醇激素影響從而減輕炎癥反應(yīng)發(fā)生[25]。NR3C1編碼糖皮質(zhì)激素受體（Glucocorticoid Receptor，GR），參與炎癥反應(yīng)[26]。PGR、GR均屬于核受體家族。在MD治療中，澤瀉和白術(shù)具有協(xié)同作用，可能通過核受體發(fā)揮抗炎作用?；诖耍覀冾A(yù)測GR是澤瀉湯的重要作用靶點(diǎn)之一。澤瀉活性成分如谷甾醇（Sitosterol）、澤瀉醇B醋酸酯（Alisol B monoacetate）、11-去氧澤瀉醇-a（11-deoxyalisol a）、澤瀉醇a（Alisol a）、澤瀉醇E-23-醋酸酯（Alisol e 23-acetate），白術(shù)活性成分如白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ（Atractylenolide Ⅰ）、雙白術(shù)內(nèi)酯（Biatractylolide）、蒼術(shù)酮（Hinesol）等均可作用于GR。分子對接技術(shù)還發(fā)現(xiàn)，澤瀉醇M-23-乙酸酯和澤瀉醇A-23-醋酸酯可作為拮抗劑，作用于GR，發(fā)揮抗炎作用[27]

。動物實(shí)驗(yàn)中，澤瀉總?cè)瓶捎行б种艻L-6分泌，減輕小鼠耳郭腫脹及大鼠棉球肉芽腫脹程度[28];陳琴華等[29]指出白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅲ還能夠促進(jìn)炎性巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)，參與抗炎反應(yīng)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ可以通過抑制核因子κB、ERK1/2和p38信號通路，抑制LPS處理的RAW264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)[30]。核因子κB炎癥反應(yīng)通路是糖皮質(zhì)激素（Glucocorticoid，GC）與GR結(jié)合后抗炎的重要途徑之一;炎癥反應(yīng)條件下，核因子κB成員p50/p65異二聚體是轉(zhuǎn)錄激活過程中最重要的形式，與相應(yīng)DNA結(jié)合元件結(jié)合，轉(zhuǎn)錄激活TNF-α，IL-1，IL-2，IL-6，IL-8等下游因子，促進(jìn)炎癥介質(zhì)、黏附分子等分泌和表達(dá)[31-32]。此外，1996年，Rarey和Curtis[33]首次在人類內(nèi)耳中發(fā)現(xiàn)了糖皮質(zhì)激素受體。內(nèi)耳毛細(xì)胞內(nèi)大量分布著GR[34]。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，糖皮質(zhì)激素（Glucocorticoids，GC），如地塞米松（Dexamethasone，DEX），可以有效控制MD患者的眩暈，用藥6個月，可以緩解92%患者的臨床癥狀[35];鼓室內(nèi)注射GC治療MD效果顯著，可有效改善眩暈及聽力[36]。GC通過與內(nèi)耳GR結(jié)合，參與耳蝸內(nèi)淋巴穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)[37-39]。然而，也有研究發(fā)現(xiàn)，長期使用DEX，不但有效率下降，還可增加不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)[40]。因此，以GR為靶點(diǎn)，參與抗炎反應(yīng)，是緩解MD局部或全身炎癥反應(yīng)的有效途徑之一;找到具有糖皮質(zhì)激素樣抗炎作用，又不引起不良反應(yīng)的藥物，是提高M(jìn)D臨床療效的關(guān)鍵。

3.4 GO和KEGG結(jié)果分析

GO功能分析結(jié)果與2.1靶點(diǎn)預(yù)測結(jié)果相一致。一方面表明澤瀉湯可能直接作用于細(xì)胞膜上的靶蛋白，另一方面顯示其與炎癥反應(yīng)相關(guān)的核受體、細(xì)胞因子等作用通路密切相關(guān)。進(jìn)一步，基于KEGG信號通路分析，發(fā)現(xiàn)IL-17、Th17和TNF等炎癥反應(yīng)信號參與澤瀉湯治療MD中，與上述功能分析一致。結(jié)合文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，與炎癥反應(yīng)相關(guān)的核因子κB通路為上述三條炎癥反應(yīng)相關(guān)通路的下游通路，核因子κB通路可能是澤瀉湯抗炎的主要途徑之一。IL-17家族是由IL-17A-F組成的細(xì)胞因子的一個子集，在急性和慢性炎癥反應(yīng)中都起著至關(guān)重要的作用。IL-17A是T輔助細(xì)胞17（Th17）亞群的標(biāo)志物，保護(hù)宿主免受細(xì)胞外病原體的侵害，在自身免疫性疾病中參與炎癥反應(yīng)[41];Th細(xì)胞的平衡分化對機(jī)體的免疫和宿主保護(hù)至關(guān)重要[42]。IL-17家族通過與相應(yīng)受體結(jié)合，激活包括核因子κB，MAPK和C/EBP等在內(nèi)的下游途徑，導(dǎo)抗菌肽、細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)，參與炎癥反應(yīng)[43]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，富集在IL-17信號通路上的IL-1β、MMP-9、TNF和MAPK等基因，與內(nèi)耳疾病密切相關(guān)。在于中耳炎中耳積液和細(xì)菌性腦膜炎患者的腦脊液，炎癥介質(zhì)IL-1β大量釋放[44];在慢性中耳炎、內(nèi)耳積水中，MMP-9的表達(dá)水平與病程正相關(guān)[45]。TNF是一種重要的細(xì)胞因子，可誘導(dǎo)多種細(xì)胞內(nèi)信號途徑，包括細(xì)胞凋亡、細(xì)胞成活、炎癥反應(yīng)和免疫等?；罨腡NF組裝成一個高三聚體，與受體（TNFR 1，TNFR 2）結(jié)合，誘導(dǎo)多種基因激活，該通路主要受核因子κB通路和MAPK級聯(lián)反應(yīng)控制[46-47]。TNF-α?xí)T導(dǎo)豚鼠感覺神經(jīng)性聽力損失和突觸退化[48]。在IL-1β誘導(dǎo)內(nèi)耳損傷模型中，DEX可以通過抑制IL-1β介導(dǎo)的MMP-9途徑，保護(hù)內(nèi)耳免受損傷[49]。研究表明，參與炎癥反應(yīng)的IL-17通路、TNF通路，均與核因子κB信號通路存在交互作用。

因此，我們提出假說：澤瀉湯有效成分與靶蛋白GR結(jié)合，抑制下游核因子κB通路，參與抗炎反應(yīng)，是澤瀉湯治療MD的重要分子通路之一。然而，澤瀉湯激活GR途徑抗炎的同時，是否激活下游與不良反應(yīng)相關(guān)的作用途徑;GR-核因子κB通路如何參與膜迷路積水調(diào)節(jié)，目前還尚未見報(bào)道，有待進(jìn)一步探討。

內(nèi)耳由半規(guī)管、前庭、耳蝸3部分組成。毛細(xì)胞是內(nèi)耳上的特殊感受器，是感受聲波刺激的感覺上皮細(xì)胞。內(nèi)耳毛細(xì)胞上GR表達(dá)豐富。澤瀉湯活性成分Sitosterol、Alisol B monoacetate、11-deoxyalisol a、Alisol a、Alisol e 23-acetate、Atractylenolide ⅠBiatractylolide、Hinesol等可作用于GR。澤瀉湯有效成分與GR結(jié)合后，入核與核內(nèi)靶基因上的特定DNA序列結(jié)合，抑制核因子κB炎癥反應(yīng)通路，即核因子κB成員p50/p65異二聚體，與DNA結(jié)合元件結(jié)合，抑制TNF-α，IL-6等下游因子分泌。IL17、TNF信號通路與核因子κB信息通路交互作用。

參考文獻(xiàn)

[1]Ahmadzai N，Cheng W，Wolfe D，et al.Pharmacologic and surgical therapies for patients with Meniere′s disease：a protocol for a systematic review and meta-analysis[J].Syst Rev，2019，8（1）：341.

[2]Kim MH，Cheon C.Epidemiology and Seasonal Variation of Ménière′s Disease：Data from a Population-Based Study[J].Audiol Neurootol，2020，25（4）：224-230.

[3]Basura GJ，Adams ME，Monfared A，et al.Clinical Practice Guideline：Ménière′s Disease Executive Summary[J].Otolaryngol Head Neck Surg，2020，162（4）：415-434.

[4]Patel JJ，Levy DA，Nguyen SA，et al.Depression in Ménière′s disease：a systematic review and meta-analysis[J].J Laryngol Otol，2020，134（4）：293-301.

[5]Levo H，Stephens D，Poe D，et al.EuroQol 5D quality of life in Menière′s disorder can be explained with symptoms and disabilities[J].Int J Rehabil Res，2012，35（3）：197-202.

[6]Ward B，Wettstein V，Golding J，et al.Patient Perceptions of Effectiveness in Treatments for Menière′s Disease：a National Survey in Italy[J].J Int Adv Otol，2019，15（1）：112-117.

[7]Scuto M，Di Mauro P，Ontario ML，et al.Nutritional Mushroom Treatment in Meniere′s Disease with Coriolus versicolor：A Rationale for Therapeutic Intervention in Neuroinflammation and Antineurodegeneration[J].Int J Mol Sci，2019，21（1）：284.

[8]Melki SJ，Heddon CM，F(xiàn)rankel JK，et al.Pharmacological protection of hearing loss in the mouse model of endolymphatic hydrops[J].Laryngoscope，2010，120（8）：1637-1645.

[9]Lopez-Escamez JA，Batuecas-Caletrio A，Bisdorff A.Towards personalized medicine in Ménière′s disease[J].F1000 Research，2018，7：1295.

[10]張靜，李希平.鼓室內(nèi)注射慶大霉素治療單側(cè)難治性梅尼埃病的臨床效果及安全性[J].中國醫(yī)藥，2020，15（2）：297-299.

[11]戴春富，李軒毅.梅尼埃病臨床診治中的思考[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2019，33（3）：196-199.

[12]葛偉韜.95個中醫(yī)優(yōu)勢病種臨床路徑和診療方案發(fā)布[J].中醫(yī)藥管理雜志，2019，27（3）：230.

[13]趙赫，楊艷平，蔡青，等.加味澤瀉湯聯(lián)合敏使朗治療痰濕型梅尼埃病[J].吉林中醫(yī)藥，2020，40（3）：353-356.

[14]夏夢幻，李莎莎，鄒憶懷，等.加味澤瀉湯聯(lián)合敏使朗治療急性期梅尼埃病療效觀察[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15（24）：3217-3218.

[15]裴天源，劉宏宇，宋俊生.基于循證醫(yī)學(xué)《傷寒雜病論》方對美尼爾氏綜合征的研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，38（2）：143-146.

[16]阮巖.中醫(yī)耳鼻咽喉科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2016：104.

[17]范永升，姜德友.金匱要略[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2016：163.

[18]鐘贛生.中藥學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2016：191-373.

[19]李莎莎，鐘利群，夏夢幻.澤瀉湯的相關(guān)研究概況[J].現(xiàn)代中醫(yī)臨床，2017，24（4）：56-60.

[20]邱美榕，阮時寶，苑述剛，等.澤瀉湯抗膜迷路積水有效組分群篩選的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2015，26（4）：869-871.

[21]馬少丹，阮時寶，宿廷敏，等.《金匱要略》澤瀉湯超臨界萃取物對膜迷路積水模型影響的研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2016，34（9）：2076-2078.

[22]Gazquez I，Soto-Varela A，Aran I，et al.High prevalence of systemic autoimmune diseases in patients with Menière′s disease[J].PLoS One，2011，6（10）：e26759.

[23]Kim SH，Kim JY，Lee HJ，et al.Autoimmunity as a candidate for the etiopathogenesis of Meniere′s disease：detection of autoimmune reactions and diagnostic biomarker candidate[J].PLoS One，2014，9（10）：e111039.

[24]王訓(xùn)翠，儲明星，陳宏權(quán).前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2基因的研究進(jìn)展[J].生命科學(xué)，2004，16（1）：31-34.

[25]張經(jīng)偉，張正紅，王正朝.黃體類固醇激素受體的結(jié)構(gòu)功能及其生理調(diào)節(jié)[J].中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)，2019，41（8）：1628-1632.

[26]Vitellius G，Trabado S，Bouligand J，et al.Pathophysiology of Glucocorticoid Signaling[J].Ann Endocrinol（Paris），2018，79（3）：98-106.

[27]Lin HR.Triterpenes from Alisma orientalis act as androgen receptor agonists，progesterone receptor antagonists，and glucocorticoid receptor antagonists[J].Bioorg Med Chem Lett，2014，24（15）：3626-3632.

[28]林娜，黃錦芳，張雪，等.澤瀉總?cè)频目寡谆钚匝芯縖J].福建中醫(yī)藥，2018，49（4）：68-69，71.

[29]陳琴華，余飛，王紅梅，等.白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對炎性巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的影響[J].中國藥師，2017，20（12）：2112-2116.

[30]Ji G，Chen R，Zheng J.Atractylenolide I inhibits lipopolysaccharide-induced inflammatory responses via mitogen-activated protein kinase pathways in RAW264.7 cells[J].Immunopharmacol Immunotoxicol，2014，36（6）：420-425.

[31]Ghosh S，Karin M.Missing pieces in the NF-kappaB puzzle[J].Cell，2002，109 Suppl：S81-96.

[32]Scheinman RI，Gualberto A，Jewell CM，et al.Characterization of mechanisms involved in transrepression of NF-kappa B by activated glucocorticoid receptors[J].Mol Cell Biol，1995，15（2）：943-953.

[33]Rarey KE，Curtis LM.Receptors for glucocorticoids in the human inner ear[J].Otolaryngol Head Neck Surg，1996，115（1）：38-41.

[34]Trune DR，Canlon B.Corticosteroid therapy for hearing and balance disorders[J].Anat Rec（Hoboken），2012，295（11）：1928-1943.

[35]Weckel A，Marx M，Esteve-Fraysse MJ.Control of vertigo in Ménière′s disease by intratympanic dexamethasone[J].Eur Ann Otorhinolaryngol Head Neck Dis，2018，135（1）：7-10.

[36]林韻琪.鼓室內(nèi)注射糖皮質(zhì)激素治療梅尼埃病的療效對比[J].北方藥學(xué)，2019，16（11）：12-13.

[37]Trune DR，Kempton JB，Gross ND.Mineralocorticoid receptor mediates glucocorticoid treatment effects in the autoimmune mouse ear[J].Hear Res，2006，212（1-2）：22-32.

[38]王靜，郭春榮，董楊，等.耳聾左慈丸及有效拆方拮抗慶大霉素誘導(dǎo)毛細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中藥雜志，2010，35（18）：2464-2468.

[39]Ozer F，Unal OF，Atas A，et al.Evaluation of the effect of dexamethasone in experimentally induced endolymphatic hydrops in guinea pigs[J].Am J Otolaryngol，2008，29（2）：88-93.

[40]Beyea JA，Instrum RS，Agrawal SK，et al.Intratympanic Dexamethasone in the Treatment of Ménière′s Disease：A Comparison of Two Techniques[J].Otol Neurotol，2017，38（6）：e173-e178.

[41]Song X，Qian Y.IL-17 family cytokines mediated signaling in the pathogenesis of inflammatory diseases[J].Cell Signal，2013，25（12）：2335-2347.

[42]Maddur MS，Miossec P，Kaveri SV，et al.Th17 cells：biology，pathogenesis of autoimmune and inflammatory diseases，and therapeutic strategies[J].Am J Pathol，2012，181（1）：8-18.

[43]Song X，Qian Y.The activation and regulation of IL-17 receptor mediated signaling[J].Cytokine，2013，62（2）：175-182.

[44]Satoh H，F(xiàn)irestein GS，Billings PB，et al.Proinflammatory cytokine expression in the endolymphatic sac during inner ear inflammation[J].J Assoc Res Otolaryngol，2003，4（2）：139-147.

[45]Jang CH，Shin SH，Cho HH，et al.Expression of matrix metalloproteinase-9 and-2 in pediatric chronic otitis media with effusion[J].Int J Pediatr Otorhinolaryngol，2006，70（7）：1155-1158.

[46]Pomerantz JL，Baltimore D.NF-kappaB activation by a signaling complex containing TRAF2，TANK and TBK1，a novel IKK-related kinase[J].EMBO J，1999，18（23）：6694-6704.

[47]Newton K，Dixit VM.Signaling in innate immunity and inflammation[J].Cold Spring Harb Perspect Biol，2012，4（3）：a006049.

[48]Katsumi S，Sahin MI，Lewis RM，et al.Intracochlear Perfusion of Tumor Necrosis Factor-Alpha Induces Sensorineural Hearing Loss and Synaptic Degeneration in Guinea Pigs[J].Front Neurol，2019，10：1353.

[49]Nam SI，Kwon TK.Dexamethasone inhibits interleukin-1β-induced matrix metalloproteinase-9 expression in cochlear cells[J].Clin Exp Otorhinolaryngol，2014，7（3）：175-180.

（2020-12-01收稿 責(zé)任編輯：楊覺雄）