王 璐， 武雅珍， 焦明雅， 李志成

（西北農(nóng)林科技大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，陜西 楊凌712100）

近年來，肥胖發(fā)生率呈快速上升趨勢(shì)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球肥胖患者的增長(zhǎng)速度為每5年翻一番，每年因肥胖引起的直接或間接死亡人數(shù)已達(dá)30萬，肥胖已成為僅次于吸煙之后的第二個(gè)健康危險(xiǎn)因素[1]，肥胖也是繼癌癥和心腦血管疾病之后威脅人類健康的第三大疾病[2]。肥胖和飲食密切相關(guān)，當(dāng)人體攝入食物的熱量大于消耗量時(shí)，多余的熱量會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)橹?，在體內(nèi)積聚形成肥胖[3]，食物脂肪的過量攝入會(huì)增加發(fā)生肥胖的風(fēng)險(xiǎn)。因此，控制飲食中脂肪的攝入和機(jī)體對(duì)于脂肪的吸收對(duì)改善肥胖有重要作用[4-5]。

機(jī)體攝食后，胰脂肪酶將膳食脂肪水解為單酰甘油和游離脂肪酸[6]，在腸道內(nèi)再吸收，合成新的脂肪[7]。胰脂肪酶抑制劑可有效抑制胰脂肪酶活性，降低胰脂肪酶對(duì)脂肪的分解作用，減少脂肪再合成，抑制機(jī)體內(nèi)脂肪過度堆積，發(fā)揮控制、治療肥胖的作用[8]。目前，奧利司他（Orlistat）是市場(chǎng)上被廣泛認(rèn)同和購(gòu)買使用的胰脂肪酶抑制劑類減肥藥物，但具有失眠、乏力、增加心率，甚至心律失常、心力衰竭、猝死等副作用[9]。因此，研發(fā)具有減肥作用的藥物和輔助減肥的功能性食品已成為食品生物技術(shù)界、營(yíng)養(yǎng)學(xué)界研究的熱點(diǎn)。

我國(guó)雞蛋生產(chǎn)總量超過了世界生產(chǎn)總量的1/3，但目前關(guān)于雞蛋的深加工較少，雞蛋的綜合利用率較低[10-12]。作者以卵蛋白為原料，采用酶工程技術(shù)制備卵蛋白源胰脂肪酶抑制肽 （Pancreatic lipase inhibitory peptide from albumin，PLIPA），研究其對(duì)豬胰脂肪酶的抑制作用，并通過建立營(yíng)養(yǎng)型肥胖小鼠模型，研究PLIPA對(duì)肥胖小鼠的體質(zhì)量控制效果，為研發(fā)減肥功能食品提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮雞蛋：購(gòu)于陜西省楊凌示范區(qū)主要超市。

胰蛋白酶：北京索萊寶科技有限公司產(chǎn)品；堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶：西安熱默爾生物科技有限公司產(chǎn)品；豬胰脂肪酶、對(duì)硝基苯酚棕櫚酸酯：上海阿拉丁生化科技股份有限公司產(chǎn)品；奧利司他：薩恩化學(xué)技術(shù)有限公司產(chǎn)品；茶多酚：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品；L-阿拉伯糖：山東福田藥業(yè)有限公司產(chǎn)品；原花青素：上海文森生物科技有限公司產(chǎn)品；茶多酚：山東福瑞達(dá)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司產(chǎn)品；總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）等試劑盒：南京建成生物工程研究所有限公司產(chǎn)品；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料

7周齡C57BL/6J小鼠，由斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司提供，經(jīng)中國(guó)食品藥品鑒定研究院檢測(cè)質(zhì)量合格，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用證號(hào)為SCXK（京）2016-0002。

高脂飼料組分（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）：豬油10%，膽固醇1%，膽酸鈉0.5%，蔗糖10%，基礎(chǔ)飼料78.5%。

1.3 儀器與設(shè)備

UV-1700雙光束紫外光分光光度計(jì)：日本島津公司產(chǎn)品；LGJ-25C真空冷凍干燥機(jī)：北京四環(huán)儀器廠制造；JA3003型電子天平：北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；Z216MK臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)：德國(guó)Hermle公司產(chǎn)品；Victor X3多功能酶標(biāo)儀：美國(guó)PE公司產(chǎn)品。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 PLIPA的制備

1）制備卵蛋白粉 將新鮮雞蛋洗凈，消毒后分離蛋清，真空冷凍干燥成粉，保存?zhèn)溆?。采用GB/T 5009.5—2010凱氏定氮法[13]測(cè)定其粗蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80.85%。

2）篩選水解卵蛋白粉最佳蛋白酶 參照劉爽的方法進(jìn)行水解[14]，將卵蛋白粉配成蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度80 g/L溶液，沸水浴20 min使蛋白質(zhì)變性，冷卻至反應(yīng)溫度后放入水浴鍋，調(diào)節(jié)pH至最適條件（見表1），加入蛋白酶水解3 h，煮沸10 min滅活，冷卻至室溫，5 000 r/min離心20 min，取上清液（PLIPA）測(cè)定對(duì)胰脂肪酶活性的抑制率或在-20℃冷凍保存，根據(jù)抑制率的高低篩選出最佳蛋白酶。

表1 5種蛋白酶適宜水解參數(shù)Table 1 Optimum hydrolysis parameters of five proteases

3）優(yōu)化制備PLIPA以PLIPA對(duì)胰脂肪酶活性的抑制率為指標(biāo)，分別研究最佳蛋白酶在最適pH條件下水解時(shí)間（酶解時(shí)間）、加酶量和水解溫度（酶解溫度）等工藝參數(shù)對(duì)其水解效果的影響，以獲得具有較高抑制脂肪酶活性作用的PLIPA。通過單因素實(shí)驗(yàn)篩選各個(gè)因素的水平范圍值，采用響應(yīng)面方法和利用Desigh-Expert軟件進(jìn)行三因素三水平Box-Behnken Desigh（BBD）中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)[15-17]，優(yōu)化制備PLIPA的最佳工藝參數(shù)。

4）卵蛋白源活性肽對(duì)胰脂肪酶的抑制率測(cè)定參照Z(yǔ)heng和雷啟義的方法測(cè)定[18-19]。經(jīng)測(cè)定，對(duì)硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=4.641 3x-0.024 9，R2=0.999 3。

參照Gómez-ruiz[20]方法進(jìn)行模擬胃腸液消化實(shí)驗(yàn)。參照魯偉[21]的方法測(cè)定多肽含量，將Gly-Gly-Tyr-Arg四肽修改為氧化型谷胱甘肽（GSSG），經(jīng)測(cè)定，GSSG質(zhì)量濃度與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=8.481 1x，其中R2=0.997 9。

對(duì)于金融業(yè)而言，大量的用戶、長(zhǎng)期的運(yùn)營(yíng)產(chǎn)生了海量的數(shù)據(jù)，包括存款貸款、客戶信息、理財(cái)投資等。通過人工智能技術(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，可以更有效地勾勒用戶畫像，制訂個(gè)性化、智能化的客戶方案，提供友好的智能客服助手，從而達(dá)到提升用戶粘性和吸引新的優(yōu)質(zhì)客戶的目標(biāo)。在互聯(lián)網(wǎng)+金融的背景下，金融服務(wù)會(huì)更多依賴信用機(jī)制，以降低呆賬、壞賬的概率，實(shí)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)控制。例如螞蟻金服將人工智能應(yīng)用到互聯(lián)網(wǎng)小貸、保險(xiǎn)、征信、理財(cái)、客戶服務(wù)等多個(gè)領(lǐng)域，將虛假交易率降低了近10倍。芝麻信用通過分析用戶在阿里巴巴業(yè)務(wù)體系內(nèi)的行為得出不同芝麻分，并放以不同金額的消費(fèi)貸款。

1.4.2 PLIPA對(duì)肥胖小鼠的體質(zhì)量控制效果

1）實(shí)驗(yàn)分組 48只C57BL/6J小鼠用基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性飼喂3 d后按體質(zhì)量分為6組：正常對(duì)照組，肥胖模型對(duì)照組，陽(yáng)性藥物組，PLIPA低、高劑量組和復(fù)合組。除正常組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)外，其余5組以高脂飼料飼喂（高脂組），以所有高脂組體質(zhì)量均值>（正常組均值+2×標(biāo)準(zhǔn)誤差）來判斷造模是否成功[22]。造模成功后，各組飼料維持不變，每天同一時(shí)間灌胃給藥10μL/g（以體質(zhì)量計(jì)），正常組、肥胖模型組灌胃等體積生理鹽水；陽(yáng)性藥物組（奧利司他），PLIPA低、高劑量組分別給藥劑量60、400、800 mg/（kg·d），復(fù)合組劑量400 mg/（kg·d）（復(fù)合組中m（茶多酚）∶m（PLIPA）∶m（原花青素）∶m（L-阿拉伯糖）=4∶3∶2∶1）。實(shí)驗(yàn)期間，小鼠自由攝食飲水，每5 d稱一次體質(zhì)量，連續(xù)給藥28 d后取血、解剖。

2）指標(biāo)測(cè)定 給藥結(jié)束后，禁食12 h，稱體質(zhì)量，眼眶采血。血液室溫放置1 h，在4℃冰箱放置30 min，3 000 r/min離心10 min，收集血清，參照試劑盒說明測(cè)定TG、TC、HDL-C及LDL-C含量。采用頸椎脫臼處死小鼠，將小鼠平攤仰臥，用直尺準(zhǔn)確測(cè)量小鼠鼻尖至肛門的長(zhǎng)度為體長(zhǎng)。解剖后，觀察小鼠體內(nèi)臟器變化及脂肪沉著情況，取腹部與皮下脂肪和肝臟，稱質(zhì)量，計(jì)算Lee′s指數(shù)、腹部與皮下脂肪系數(shù)、肝指數(shù)[23-24]，計(jì)算公式分別如下：

式中：I1為L(zhǎng)ee′s指數(shù)；I2為腹部脂肪系數(shù)；I3為皮下脂肪系數(shù)；I4為肝指數(shù)；M為小鼠體質(zhì)量，g；L為體長(zhǎng)，cm；Ma為腹部脂肪濕質(zhì)量，g；MS為皮下脂肪濕質(zhì)量，g；M1為肝臟濕質(zhì)量，g。

1.4.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 體外每組實(shí)驗(yàn)做3個(gè)重復(fù)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（X±SD）”的形式表示，使用Origin 8.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和圖表繪制，采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析，必要時(shí)結(jié)合最小顯著差數(shù)檢驗(yàn)（LSD.test）進(jìn)行分析，P<0.05認(rèn)為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 卵蛋白水解酶的篩選

卵蛋白中所含多種特定生物活性肽的序列，能否被釋放出來并表現(xiàn)其生物活性，關(guān)鍵在于所選酶的種類、水解時(shí)間、加酶量及溫度[25]。經(jīng)測(cè)定未被水解的卵蛋白（空白組）對(duì)胰脂肪酶的抑制率為（13.60±0.43）%，5種蛋白酶的卵蛋白源活性肽對(duì)胰脂肪酶的活性均表現(xiàn)出抑制作用（見表2）。除胃蛋白酶外，各蛋白酶的PLIPA對(duì)胰脂肪酶的抑制率均高于未被水解的卵蛋白對(duì)胰脂肪酶的抑制率，經(jīng)差異顯著性分析，中性蛋白酶、堿性蛋白酶和胃蛋白酶的PLIPA對(duì)胰脂肪酶的抑制率與未被水解的卵蛋白對(duì)胰脂肪酶的抑制率存在顯著性差異（P<0.05），堿性蛋白酶的PLIPA對(duì)胰脂肪酶的抑制率顯著高于其他酶（P<0.05），為（49.77±0.10）%，胃蛋白酶的PLIPA對(duì)胰脂肪酶的抑制率最小，僅為（6.46±6.79）%?？赡苁遣煌拿笇?duì)卵蛋白的作用位點(diǎn)不同，胃蛋白酶主要傾向于剪切氨基端或羧基端芳香族氨基酸或亮氨酸的肽鍵[26]。胰蛋白酶與木瓜蛋白酶主要的水解位點(diǎn)相似，為精氨酸或賴氨酸的羧基端，因此其對(duì)胰脂肪酶的抑制率也接近[27]。中性蛋白酶催化位點(diǎn)多，特異性較差，以水解芳香族疏水性氨基酸殘基作為羧基端肽鍵為主[28]。堿性蛋白酶作用范圍較廣，作用位點(diǎn)傾向于羧基側(cè)具有芳香烴或疏水性的氨基酸，比中性蛋白酶具有更大的水解能力和耐堿力，有較強(qiáng)的耐熱性且具有一定的酯酶活力[28]，最終選用堿性蛋白酶水解卵蛋白制備PLIPA。

表2 5種蛋白酶的卵蛋白源活性肽對(duì)胰脂肪酶的抑制效果Table 2 Inhibitory effect of active peptides from ovalbumin hydrolyzed by five proteases on pancreatic lipase

2.2 堿性蛋白酶水解卵蛋白單因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1 水解時(shí)間 由圖1可知，PLIPA對(duì)胰脂肪酶的抑制率隨水解時(shí)間先增大后減小，在3 h時(shí)，抑制率最大，隨后呈下降趨勢(shì)。其原因可能是隨著水解時(shí)間的延長(zhǎng)，水解液中具有抑制胰脂肪酶功能的肽類被降解，致使其對(duì)胰脂肪酶的抑制率下降。初步選取水解時(shí)間為3 h進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

圖1 水解時(shí)間對(duì)卵蛋白源活性肽抑制胰脂肪酶效果的影響Fig.1 Effect of hydrolysis time on pancreatic lipase inhibitory rate of active peptides from ovalbumin

圖2 加酶量對(duì)卵蛋白源活性肽抑制胰脂肪酶效果的影響Fig.2 Effect of additive amount on pancreatic lipase inhibitory rate of active peptides from ovalbumin

2.2.3 水解溫度 由圖3可以看出，PLIPA對(duì)胰脂肪酶的抑制率隨水解溫度的升高呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)，在60℃時(shí)，抑制率達(dá)到最大值，且與其他溫度具有顯著差異（P<0.05）；在45~60℃范圍內(nèi)，溫度升高，分子間運(yùn)動(dòng)加劇，酶與底物間的接觸機(jī)會(huì)增加，水解產(chǎn)生活性肽的速率增大；當(dāng)溫度高于60℃時(shí)，酶的活性因高溫逐漸降低，底物水解水平降低，產(chǎn)生活性肽的速率減小，對(duì)胰脂肪酶的抑制率隨之降低。初步確定卵蛋白的水解溫度為60℃。

圖3 水解溫度對(duì)卵蛋白源活性肽抑制胰脂肪酶效果的影響Fig.3 Effect of enzymatic hydrolysis temperature on pancreatic lipase inhibitory rate of active peptides from ovalbumin

2.3 卵蛋白水解工藝的響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

根據(jù)單因素結(jié)果，設(shè)計(jì)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)（見表3）。用自變量X1、X2、X3分別表示水解時(shí)間、加酶量、水解溫度，以PLIPA對(duì)胰脂肪酶的抑制率為響應(yīng)值Y，結(jié)果見表4。

表3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)Table 3 Factors and level design for response surface experiment

將表4中的數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，得到回歸方程：Y=51.79+2.55X1+0.79X2+3.19X3+1.74X1X2+1.02X1X3+0.63X2X3+1.54X12-1.99X22+0.53X32。由表5知，該回歸方程模型的P=0.008 4<0.01，模型極顯著，失擬項(xiàng)P=0.241 7>0.05，差異不顯著，說明模型可靠。各因素對(duì)PLIPA抑制胰脂肪酶的效果影響大小為水解溫度>水解時(shí)間>加酶量。一次項(xiàng)中水解溫度、時(shí)間對(duì)PLIPA抑制胰脂肪酶的效果極顯著（P<0.01），加酶量影響不顯著，交互項(xiàng)均不顯著；二次項(xiàng)中僅加酶量顯著。可知水解溫度對(duì)PLIPA抑制胰脂肪酶的效果影響最大，控制好水解溫度對(duì)獲得具有高胰脂肪酶抑制活性的PLIPA至關(guān)重要。

表4 響應(yīng)面分析方案及實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 4 Analysis scheme and experimental results for response surface

表5 回歸模型方差分析Table 5 Analysis of variance of regression model

由圖4可知，PLIPA對(duì)胰脂肪酶的抑制率隨水解時(shí)間的增大而增大，隨水解溫度的升高而減小，隨加酶量的增加先增大后減少。結(jié)合回歸模型，利用Design-Expert.V 8.0.6軟件得出制備PLIPA的最佳工藝條件為：水解時(shí)間4 h，加酶量2 240 U/g，溫度55℃，此時(shí)對(duì)胰脂肪酶抑制率預(yù)測(cè)值為59.04%。經(jīng)3次平行實(shí)驗(yàn)測(cè)得對(duì)胰脂肪酶抑制率為（56.06±2.64）%，與預(yù)測(cè)值接近，說明建立模型準(zhǔn)確可靠，在最優(yōu)水解條件下，可制備PLIPA。

圖4 各因素交互作用對(duì)胰脂肪酶抑制率的影響Fig.4 Interactive effects of various factors on the pancreatic lipase inhibitory rate

2.4 PLIPA模擬胃腸液消化實(shí)驗(yàn)

PLIPA經(jīng)模擬胃液消化后，對(duì)胰脂肪酶的抑制率差異不顯著（P>0.05）；經(jīng)模擬胃液消化再經(jīng)過模擬腸液消化后，其每毫克肽對(duì)胰脂肪酶的抑制率顯著降至0.46%（P<0.05），但胰脂肪酶抑制率為（43.38±0.02）%（見表6），達(dá)到預(yù)期效果，說明PLIPA在模擬胃腸道消化后仍具有較高的胰脂肪酶抑制活性。

表6 PLIPA模擬胃腸液消化后對(duì)胰脂肪酶的抑制率Table 6 Pancreatic lipase inhibitory rate of PLIPA after simulate gastrointestinal digestion

2.5 PLIPA對(duì)肥胖小鼠的影響

2.5.1 PLIPA對(duì)小鼠體質(zhì)量和Lee′s指數(shù)的影響實(shí)驗(yàn)開始前小鼠平均體質(zhì)量(19.00±2.00)g，組間差異不顯著（P>0.05）。建模40 d，高脂飼料喂養(yǎng)組體質(zhì)量均值27.04 g>（正常對(duì)照組均值+2×標(biāo)準(zhǔn)誤差）20.00 g，且高脂組均顯著高于正常組（P<0.01），說明建模成功。小鼠初始體質(zhì)量、給藥初與給藥28 d后小鼠體質(zhì)量平均值和Lee′s指數(shù)變化結(jié)果如表7。

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各處理組與肥胖模型組在攝食量方面差異不顯著（P>0.05），表明灌胃操作對(duì)小鼠攝食量影響不大。由表7可知，建模成功后，高脂飼料喂養(yǎng)小鼠體質(zhì)量均顯著高于正常組（P<0.05）。給藥28 d后，與肥胖模型組相比，各處理組體質(zhì)量均有下降，表明灌胃PLIPA對(duì)減輕小鼠體質(zhì)量有一定控制作用，其中PLIPA復(fù)合組的體質(zhì)量顯著低于肥胖模型組（P<0.05）。徐方旭等[30]研究原花青素對(duì)肥胖小鼠的脂解作用，結(jié)果表明，不同劑量的原花青素均能降低肥胖昆明小鼠的體質(zhì)量，150 mg/(kg·d)原花青素在降低小鼠體質(zhì)量方面效果最佳，小鼠體質(zhì)量降低量為4.0 g。吳建章等[31]研究了L-阿拉伯糖對(duì)營(yíng)養(yǎng)型大鼠的減肥效果，發(fā)現(xiàn)給藥L-阿拉伯糖低、高劑量組（給藥劑量分別為1.5、3 g/（kg·d）），飼養(yǎng)20、40 d后，體質(zhì)量均明顯降低，低劑量組給藥20、40 d體質(zhì)量分別降低72.8、81.5 g，高劑量組給藥20、40 d分別降低132.8、161.5 g。連麗娜等[32]以昆明種小白鼠為研究對(duì)象，研究茶多酚對(duì)小鼠營(yíng)養(yǎng)性肥胖的預(yù)防及減肥作用，減肥組分低、中、高劑量組，給藥劑量分別為200、400、600 mg/（kg·d），給藥茶多酚第45天，經(jīng)與肥胖模型組相比，發(fā)現(xiàn)低、中、高劑量組小鼠體質(zhì)量差異不顯著，給藥第90天，中、高劑量組顯著降低，體質(zhì)量分別降低10.7、11.8 g，而本研究中PLIPA低、高劑量組差異不顯著，可能是給藥劑量偏低或給藥時(shí)間偏短導(dǎo)致。另外，PLIPA復(fù)合組Lee′s指數(shù)相對(duì)于肥胖模型組顯著降低（P<0.01），表明PLIPA復(fù)合物對(duì)塑造高脂小鼠良好體形作用顯著。PLIPA低、高劑量及復(fù)合組與陽(yáng)性藥物組無顯著差異性，表明給藥PLIPA可達(dá)到與陽(yáng)性藥物同樣的效果，甚至較奧利司他控制體質(zhì)量效果更好。

表7 PLIPA對(duì)小鼠體質(zhì)量及Lee′s指數(shù)影響Table 7 Effects of PLIPA on body weight and Lee′s index in mice

2.5.2 PLIPA對(duì)小鼠脂肪系數(shù)和肝指數(shù)的影響 與正常組小鼠相比，高脂喂養(yǎng)的小鼠腹部脂肪濕質(zhì)量、腹部與皮下脂肪系數(shù)和肝指數(shù)均升高（見表8），其中PLIPA復(fù)合組脂肪濕質(zhì)量較肥胖模型組顯著降低（P<0.05）。與肥胖模型組相比，PLIPA處理組、復(fù)合物組與陽(yáng)性藥物組的腹部脂肪系數(shù)降低，表明PLIPA及其復(fù)合物對(duì)高脂喂養(yǎng)小鼠的腹部脂肪具有控制作用。與正常組相比，陽(yáng)性藥物組及PLIPA低、高劑量組、復(fù)合物組的皮下脂肪系數(shù)顯著升高（P<0.05），表明高脂飲食可使小鼠皮下脂肪堆積。與肥胖模型組相比，PLIPA低、高劑量組及復(fù)合組肝指數(shù)有所降低，其中，PLIPA高劑量組肝指數(shù)存在極顯著差異（P<0.01），PLIPA高劑量可控制因肥胖導(dǎo)致肝指數(shù)的異常，且與陽(yáng)性藥物效果相當(dāng)，說明PLIPA可一定程度抑制小鼠體內(nèi)的脂肪堆積，對(duì)體質(zhì)量有控制作用。

表8 PLIPA對(duì)小鼠脂肪濕重及脂肪系數(shù)、肝系數(shù)的影響Table 8 Effects of PLIPA on fat wet weight，fat and liver coefficient in mice

2.5.3 PLIPA對(duì)小鼠血液指標(biāo)的影響 與正常組相比，各高脂組小鼠血脂4項(xiàng)指標(biāo)TC、TG、HDL-C和LDL-C均升高（見表9）。給藥陽(yáng)性藥物、PLIPA及復(fù)合物的處理組，4項(xiàng)指標(biāo)相比肥胖模型組均降低，表明給藥PLIPA可以控制高脂小鼠血脂指標(biāo)的上升，其中，PLIPA復(fù)合組對(duì)LDL-C指標(biāo)的控制存在顯著作用（P<0.05）。

注：表中*表示與正常對(duì)照組相比，P<0.05差異顯著，**表示P<0.01差異極顯著；#表示與肥胖模型對(duì)照組相比，P<0.05差異顯著，##表示P<0.01差異極顯著。

3 結(jié)語(yǔ)

制備卵蛋白源胰脂肪酶抑制肽（PLIPA）的最佳蛋白酶是堿性蛋白酶，最佳工藝條件是在底物質(zhì)量濃度80 g/L的卵蛋白，加入堿性蛋白酶2 240 U/g，55℃、pH 9.0條件下酶解4 h，PLIPA對(duì)胰脂肪酶抑制率達(dá)（56.06±2.64）%。PLIPA經(jīng)胃腸液消化后，對(duì)胰脂肪酶的抑制率有所降低但仍可達(dá)到預(yù)期。小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，PLIPA低、高劑量及復(fù)合組均不同程度控制體質(zhì)量增長(zhǎng)以及脂肪的堆積，達(dá)到控制小鼠體形和體質(zhì)量的目的，且隨著給藥劑量的增大，控制體質(zhì)量的作用更為明顯。另外，與PLIPA低、高劑量組相比，PLIPA與L-阿拉伯糖、茶多酚、原花青素復(fù)合組對(duì)小鼠體質(zhì)量、體形控制效果最佳。需注意的是PLIPA黏性較大，容易堵塞分離柱，未能鑒定出具有抑制脂肪酶酶活的活性肽的結(jié)構(gòu)，需待進(jìn)一步研究。