張金青，賈新鳳，李凡，李玉珠，馬暉玲

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院，草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅省草業(yè)工程實(shí)驗(yàn)室，中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州 730070)

草地早熟禾(Poapratensis)主要分布在寒帶和北溫帶冷涼濕潤(rùn)地區(qū)，是草原與草甸植被組成中的重要成分[1]，其不僅是很多天然草地中的優(yōu)良牧草，同時(shí)也被廣泛應(yīng)用于草坪建植[2]。此外，它還可用于穩(wěn)定侵蝕土壤、改善土壤結(jié)構(gòu)和肥力[3]。由于草地早熟禾品種選育工作滯后，我國(guó)草坪建植中所用的草地早熟禾種子全是國(guó)外引進(jìn)品種，因此培育我國(guó)的優(yōu)良草地早熟禾新品種極其重要，這有賴于對(duì)我國(guó)草地早熟禾野生種或生態(tài)型的搜集。同時(shí)Wieners等[3]也指出若要改善草地早熟禾，如減少其在生產(chǎn)上的管理投入、提高其抗病蟲性、耐低修剪或其他重要農(nóng)藝性狀，則需要收集和鑒定不同的種質(zhì)。甘肅地處青藏高原、黃土高原、蒙新高原和西秦嶺山地的交匯地帶，境內(nèi)地形、氣候復(fù)雜多樣，早熟禾屬植物資源十分豐富，這為搜集不同的草地早熟禾野生種質(zhì)材料提供了便利[5]。近幾年，甘肅野生草地早熟禾的研究主要集中在抗旱性[6]、抗寒性[7]、耐踐踏性[8]、根莖擴(kuò)展性[9]以及生產(chǎn)性能[10]等方面，而有關(guān)其多胚苗的研究較少。

草地早熟禾具有多樣的生殖系統(tǒng)，主要是無(wú)孢子生殖和有性雜交或自交的兼性無(wú)融合生殖體系[11]。無(wú)融合生殖具有雙胚珠、雙胚囊、雙胚雙苗或多苗等特點(diǎn)，這種由一粒多胚種子同時(shí)萌發(fā)出兩株或兩株以上的幼苗稱為多胚苗[12]。母錫金等[13]和田晨霞等[14]的研究均表明草地早熟禾產(chǎn)生雙胚苗和三胚苗是常見的。已有研究表明，植物中多胚與其無(wú)融合生殖之間具有正相關(guān)性，因而許多學(xué)者試圖通過(guò)尋找具有多胚現(xiàn)象的植物材料，進(jìn)而篩選出一些可能具有無(wú)融合生殖特性的種質(zhì)資源。植物多胚現(xiàn)象的發(fā)生涉及多胚的形成和表現(xiàn)兩大階段，前者主要由遺傳背景控制，而后者則受到外界條件的影響[14]，例如黃宇[16]研究發(fā)現(xiàn)閩楠(Phoebebournei)種子在不同貯藏時(shí)間和培養(yǎng)條件下發(fā)芽率和多胚率都有所不同；黃群策等[17]也發(fā)現(xiàn)水稻(Oryzasativa)多胚苗發(fā)生頻率因材料種類或發(fā)芽溫度不同而表現(xiàn)出差異，此外也報(bào)道了種子去稃殼后可使其雙苗率提高32.4%～36.0%。同時(shí)，黃雪梅等[18]也發(fā)現(xiàn)黃花風(fēng)鈴木(Tabebuiachrysantha)種子貯藏溫度從15℃降為10℃時(shí)，其多胚率也由63.3%降為50.0%；王巨媛[19]通過(guò)對(duì)38個(gè)韭菜(Alliumtuberosum)的多胚苗研究，指出其多胚苗發(fā)生頻率與溫度之間存在“低溫效應(yīng)”，即溫度越低多胚苗發(fā)生頻率越高?？梢?，被子植物種子的萌發(fā)環(huán)境和萌發(fā)狀態(tài)對(duì)其多胚苗頻率具有顯著影響，但這些外界條件對(duì)草地早熟禾的多胚苗頻率是否有影響，其影響規(guī)律如何依然不清楚。因此，本研究以采集于甘肅不同地區(qū)的7個(gè)野生草地早熟禾種質(zhì)為材料，探索不同萌發(fā)溫度和種子萌發(fā)時(shí)的不同狀態(tài)(除稃殼)下草地早熟禾多胚苗頻率的變化規(guī)律，以期為揭示草地早熟禾無(wú)融合生殖機(jī)理，選育我國(guó)本土的優(yōu)良草地早熟禾新品種提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為2012年8-9月采集于甘肅隴南市、甘南州夏河縣、張掖市肅南縣、定西市、天水市甘谷縣、清水縣、秦州區(qū)7個(gè)地區(qū)的野生草地早熟禾，種子經(jīng)人工清選、自然干燥后，長(zhǎng)期于25℃保存。用采集地的地名分別表示該地采集的野生草地早熟禾種質(zhì)材料。

1.2 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)前，對(duì)種子進(jìn)行消毒處理，具體步驟為先用自來(lái)水浸泡12 h，然后用70%乙醇消毒2 min，再用20%次氯酸鈉浸泡15 min，最后用無(wú)菌水沖洗5～6次，直到去除次氯酸鈉的刺鼻味，晾干待用。

供試材料每種取8 000粒晾干后的飽滿種子，其中4 000粒置于體式顯微鏡下剝除稃殼，然后帶稃殼種子和除稃殼種子各取1 000粒為1組，每種4組，根據(jù)《牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程—發(fā)芽試驗(yàn)》[20]進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)，4組種子對(duì)應(yīng)的萌發(fā)溫度分別為15℃、20℃、25℃和30℃。其他條件均相同，即在每個(gè)鋪有2層濾紙的9 cm塑料培養(yǎng)皿中放置100粒種子，分別加入4 mL無(wú)菌水，每處理10個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)條件為光照14 h、黑暗10 h，每天采用稱重補(bǔ)水法補(bǔ)充蒸發(fā)的無(wú)菌水，25 d后結(jié)束試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)并記錄各培養(yǎng)皿的發(fā)芽種子和雙胚苗和三胚苗及多胚苗的數(shù)量，然后計(jì)算發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率和雙胚苗、三胚苗及多胚苗的頻率。計(jì)算方法參考田晨霞等[14]的方法：

發(fā)芽勢(shì)(%)=第13 d 發(fā)芽種子總數(shù)/供試種子數(shù)×100%

發(fā)芽率(%)=第25 d 發(fā)芽種子總數(shù)/供試種子數(shù)×100%

雙胚苗率(%)=雙胚苗數(shù)量/第25 d 發(fā)芽種子數(shù)×100%

三胚苗率(%)=三胚苗數(shù)量/第25 d 發(fā)芽種子數(shù)×100%

多苗率(%)=(雙胚苗數(shù)量+三胚苗數(shù)量)/第25 d 發(fā)芽種子數(shù)×100%

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析方法

運(yùn)用Microsoft Excel 2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示；運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行Duncan法比較各處理間的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度和稃殼對(duì)甘肅野生草地早熟禾發(fā)芽特性的影響

2.1.1 溫度和稃殼對(duì)甘肅野生草地早熟禾發(fā)芽勢(shì)的影響 在萌發(fā)溫度和種子狀態(tài)不同時(shí)，7個(gè)地區(qū)采集的種子發(fā)芽勢(shì)不同。相較于帶稃殼，除稃殼后隴南種子的發(fā)芽勢(shì)在相同溫度下均顯著降低，且不管稃殼是否存在，均在15℃時(shí)顯著低于其余溫度，其他溫度間沒有差異。甘南種子的發(fā)芽勢(shì)在除稃殼后均高于帶稃殼，僅15℃差異不顯著；溫度對(duì)其發(fā)芽勢(shì)的影響因種子的狀態(tài)而異，帶稃殼時(shí)，隨著溫度的上升而逐漸升高，除稃殼后，在25℃時(shí)達(dá)到最大值，30℃時(shí)顯著降低。清水種子的發(fā)芽勢(shì)變化較單一，15℃時(shí)顯著低于其余溫度，是否除稃殼的區(qū)別在于：除稃殼后，其發(fā)芽勢(shì)在相同溫度下略有升高。除稃殼后，相同溫度下肅南種子的發(fā)芽勢(shì)均顯著高于帶稃殼，且同一種子狀態(tài)時(shí)其隨著溫度的變化趨勢(shì)相同，均表現(xiàn)為隨著溫度升高而逐漸上升，25℃達(dá)到最大值，且與30℃無(wú)顯著差異。無(wú)論是否帶稃殼，定西種子的發(fā)芽勢(shì)均在15℃時(shí)顯著低于其他溫度，其余溫度間無(wú)顯著差異，稃殼的影響較小，除15℃時(shí)除稃殼顯著高于帶稃殼外，其余溫度下無(wú)顯著差異。秦州種子發(fā)芽勢(shì)隨溫度與稃殼的變化與清水相同，即除稃殼后略有升高；且不管有無(wú)稃殼，均在15℃時(shí)顯著低于其他溫度，且其余溫度間無(wú)顯著差異。稃殼的有無(wú)對(duì)甘谷種子發(fā)芽勢(shì)的影響為：除15℃差異不顯著外，其余溫度下除稃殼均顯著高于帶稃殼；帶稃殼時(shí)，30℃顯著高于15℃，其余溫度間無(wú)顯著差異，除稃殼后，30℃顯著高于20℃和15℃，與25℃差異不顯著(表1)。

表1 溫度和稃殼對(duì)甘肅野生草地早熟禾發(fā)芽勢(shì)的影響

2.1.2 溫度和稃殼對(duì)甘肅野生草地早熟禾發(fā)芽率的影響 不同溫度與是否除稃殼對(duì)不同的野生草地早熟禾種質(zhì)材料的發(fā)芽率影響不同，其中秦州種子的表現(xiàn)較特別，所有的處理間均無(wú)顯著差異(表2)，當(dāng)溫度從15℃升高到30℃時(shí)，帶稃殼種子發(fā)芽率變化幅度最大，降低了2.54%；除稃殼后，發(fā)芽率在25℃變化最大，升高了0.57%。此外，肅南的變化也不同于其余材料，不管是否除去稃殼，其發(fā)芽率均在25℃時(shí)最高，不同的是帶稃殼時(shí)25℃與其他溫度間均差異顯著，除稃殼時(shí)25℃與20℃間無(wú)顯著差異，但顯著高于15℃和30℃；稃殼對(duì)肅南發(fā)芽率的影響與溫度有關(guān)，僅20℃時(shí)除稃殼顯著高于帶稃殼，其他溫度下無(wú)顯著差異。其他材料在種子狀態(tài)相同時(shí)，其發(fā)芽率均隨著萌發(fā)溫度的升高而逐漸降低，不同的材料間其降低程度存在差異，當(dāng)溫度從15℃升高到30℃時(shí)，隴南在除稃殼后降低程度最大，為25.44%。比較稃殼對(duì)其余野生草地早熟禾發(fā)芽率的影響，發(fā)現(xiàn)清水和甘谷在溫度不變時(shí)，其發(fā)芽率均在除去稃殼后升高，不同材料升高程度不同；但是隴南的表現(xiàn)正好相反：在溫度保持不變時(shí)，其發(fā)芽率在除稃殼后顯著下降，最高可下降30.17%，推測(cè)其原因可能是隴南種子的稃殼對(duì)種子的包裹比較緊密，在去除稃殼時(shí)對(duì)種子造成了一定的傷害，進(jìn)而降低了其發(fā)芽率。

表2 溫度和稃殼對(duì)甘肅野生草地早熟禾發(fā)芽率的影響

2.2 溫度和稃殼對(duì)甘肅野生草地早熟禾多胚苗頻率的影響

2.2.1 溫度和稃殼對(duì)甘肅野生草地早熟禾二胚率的影響 不同萌發(fā)溫度下以及種子除去稃殼后隴南和甘谷采集的種子所有處理間均無(wú)顯著差異，這表明它們的二胚率不受外界條件溫度以及種子狀態(tài)的影響(表2)。甘南種子的二胚率變化最明顯，帶稃殼時(shí)，4個(gè)溫度下其二胚率均為0，除稃殼后，其二胚率隨著溫度的升高而增大。清水種子的二胚率隨著溫度的升高先上升再降低，帶稃殼種子在20℃發(fā)芽率達(dá)到最大，且與其余溫度相比差異顯著，除稃殼時(shí)25℃略高于其他溫度，但與其余溫度相比均無(wú)顯著差異。肅南種子的二胚率在種子狀態(tài)不同時(shí)，隨溫度的變化不同：帶稃殼時(shí)隨溫度升高而升高，但各溫度之間差異均不顯著；除稃殼時(shí)隨溫度升高先升高再降低，在25℃達(dá)到最大，但與其余溫度相比均無(wú)顯著差異。定西種子二胚率的變化比較規(guī)律，首先隨著溫度的升高而增大，且在30℃時(shí)顯著高于其他溫度，其余溫度間差異不顯著；其次溫度不變時(shí)，相較于帶稃殼，其二胚率在除稃殼后均略有升高，但差異不顯著。秦州種子的二胚率隨著溫度的升高先升高再降低，在20℃達(dá)到最大值，稃殼的影響在于帶稃殼時(shí)，最大值與其余溫度間均具有顯著差異，除稃殼后，最大值與其余溫度間均無(wú)顯著差異，且在溫度相同時(shí)，除稃殼后其二胚率均顯著高于帶稃殼。

表3 溫度和稃殼對(duì)甘肅野生草地早熟禾二胚率的影響

2.2.2 溫度和稃殼對(duì)甘肅野生草地早熟禾三胚率的影響 甘肅野生草地早熟禾在不同溫度以及除稃殼處理后，各材料的三胚率變化不明顯(表4)，這可能是由于草地早熟禾的三胚苗頻率偏低，導(dǎo)致在不同條件時(shí)變化不明顯。在所有材料中，定西種子的三胚率在任何溫度以及除稃殼后均為0，推測(cè)定西可能并不具有三胚苗的特性。甘南和清水地區(qū)采集種子的三胚率變化比較一致，相較于溫度的變化，其對(duì)于是否除稃殼的變化更敏感，在帶稃殼時(shí)，三胚率均為0，除稃殼后，不同溫度下均有三胚苗的萌發(fā)，但各溫度下差異不顯著；二者所不同的是，甘南種子的三胚率除稃殼后與帶稃殼時(shí)相比無(wú)顯著差異，而清水種子除稃殼后顯著高于帶稃殼。隴南、肅南和秦州地區(qū)采集種子的三胚率在所有處理下均無(wú)差異，表明這三個(gè)材料的三胚率不受溫度和稃殼的影響。在帶稃殼20℃和30℃時(shí)天水種子的三胚率顯著高于其他處理，其余處理下不受溫度和稃殼的影響。

2.2.3 溫度和稃殼對(duì)甘肅野生草地早熟禾多胚率的影響 隴南和甘谷種子的多胚率變化一致，在所有處理下均無(wú)差異，表明它們的多胚率不受萌發(fā)溫度和種子稃殼的影響(表5)。甘南種子的多胚率在帶稃殼時(shí)，不受溫度的影響，各溫度下均為0；除稃殼后，其多胚率隨著溫度的升高而逐漸增大。清水多胚率隨著溫度的升高先上升再降低，稃殼存在與否的差異在于前者在20℃達(dá)到最大值，與其余溫度間有差異，但不顯著，除稃殼后20℃和25℃間無(wú)顯著差異，且均高于15℃和30℃。肅南的多胚率在除稃殼25℃時(shí)達(dá)到最大值，顯著高于帶稃殼15℃，與其余溫度有差異但不顯著。定西由于其三胚率均為0，故其多胚率的變化與二胚率相同，均表現(xiàn)為隨著溫度的升高而增大，且在30℃時(shí)顯著高于其他溫度，其余溫度間差異不顯著；溫度不變時(shí)，相較于帶稃殼，定西的多胚率在除稃殼后均略有升高，差異不顯著。秦州的多胚率隨著溫度的升高先升高再降低，20℃時(shí)達(dá)到最大值，且?guī)э麣r(shí)顯著高于其余溫度。

表5 溫度和稃殼對(duì)甘肅野生草地早熟禾多胚率的影響

3 討論

3.1 溫度及稃殼對(duì)草地早熟禾發(fā)芽特性的影響

3.1.1 溫度對(duì)草地早熟禾發(fā)芽特性的影響 溫度影響種子發(fā)芽是通過(guò)影響其代謝反應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的[22]，當(dāng)環(huán)境溫度過(guò)高或過(guò)低時(shí)，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞中的酶失活，致使細(xì)胞不能進(jìn)行正常的生理代謝而死亡[23]。發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽率可反映種子發(fā)芽的速度和整齊度，一般來(lái)說(shuō)，發(fā)芽率高、發(fā)芽勢(shì)強(qiáng)，表示出苗快而齊，苗壯，反之則表示出苗不齊、弱苗多。本研究發(fā)現(xiàn)，不管是否除稃殼，甘肅野生草地早熟禾的發(fā)芽勢(shì)均隨著溫度的升高而上升。發(fā)芽率的變化在除稃殼后以及不同的材料之間均不相同，除肅南種子外，總體趨勢(shì)為隨著溫度的上升而下降。筆者前期預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)溫度升高到35℃時(shí)，草地早熟禾材料均不發(fā)芽，這表明草地早熟禾作為冷季型草坪草，對(duì)低溫耐性較強(qiáng)，而對(duì)高溫則比較敏感。然而，溫度較低時(shí)，雖然其發(fā)芽率較高，但發(fā)芽勢(shì)過(guò)低，存在出苗不齊、弱苗多的現(xiàn)象。此外，不同材料發(fā)芽狀況受溫度的影響并不相同，這可能與種子原產(chǎn)地的氣候條件有關(guān)，因此在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)根據(jù)具體的草地早熟禾材料篩選其適宜的發(fā)芽溫度。

3.1.2 稃殼對(duì)草地早熟禾發(fā)芽特性的影響 稃殼是指禾本科植物小穗基部的苞片，具有保護(hù)稃果的作用[25]。然而，有些稃殼厚而堅(jiān)硬，使種子不透水、不透氣或?qū)ε呔哂袡C(jī)械阻礙作用，而抑制種子萌發(fā)[25]。稃殼對(duì)不同植物發(fā)芽率的影響差異較大，黃群策[17]報(bào)道，水稻種子去殼可使其發(fā)芽率提高3%左右；趙昕等[27]研究發(fā)現(xiàn)，除稃殼后結(jié)縷草(Zoysiajaponica)種子發(fā)芽率明顯高于對(duì)照；王禹等[28]發(fā)現(xiàn)湘雜芒2號(hào)(Miscanthussinensis×lutarioripari)種子除稃殼后，發(fā)芽率由66%提高到86%。也有相關(guān)研究報(bào)道除稃殼降低了種子發(fā)芽率，如譚志軍等[26]的研究；任萬(wàn)軍等[29]也報(bào)道去除稃殼處理可使水稻種子的成苗率降低26.1%，且不同雜交稻組合間差異較大。本研究發(fā)現(xiàn)，不同來(lái)源的草地早熟禾在除稃殼后，發(fā)芽率的變化不同。這表明稃殼對(duì)種子發(fā)芽的影響因植物品種和來(lái)源而異。推測(cè)除稃殼處理促進(jìn)發(fā)芽率的原因可能是去殼消除了稃殼上的不透氣性、不透水性和稃殼的機(jī)械約束作用[25]，也可能是稃殼中具有發(fā)芽抑制物，去除稃殼意味著發(fā)芽抑制物的消除，因而提高了發(fā)芽率。降低種子發(fā)芽率可能是種子在除稃過(guò)程中，傷害了稃果的果皮和種皮，導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)外滲，進(jìn)而引起污染[26]。因此，稃殼對(duì)發(fā)芽的影響可能是多個(gè)因素平衡后的表現(xiàn)，故是否能用除稃殼的方式提高植物的發(fā)芽率，則需要根據(jù)具體的材料做相關(guān)的試驗(yàn)后才能應(yīng)用于實(shí)踐。

3.2 溫度及稃殼對(duì)草地早熟禾多胚苗頻率的影響

3.2.1 溫度對(duì)草地早熟禾多胚苗頻率的影響 植物多胚現(xiàn)象的發(fā)生涉及多胚的形成和表現(xiàn)兩大階段，前者受到遺傳背景的控制，其表現(xiàn)又受到外界條件的影響，故其發(fā)生頻率受環(huán)境因素如溫度的影響[14]。本研究發(fā)現(xiàn)草地早熟禾的多胚苗率因材料種類或萌發(fā)溫度不同而表現(xiàn)出差異，這與前人的研究結(jié)果相似[16]。此外，隴南、甘南和甘谷種子的多胚率不隨溫度改變，這表明不同的材料多胚率對(duì)溫度的敏感性及反應(yīng)度都不同。譚志軍等[26]認(rèn)為植物多胚率是由基因型所決定的，而基因表達(dá)受外界環(huán)境的影響，故適宜的萌發(fā)溫度是植物多胚充分表達(dá)的因素之一。這可能是不同溫度時(shí)，草地早熟禾多胚苗頻率不同的原因。前人研究報(bào)道適當(dāng)?shù)母邷靥幚碛欣谒径嗯呙珙l率的提高，因?yàn)檫m宜的高溫可提高種子胚乳貯藏物質(zhì)的轉(zhuǎn)化效率，利于多胚的萌發(fā)[26]。然而，本試驗(yàn)結(jié)果不同于該報(bào)道，僅定西種子在30℃時(shí)多胚率最高，而清水和秦州種子在20℃時(shí)，其多胚率高于其他溫度，這可能是由于研究材料不同而造成的差異，也可能與實(shí)驗(yàn)中所設(shè)置的具體溫度范圍有關(guān)。

3.2.2 稃殼對(duì)草地早熟禾多胚苗頻率的影響 種子稃殼的有無(wú)影響植物的多胚苗頻率，如黃群策[17]等報(bào)道，在ASDOR05-01和ASDOR05-02水稻群體內(nèi)，種子去稃殼后使其雙苗頻率分別提高了32.4%和36.0%。本研究發(fā)現(xiàn)，不同的材料除稃殼后，多胚率變化不同，除極個(gè)別外，大多數(shù)材料在同一溫度下除稃殼后，多胚苗頻率會(huì)有所升高。這可能是由于合子胚是有性生殖，具有較強(qiáng)的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，且都較靠近稃殼上唯一的萌發(fā)孔，故容易萌發(fā)。然而，另一個(gè)胚是無(wú)性生殖胚，與有性胚相比其生長(zhǎng)狀態(tài)處于劣勢(shì)，且一般都遠(yuǎn)離萌發(fā)孔，故稃殼對(duì)其萌發(fā)具有明顯的阻礙作用，因此，稃殼的存在直接影響了多胚的發(fā)生[30]。

3.3 提高草地早熟禾多胚苗頻率的措施

草地早熟禾不僅是草坪草，還可以作為牧草利用，多胚苗的萌發(fā)及成苗會(huì)增加其地上生物量，增大裸地的覆蓋率，提高種子的產(chǎn)量。此外，康慶華[31]認(rèn)為多胚苗可作為篩選無(wú)融合生殖種質(zhì)的標(biāo)志性狀，可以將具有雙胚性的材料作為誘導(dǎo)無(wú)融合生殖后代的遺傳基礎(chǔ)，同時(shí)多胚現(xiàn)象在胚胎發(fā)育研究、雜種優(yōu)勢(shì)固定、單倍體育種及自交系選育等方面均有重要價(jià)值[32]。因此，提高多胚苗頻率在實(shí)際生產(chǎn)中具有重要意義。研究報(bào)道，對(duì)于具有潛在能力的多胚種子，萌發(fā)條件對(duì)多胚苗的表達(dá)起決定性作用，故優(yōu)化萌發(fā)條件對(duì)于多胚苗的獲得極為重要。因此，可通過(guò)控制種子萌發(fā)條件提高其多胚率，如種子去殼、預(yù)處理溫度、Zn2+或H2O2處理、Co60-Y射線輻射、萌發(fā)溫度以及外源激素(IAA、KT、GA3、2,4-D、6-BA)處理[33]。另外，馮輝等[34]也研究報(bào)道，用0.6%二甲基亞砜(DMSO)或失活花粉處理韭菜，其多胚苗發(fā)生頻率明顯提高。

本研究結(jié)果表明，草地早熟禾主要有單胚苗、二胚苗和三胚苗3種種苗，其頻率大小為單胚苗>二胚苗>三胚苗，且不同野生材料的多胚頻率存在差異，萌發(fā)溫度和去除稃殼對(duì)其影響也不同，這表明草地早熟禾的多胚現(xiàn)象存在材料特異性，同時(shí)該結(jié)果也表明了草地早熟禾的種子萌發(fā)環(huán)境對(duì)其多胚苗頻率具有一定的影響。因此，前人所報(bào)道的Zn2+、H2O2、DMSO、Co60-Y以及外源激素是否能提高草地早熟禾的多胚率，適宜的濃度和處理方式等問(wèn)題依然需要進(jìn)一步的試驗(yàn)后才能確定。

4 結(jié)論

通過(guò)對(duì)去除稃殼的7個(gè)甘肅野生草地早熟禾材料的發(fā)芽特性和多胚苗率分別于15℃、20℃、25℃和30℃條件下的統(tǒng)計(jì)分析表明，草地早熟禾的發(fā)芽特性和多胚苗頻率隨著材料來(lái)源、萌發(fā)溫度和種子狀態(tài)的不同而異。其中隴南和甘谷種子在所有處理下其多胚率均無(wú)顯著差異，以省時(shí)、省力、經(jīng)濟(jì)的原則篩選出其余材料多胚率最高的萌發(fā)條件分別為：甘南和定西種子為30℃，且前者需要去除稃殼；清水和肅南種子為25℃，且后者需要去除稃殼；秦州種子為20℃。具體的草地早熟禾材料多胚率最高的萌發(fā)條件不盡相同，需提前進(jìn)行試驗(yàn)才能確定其最適萌發(fā)條件。