朱虹

【關(guān)鍵詞】動物源性食品;抗生素;殘留檢測;前處理技術(shù)

【中圖分類號】TS207.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1674-0688（2021）06-0050-03

0 引言

隨著人們生活水平的日益提高，肉食成為人們餐桌中不可缺少的食品，但是動物在飼養(yǎng)過程中常常會使用一些抗生素，于是不可避免地造成動物源性食品中的抗生素殘留，而人們長期不斷地攝入殘留的抗生素，導(dǎo)致抗生素在體內(nèi)積蓄、造成抗藥性或誘導(dǎo)其他疾病等問題[1]。因此，動物源性食品的質(zhì)量安全問題必須引起重視，能快速、簡便、低成本地對動物源性食品抗生素殘留進(jìn)行檢測，是當(dāng)下亟待解決的問題。

抗生素殘留分析一般包括樣品前處理和檢測兩個部分?？股貧埩舻臋z測方法有高效液相色譜法（HPLC）、質(zhì)譜法（MS）、液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS）、氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）、免疫法等。其中，最常用的檢測方法是高效液相色譜法（HPLC）和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（HPLC-MS），用這兩種方法進(jìn)行檢測之前都需要進(jìn)行樣品前處理。樣品前處理是抗生素檢測技術(shù)的關(guān)鍵，直接影響到分析檢測的準(zhǔn)確度、成本和檢測效率。因此，尋找簡便、有效、低成本的樣品前處理技術(shù)勢在必行。

1 樣品前處理技術(shù)

近年來，人們對動物源性食品中抗生素殘留的前處理技術(shù)的研究取得了較大進(jìn)展，以下對常用的樣品前處理方法進(jìn)行介紹，并對每種前處理方法的特點進(jìn)行總結(jié)。

1.1 液-液萃?。↙LE）

液-液萃取[2]是利用相似相溶原理，基于待測物在不同溶劑間的分配系數(shù)不同，采用合適的溶劑作為萃取劑，經(jīng)過勻漿、振搖、離心等步驟，將待測物轉(zhuǎn)移到萃取劑中而實現(xiàn)分離的樣品前處理方法。

馬俊美等人[3]用超高效液相色譜-質(zhì)譜法（UPLC-MS）檢測豬肉中9種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，用乙腈重復(fù)進(jìn)行液-液萃取，濃縮后，用0.1%甲酸溶液-甲醇溶解殘渣后，進(jìn)行UPLC-MS測定，結(jié)果表明，9種待測抗生素在0.5～100 ng/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;定量限范圍在0.1～0.4 μg/kg;加標(biāo)量為0.1～4.0 μg/kg時，方法回收率在69.4%～107.6%。

此方法操作簡單，對試驗條件和儀器要求不高，但步驟煩瑣、耗時，并使用大量具有毒性的有機溶劑，不利于健康、環(huán)保、安全，且樣品干擾物質(zhì)含量較高時往往達(dá)不到理想的萃取效果。

1.2 微波輔助萃?。∕AE）

微波輔助萃取[4]是微波與傳統(tǒng)溶劑提取法相結(jié)合的一種新型前處理技術(shù)。該方法是在微波作用下，選擇合適的溶劑，對目標(biāo)物進(jìn)行選擇性萃取的前處理方法。

ZHANG等人[5]建立了運用微波輔助萃取技術(shù)對魚肉進(jìn)行前處理，通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時檢測魚肉中含5種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素在內(nèi)的54種藥物，檢出限為0.01～0.50 μg/kg，回收率為56.3%～119.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.3%～17.1%。

微波輔助萃取法具有效率高、速度快、溶劑消耗量少、操作簡單等優(yōu)點。但是在實驗過程中，應(yīng)注意控制萃取的溫度和時間，否則溫度過高或過長容易造成目標(biāo)物的分解而降低回收率。

1.3 加壓液體萃取法（PLE）

加壓液體萃取技術(shù)[6]是一種將高溫高壓條件與溶萃取劑相結(jié)合，對固體或半固體樣品進(jìn)行萃取的前處理方法，高溫高壓下萃取劑的黏度低、溶解能力高，可以使待測物從基質(zhì)中加快解析進(jìn)入萃取劑中。

Jim é nez等人[7]對雞蛋中41種抗生素殘留進(jìn)行測定，在70 ℃下，用乙腈和丁二酸緩沖液（pH6.0）按1∶1混合進(jìn)行PLE，萃取后直接進(jìn)行UPLC-MS/MS分析，精密度在10%～20%。

Andreas等人[8]開發(fā)了一種檢測肉制品中的伊維菌素B1的含量，用95%甲醇-5%水作為萃取劑，120 ℃、10 MPa提取10 min，提取液經(jīng)SPE柱凈化，通過HPLC檢測，回收率接近于100%。

該方法相較于傳統(tǒng)的液-液萃取技術(shù)，可實現(xiàn)自動化萃取，萃取時間縮短，萃取溶劑使用量減少，進(jìn)而降低了環(huán)境污染，但此方法對儀器設(shè)備有一定的要求。

1.4 固相萃?。⊿PE）

固相萃取[9]是一種基于液-固分離萃取的樣品預(yù)處理技術(shù)，利用固體吸附劑吸附溶液中的待測物，使待測物與樣品基體和干擾物質(zhì)分離，再用洗脫液洗待測物。常用的固相萃取填料有硅膠、氧化鋁等。固相萃取有離線技術(shù)和在線技術(shù)，在線固相萃取可直接與HPLC、HPLC/MS等連接。

陳毓芳[10]建立了肌肉組織中四環(huán)素類抗生素的高靈敏度測定方法，勻質(zhì)后的動物組織通過4.8%高氯酸溶液的提取，提取液用Oasis HLB固體小柱進(jìn)行萃取凈化，進(jìn)行液相色譜測定。檢出限為20～100 μg/kg，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.1%～7.1%，平均回收率為80%～82%。

薛婷婷等人[11]開發(fā)了魚類中萬古霉素和去甲萬古霉素殘留量的檢測方法。樣品經(jīng)0.1%甲酸水-乙腈混合溶液提取，用正己烷去脂，固相萃取柱C18和PCX凈化后，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）進(jìn)行檢測。方法檢出限為2.0 μg/kg，定量限為5.0 μg/kg，平均回收率為92.8%～96.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.5%～7.0%。

固相萃取法需要的有機溶劑量少、分離效果好、回收率高、操作簡單，但其樣品凈化量少，富集倍數(shù)有限，部分固相萃取凈化效果不理想，有的樣品需要同時利用幾種不同類型的固相萃取柱進(jìn)行萃取凈化才能獲得理想的結(jié)果。

1.5 固相微萃取（SPME）

隨著科技的發(fā)展，人們在固相萃取技術(shù)的基礎(chǔ)上逐漸發(fā)展起了固相微萃取技術(shù)。固相微萃取是根據(jù)有機物與溶劑之間“相似相溶”的原理，利用涂有熔融石英纖維的固定相對待測組分的吸附作用，將組分從試樣基質(zhì)中進(jìn)行萃取并富集的前處理方法。

Dong Zong Mu等人[12]開發(fā)了一種建立直接浸入式固相微萃取-高效液相色譜法對廢水中6種四環(huán)素殘留檢測的方法，檢出限達(dá)到0.36～0.71 μg/L，該方法已成功用于蛋禽養(yǎng)殖廢水中四環(huán)素類殘留量的檢測。

固相微萃取集萃取、富集和進(jìn)樣于一體，操作簡單，前處理過程中不用有機溶劑，減少了對環(huán)境的污染。但是，固相微萃取相對于傳統(tǒng)的SPE萃取方式，回收率相對較低，對于復(fù)雜基質(zhì)的樣品萃取效果不佳，且無法分離提取處于結(jié)合態(tài)的待測物。

1.6 基質(zhì)固相分散（MSPD）

基質(zhì)固相分散[13]是將樣品與固相萃取填料一起混合研磨，得到半固態(tài)的混合物，并將其作為填料裝柱，然后選擇合適的淋洗劑洗脫出各種待測物。該技術(shù)結(jié)合了傳統(tǒng)樣品前處理中的勻漿、組織細(xì)胞裂解、提取、凈化等多個過程，簡化了操作步驟，節(jié)省了時間，避免了樣品的損失。

王學(xué)翠等人[14]建立的以多壁碳納米管為分散材料的基質(zhì)固相萃取技術(shù)，檢測了牛奶中6種四環(huán)素類抗生素。實驗取多壁碳納米管及作為輔助研磨的EDTA和草酸，與樣品混合研磨均勻裝柱，經(jīng)含0.01 mol/L甲酸的甲醇洗脫后，HPLC-UV測定，6種四環(huán)素的檢出限為0.01～0.03μg/mL，回收率在78.7%～105.2%。

該方法樣品用量少、提取凈化效率高、耗時少、節(jié)省溶劑，但研磨的粒度大小和填料技術(shù)的差別會使結(jié)果有所差異，因此使此方法不易標(biāo)準(zhǔn)化。

1.7 QuEChERS法

QuEChERS法[15]是近年來發(fā)展起來的一種樣品前處理技術(shù)。QuEChERS是快速（Quick）、簡單（Easy）、便宜（Cheap）、有效（Effective）、耐用（Rugged）和安全（Safe）的縮寫，是集以上優(yōu)勢于一體的樣品前處理技術(shù)。該方法是勻質(zhì)后的樣品經(jīng)溶劑提取后，加入固體干燥劑和雜質(zhì)吸附劑，與基質(zhì)中的干擾物質(zhì)結(jié)合，然后再通過離心方式去除，以達(dá)到凈化的目的。

薛榮旋等人[16]建立一種QuEChERS技術(shù)結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）測定魚肉中抗生素殘留的檢測方法。樣品首先經(jīng)過1%甲酸乙腈提取，提取液用QuEChERS體系凈化后，直接進(jìn)行UPLC-MS/MS測定，結(jié)果諾氧沙星、洛美沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、恩諾沙星和培氟沙星6種抗生素的檢出限為1.0～2.5 μg/kg，回收率為86.6%～120%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.59%～7.6%。

卜明楠等人[17]建立了QuEChERS結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定蝦肉中72種獸藥殘留的檢測方法。樣品經(jīng)5%醋酸乙腈、無水硫酸鈉和氯化鈉勻質(zhì)提取后，提取液經(jīng)C18為分散劑的QuEChERS技術(shù)充分提取后，提取液經(jīng)濃縮后，進(jìn)行測定。定量下限范圍為0.02～33.58 μg/kg。除了熊脫氧膽酸、頭孢喹咪、頭孢吡啉、林可霉素、頭孢噻呋、二嗪農(nóng)的回收率在38%～58%，其他獸藥殘留物的回收率在61%～119%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.6%～20%。

該方法對實驗裝置要求低，操作簡便，溶劑使用量小，污染少，回收率高。但該方法對于高蛋白和基質(zhì)較為復(fù)雜的樣品的應(yīng)用有一定局限性，還需要開發(fā)新型的萃取劑和凈化劑。

2 結(jié)論和展望

樣品的前處理是動物源性食品分析過程中最薄弱的環(huán)節(jié)，也是分析過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。樣品前處理的步驟越少越好，因為每增加一步處理過程都會導(dǎo)致目標(biāo)物的損失。目前樣品前處理的儀器設(shè)備比較多，有些價格較貴，造成檢測成本增加。動物源性食品分析前處理方法眾多，可根據(jù)樣品基質(zhì)和抗生素殘留的特點，選取合適的前處理方法。目前，前處理技術(shù)已經(jīng)成為動物源性食品中抗生素殘留分析的核心研究課題，研究選擇性高、有機試劑消耗量少、樣品用量少、成本低、高通量、簡便、高效和環(huán)保的前處理方法是今后的發(fā)展趨勢。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]黎曉林.畜產(chǎn)品中常用獸藥殘留危害及檢測方法[J].食品安全導(dǎo)刊，2019（18）：120.

[2]吳長青，馮俊，沈浥，等.動物源性食品中抗生素殘留的分類及檢測方法的研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2019，10（21）：7126-7132.

[3]馬俊美，孫磊，曹梅榮，等.超高效液相色譜-四極桿/

靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜法測定豬肉中9種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素[J].食品科學(xué)，2020，41（4）：273-279.

[4]徐晨，范云場.微波輔助萃取在色譜分析樣品前處理中的應(yīng)用[J].應(yīng)用化工，2018，47（2）：343-346.

[5]Zhang Y，Guo W，Yue Z，et al.Rapid determination of 54 pharmaceutical and personal care products in fish samples using microwave-assisted extraction—Hollow fiber—Liquid/solid phase microextraction[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life，2017，1051（4）：41-53.

[6]劉勇建，牟世芬.加速溶劑萃取技術(shù)及萃取系統(tǒng)[J].環(huán)境化學(xué)，2002（4）：410-411.

[7]V.Jiménez，A.Rubies，F(xiàn).Centrich，et al.Development and validation of a multiclass method for the analysis of antibiotic residues in eggs by liquid chromatography–tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2011，11（5）：1443-

1451.

[8]Abend A M，Chung L，Mccollum D G，et al.Development and validation of an automated extraction method （accelerated solvent extraction） and a r-

everse-phase HPLC analysis method for assay of ivermectin in a meat-based chewable formulation.[J].Journal of Pharmaceutical & Biomedical Analysis，2003，31（6）：1177-1183.

[9]李周敏，孫艷艷，姚開安，等.動物源性食品中抗生素殘留檢測前處理及其分析方法研究進(jìn)展[J].藥物分析雜志，2013，33（6）：901-906.

[10]陳毓芳.肌肉組織中四環(huán)素類抗生素的固相萃取-液相色譜法測定[J].分析測試學(xué)報，2003（3）：97-99.

[11]薛婷婷，黃冬梅，婁曉祎，等.雙固相萃取/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定魚類中糖肽類抗生素殘留量[J].分析試驗室，2018，37（1）：36-39.

[12]Dong Zong Mu，Cheng Lu，Sun Tong，et al.Ca-

rboxylation modified meso-porous carbon aerogel templated by ionic liquid for solid-phase microextraction of trace tetracyclines residues using HPLC with UV detection[J].Microchimica Acta，2021，

188（2）：43.

[13]Barker Steven A.Matrix solid phase dispersion （MSPD）[J].Journal of biochemical and biophysical methods，2007，70（2）：151-162.

[14]王學(xué)翠，劉冰，張璐鑫，等.多壁碳納米管基質(zhì)固相分散-高效液相色譜測定牛奶中6種四環(huán)素[J].食品科學(xué)，2011，32（14）：206-209.

[15]秦立得，趙思俊，宋翠平.QuEChERS法在獸藥殘留檢測中的優(yōu)化與應(yīng)用[J].中國動物檢疫，2020，37（12）：98-107.

[16]薛榮旋，盧麗明，黃誠，等.QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中6種氟喹諾酮類抗生素殘留量[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2020，32（5）：519-523.

[17]卜明楠，石志紅，康健，等.QuEChERS結(jié)合LC-MS/MS同時測定蝦肉中72種獸藥殘留[J].分析測試學(xué)報，2012，31（5）：552-558.