尹令虹 劉永軍 刁青云

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所，北京 100093）

1 引言

蜜蜂作為一類(lèi)重要的傳粉昆蟲(chóng)，每年為全球農(nóng)業(yè)生產(chǎn)做出巨大貢獻(xiàn)[1]。但近年來(lái)世界多個(gè)地方均出現(xiàn)蜂群崩潰失調(diào)（CCD），造成這種現(xiàn)象的原因主要包括蜜蜂病蟲(chóng)害、真菌細(xì)菌感染、農(nóng)用化學(xué)藥品濫用以及多種因素的協(xié)同作用[2-4]，其中新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑被認(rèn)為是造成蜂群數(shù)量下降的重要因素[5]。新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑具有神經(jīng)毒性，在殺滅病害蟲(chóng)的同時(shí)，在水源、植物花蜜和花粉上也有殘留，會(huì)對(duì)非靶向生物（比如蜜蜂）產(chǎn)生嚴(yán)重的影響[6]。新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑主要作用于蜜蜂的中央神經(jīng)系統(tǒng)[7]，阻斷乙酰膽堿的正常傳遞，可誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡[8]，蘑菇體失活[9]，從而因影響與采集行為相關(guān)的嗅覺(jué)、觸覺(jué)感知以及學(xué)習(xí)記憶行為的編碼[10,11]，導(dǎo)致蜜蜂辨別方向和飛行能力下降[12]，影響歸巢能力[13,14]。

蜜蜂對(duì)于花朵氣味和花蜜之間的聯(lián)想學(xué)習(xí)記憶對(duì)于蜜蜂的采集行為起著重要的作用。蜜蜂學(xué)習(xí)記憶能力作為蜜蜂健康與否的外在表現(xiàn)，也是檢測(cè)化學(xué)物質(zhì)對(duì)蜜蜂是否安全的重要指標(biāo)[15]。有研究表明野外蜜蜂在接觸過(guò)新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑后，記憶能力會(huì)下降，主要表現(xiàn)為工蜂的尋巢成功率下降[16]，歸巢時(shí)間增加[17,18]。亞致死濃度的吡蟲(chóng)啉[19,20]或其主要的代謝產(chǎn)物[21]可以導(dǎo)致意大利蜜蜂短時(shí)程記憶和長(zhǎng)時(shí)程嗅覺(jué)學(xué)習(xí)記憶受損[22,23]，Shi 等[24]的研究表明0.5、1、2μg 啶蟲(chóng)脒均會(huì)降低蜜蜂的學(xué)習(xí)記憶能力。

前人的研究大部分針對(duì)成年蜜蜂及蜂群開(kāi)展研究，蜜蜂整個(gè)生命周期共經(jīng)歷卵、幼蟲(chóng)、蛹以及成蟲(chóng)4 個(gè)階段，關(guān)于蜜蜂幼蟲(chóng)期暴露在新煙堿類(lèi)農(nóng)藥環(huán)境中，出房后對(duì)蜜蜂影響的相關(guān)研究相對(duì)較少。Yang等[25]的研究表明幼蟲(chóng)階段暴露0.04ng 吡蟲(chóng)啉，會(huì)影響成年蜜蜂的學(xué)習(xí)記憶。此外，目前已有的研究大多針對(duì)毒性較大的吡蟲(chóng)啉、噻蟲(chóng)嗪開(kāi)展的，而對(duì)毒性較低的噻蟲(chóng)啉的研究相對(duì)較少。我們的研究旨在模擬野外蜜蜂實(shí)際生存情況，將意大利蜜蜂幼蟲(chóng)暴露于不同濃度的噻蟲(chóng)啉中，去探究亞致死濃度噻蟲(chóng)啉對(duì)意大利蜜蜂的發(fā)育以及嗅覺(jué)聯(lián)想學(xué)習(xí)記憶能力在經(jīng)過(guò)蛹階段發(fā)育后是否仍然受到噻蟲(chóng)啉的影響，以期為噻蟲(chóng)啉的合理使用提供理論依據(jù)。

2 材料與方法

2.1 供試蜜蜂

實(shí)驗(yàn)于2020年7月至2020年9月在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)蜜蜂為西方蜜蜂（Apis mellifera），取自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所北京香山實(shí)驗(yàn)蜂場(chǎng)。

2.2 蜜蜂幼蟲(chóng)飼料制備

蜜蜂幼蟲(chóng)食物嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)方法制備，按照培養(yǎng)天數(shù)的不同，飼料分為A、B、C 類(lèi)（表1），分別由新鮮蜂王漿、酵母粉、果糖、葡萄糖和無(wú)菌水按不同比例配置而成[26]。根據(jù)蜜蜂幼蟲(chóng)發(fā)育時(shí)間分別提供不同種類(lèi)的飼料，每只幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室第1～2天提供飼料A 20μl，第3 天提供飼料B 20μl，第4 天提供飼料C 30μl，第5 天提供飼料C 40μl，第6 天提供飼料C 50μl。10mg 噻蟲(chóng)啉粉末溶解于1ml 二甲基亞砜（DMSO）溶液中，然后添加39ml 蒸餾水配備濃度為250mg/L 的噻蟲(chóng)啉初始溶液，將配備好的噻蟲(chóng)啉初始溶液分裝成1ml 管后保存在-80℃冰箱。實(shí)驗(yàn)組幼蟲(chóng)食用經(jīng)噻蟲(chóng)啉處理后的飼料制備，用配好的飼料稀釋噻蟲(chóng)啉初始溶液分別得到濃度為0.5、1mg/L 的處理飼料，對(duì)照組幼蟲(chóng)提供未添加噻蟲(chóng)啉的正常飼料。

2.3 蜜蜂幼蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)

取三張空白的蜂脾，將三只健康的蜂王分別關(guān)在不同的蜂脾上供其產(chǎn)卵，將蜂脾分別放入不同的蜂箱中。三日后將成功孵化出的蜜蜂幼蟲(chóng)小心轉(zhuǎn)移到滅過(guò)菌的48 孔培養(yǎng)皿中，放到培養(yǎng)箱內(nèi)飼養(yǎng)。培養(yǎng)箱溫度為35℃，濕度為95%。每個(gè)濃度處理組在三個(gè)不同的蜂脾上各取48只蜜蜂幼蟲(chóng)組成三個(gè)生物學(xué)重復(fù)，即每個(gè)濃度組共取144 只幼蟲(chóng)。將蜜蜂幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到48孔培養(yǎng)板上的時(shí)間記錄為第1 天（D1），整個(gè)飼養(yǎng)過(guò)程進(jìn)行18 天（D1-D18）。D1-D6 為蜜蜂幼蟲(chóng)期，每天的飼料配方如表1所示。待飼養(yǎng)至第7 天將蜜蜂幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到24 孔培養(yǎng)板中繼續(xù)飼養(yǎng)，此后蜜蜂幼蟲(chóng)進(jìn)入蛹期，在蛹期培養(yǎng)箱溫度保持35℃不變，濕度更改為75%，無(wú)需提供食物直至蜜蜂出房。在蜜蜂幼蟲(chóng)飼養(yǎng)整個(gè)過(guò)程中，每天統(tǒng)計(jì)幼蟲(chóng)存活數(shù)量，并且在第7天轉(zhuǎn)換培養(yǎng)板時(shí)對(duì)每只幼蟲(chóng)進(jìn)行體重測(cè)量。在幼蟲(chóng)飼養(yǎng)到第8 天，根據(jù)每只幼蟲(chóng)的發(fā)育情況，計(jì)算不同濃度組的化蛹率。在飼養(yǎng)的第19 天于早上8 時(shí)、下午3時(shí)分別統(tǒng)計(jì)不同處理組蜜蜂的羽化率。

表1 實(shí)驗(yàn)室幼蟲(chóng)飼養(yǎng)飼料配方

2.4 蜜蜂對(duì)蔗糖敏感性行為測(cè)試

在飼養(yǎng)的第19 天，從每個(gè)處理組隨機(jī)選取40 只剛出房的蜜蜂進(jìn)行伸喙反射（PER）的行為測(cè)試。將測(cè)試蜜蜂先饑餓處理2 小時(shí)后，將蜜蜂固定在空心塑料管中，保證其身體固定，頭部露在管外并且可以自由活動(dòng)，同時(shí)使用攝像頭同步監(jiān)測(cè)拍攝。首先進(jìn)行蜜蜂對(duì)不同濃度蔗糖敏感性的測(cè)試：使用裝有濃度為0.5%、1%、5%、10%、30%以及50%蔗糖溶液的注射器分別依次靠近蜜蜂觸角3s，測(cè)試記錄每只蜜蜂是否會(huì)主動(dòng)發(fā)出伸喙反射，每個(gè)測(cè)試濃度間隔2 分鐘，在測(cè)試過(guò)程中蜜蜂沒(méi)有真正食用糖水。待測(cè)試完畢后，給予蜜蜂1μl 50%的糖水。

2.5 蜜蜂嗅覺(jué)學(xué)習(xí)、記憶行為測(cè)試

在蜜蜂對(duì)不同濃度蔗糖溶液敏感性行為測(cè)試之后，接下來(lái)對(duì)蜜蜂進(jìn)行學(xué)習(xí)和記憶行為的檢測(cè)，由于蜜蜂對(duì)蔗糖溶液具有正常敏感反應(yīng)是測(cè)試學(xué)習(xí)記憶能力的基礎(chǔ)，那些僅對(duì)50%蔗糖溶液敏感或者對(duì)任何濃度蔗糖溶液都沒(méi)有伸喙反射行為的蜜蜂在學(xué)習(xí)記憶行為測(cè)試中被剔除了，每個(gè)處理組去除2 只蜜蜂。氣味測(cè)試裝置由只含有氧氣的主氣流（氣流速度50ml/s）和含有己醛氣味的刺激氣流（5mg/L）混合組成。將浸潤(rùn)過(guò)10μl 己醛（Sigma-Aldrich，CAS# 66-25-1）溶液的試紙條置于刺激氣流的氣道中，使刺激氣流含有己醛氣味。將氣味測(cè)試的管道口靠近蜜蜂觸角，測(cè)試開(kāi)始之前，只打開(kāi)主氣流30s，讓蜜蜂適應(yīng)一下氣流，然后再進(jìn)行學(xué)習(xí)和記憶行為測(cè)試。測(cè)試分為2 個(gè)階段，（1）條件刺激階段（CS）：保持主氣流通道開(kāi)放，同時(shí)打開(kāi)刺激氣流通道6s，同時(shí)在第3s 時(shí)給予蜜蜂蔗糖溶液作為獎(jiǎng)勵(lì)。（2）無(wú)條件刺激階段（US）：保持主氣流和氣味刺激氣流開(kāi)放6s，無(wú)蔗糖溶液作為獎(jiǎng)勵(lì)，觀察蜜蜂是否主動(dòng)發(fā)生伸喙反射。

學(xué)習(xí)能力測(cè)試：蜜蜂每完成1 次條件刺激后進(jìn)行無(wú)條件刺激測(cè)試，檢驗(yàn)其是否主動(dòng)發(fā)生伸喙反射，記錄每只蜜蜂首次發(fā)生伸喙反射時(shí)使用條件刺激的次數(shù)；記憶能力測(cè)試：蜜蜂重復(fù)5 次學(xué)習(xí)能力測(cè)試后，以1 小時(shí)、3 小時(shí)和6 小時(shí)的間隔再次對(duì)蜜蜂進(jìn)行無(wú)條件刺激測(cè)試，檢驗(yàn)其是否主動(dòng)發(fā)生伸喙反射并記錄。每次記憶能力檢測(cè)結(jié)束后將固定好的蜜蜂放回培養(yǎng)箱內(nèi)，并且保持每1 小時(shí)喂食蜜蜂一小部分的蔗糖溶液以用來(lái)維持蜜蜂正常生理反應(yīng)。

2.6 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS Statistics 17 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，使用GraphPad 進(jìn)行作圖。蜜蜂幼蟲(chóng)生存分析采用Log-rank檢驗(yàn)；幼蟲(chóng)化蛹率、羽化率采用非參數(shù)檢驗(yàn)；蜜蜂幼蟲(chóng)體重?cái)?shù)據(jù)符合正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)，采用單因素方差分析；蜜蜂蔗糖溶液敏感性以及學(xué)習(xí)記憶能力數(shù)據(jù)分析采用單因素方差分析檢驗(yàn)。*P ＜0.05，**P＜0.01，***P ＜0.001。

3 結(jié)果與分析

3.1 亞致死濃度噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂幼蟲(chóng)存活率的影響

在蜜蜂幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室的D1 到蜜蜂出房的D18 期間每天對(duì)蜜蜂存活情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，每個(gè)噻蟲(chóng)啉濃度處理組有3 個(gè)生物學(xué)重復(fù)。與對(duì)照組相比（圖1），噻蟲(chóng)啉暴露降低了蜜蜂幼蟲(chóng)的存活率，高濃度1mg/L 組蜜蜂幼蟲(chóng)存活率與對(duì)照組相比顯著降低，0.5mg/L 濃度組存活率與對(duì)照組相比雖然降低但是差異不顯著。

圖1 亞致死濃度噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂幼蟲(chóng)生存的影響

3.2 亞致死濃度噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂幼蟲(chóng)發(fā)育的影響

蜜蜂幼蟲(chóng)在發(fā)育期間，由于亞致死濃度噻蟲(chóng)啉的暴露導(dǎo)致幼蟲(chóng)發(fā)育遲緩。在整個(gè)飼養(yǎng)過(guò)程的第8 天蜜蜂幼蟲(chóng)進(jìn)入蛹期，如圖2-A 所示，1mg/L 濃度組（高濃度組）蜜蜂的化蛹率顯著低于對(duì)照組；如圖2-B 所示，在第19 天高濃度組蜜蜂的羽化率同樣低于對(duì)照組蜜蜂的羽化率；在蜜蜂培養(yǎng)的第19 天的上午8 點(diǎn)和下午3 點(diǎn)分別兩次對(duì)出房蜂進(jìn)行收集，如圖2-C 所示，對(duì)照組蜜蜂的出房時(shí)間主要集中在上午8 點(diǎn)，而實(shí)驗(yàn)組蜜蜂出房時(shí)間延后，特別是1mg/L 噻蟲(chóng)啉濃度處理組蜜蜂出房時(shí)間集中在下午3 時(shí)（圖2-D）。

圖2 亞致死濃度噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂幼蟲(chóng)發(fā)育的影響

3.3 亞致死濃度噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂幼蟲(chóng)體重的影響

蜜蜂幼蟲(chóng)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)培養(yǎng)到第7 天時(shí)，轉(zhuǎn)換培養(yǎng)板，同時(shí)進(jìn)行體重測(cè)量，如圖3所示，與對(duì)照組相比，0.5、1mg/l 濃度處理組蜜蜂幼蟲(chóng)體重與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性變化，結(jié)果表明亞致死濃度噻蟲(chóng)啉暴露對(duì)于蜜蜂幼蟲(chóng)前6 天飼養(yǎng)階段的體重?zé)o顯著性影響。

圖3 亞致死濃度噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂幼蟲(chóng)體重的影響

3.4 亞致死濃度噻蟲(chóng)啉對(duì)出房蜂蔗糖溶液敏感性的影響

如圖4-A 所示，低濃度（0.5%、1%）和較低濃度（5%、10%）蔗糖溶液測(cè)試結(jié)果均顯示噻蟲(chóng)啉處理組蜜蜂對(duì)糖產(chǎn)生喙伸反射的比率與對(duì)照組相比顯著降低，高濃度（30%、50%）蔗糖測(cè)試結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組對(duì)蔗糖產(chǎn)生喙伸反射的比例均不再有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果說(shuō)明在蜜蜂幼蟲(chóng)階段接觸亞致死濃度噻蟲(chóng)啉會(huì)降低出房蜜蜂對(duì)蔗糖溶液的敏感性，這種影響集中表現(xiàn)在低濃度（0.5%、1%）和較低濃度（5%、10%）蔗糖溶液中，隨著蔗糖溶液濃度的增加，差異不再明顯。圖4-B 從噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂蔗糖溶液敏感性的劑量效應(yīng)曲線(xiàn)可以看出，隨著噻蟲(chóng)啉暴露濃度的增加，蜜蜂能夠感受到的最低蔗糖溶液濃度不斷上升。

圖4 亞致死濃度噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂蔗糖敏感性的影響

3.5 亞致死濃度噻蟲(chóng)啉對(duì)出房蜂學(xué)習(xí)、記憶行為的影響

圖5-A 為噻蟲(chóng)啉對(duì)第1 天出房的蜜蜂學(xué)習(xí)行為的影響曲線(xiàn)，結(jié)果顯示在5 次嗅覺(jué)學(xué)習(xí)過(guò)程中，前2次學(xué)習(xí)測(cè)試結(jié)果均顯示噻蟲(chóng)啉暴露會(huì)降低蜜蜂學(xué)習(xí)行為，之后3 次的學(xué)習(xí)測(cè)試結(jié)果雖然顯示對(duì)照組蜜蜂產(chǎn)生條件喙伸反射的比例仍然高于實(shí)驗(yàn)處理組，但是已不再具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果表明在幼蟲(chóng)期間進(jìn)行亞致死濃度噻蟲(chóng)啉暴露可以降低出房后蜜蜂的學(xué)習(xí)能力，這種影響主要體現(xiàn)在前期的學(xué)習(xí)過(guò)程中，隨著訓(xùn)練的次數(shù)增加，影響逐漸消失。圖5-B 是噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂學(xué)習(xí)能力的劑量效應(yīng)曲線(xiàn)，隨著噻蟲(chóng)啉暴露濃度的增加，蜜蜂能夠?qū)W會(huì)條件性伸喙反射所用的學(xué)習(xí)次數(shù)在不斷上升。在學(xué)習(xí)訓(xùn)練后的1 小時(shí)、3 小時(shí)和6 小時(shí)的3次記憶測(cè)試過(guò)程中（圖5-C），1 小時(shí)測(cè)試結(jié)果顯示噻蟲(chóng)啉降低了實(shí)驗(yàn)處理組蜜蜂產(chǎn)生伸喙反射的記憶，而3 小時(shí)和6 小時(shí)的記憶測(cè)試結(jié)果，噻蟲(chóng)啉處理組和對(duì)照組就沒(méi)有差異了。結(jié)果說(shuō)明在幼蟲(chóng)期間進(jìn)行噻蟲(chóng)啉暴露可以降低出房后蜜蜂的短期記憶能力，而對(duì)蜜蜂的長(zhǎng)期記憶影響不顯著。圖5-D 噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂記憶能力的劑量效應(yīng)曲線(xiàn)顯示，隨著噻蟲(chóng)啉暴露濃度的增加，蜜蜂保存氣味聯(lián)想記憶的時(shí)間越來(lái)越短。

圖5 亞致死濃度噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂學(xué)習(xí)記憶的影響

4 討論

蜜蜂外出采集花蜜花粉會(huì)不可避免地接觸到新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑，分析來(lái)自世界各地的198 份蜂蜜樣品發(fā)現(xiàn)其中75%的樣品至少含有對(duì)乙酰氨基吡啶、可比丁、吡蟲(chóng)啉、噻蟲(chóng)啉和噻蟲(chóng)嗪中的一種[27]，新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑的系統(tǒng)特性，使得在植物花粉花蜜中都會(huì)有農(nóng)藥殘留，此外在蜂箱以及蜂蠟等蜂類(lèi)產(chǎn)品也檢測(cè)到了新煙堿類(lèi)農(nóng)藥的殘留[28]。本研究模擬了野外蜂群受新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑污染的一種途徑，即外出工蜂采集受污染的花粉花蜜，通過(guò)分泌哺育幼蟲(chóng)的食物從而將新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑傳遞給正在發(fā)育的幼蟲(chóng)。目前大多數(shù)研究大多針對(duì)新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑對(duì)成年工蜂的影響作用，本實(shí)驗(yàn)評(píng)估了新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂幼蟲(chóng)發(fā)育以及出房后成年蜜蜂學(xué)習(xí)記憶行為的影響。

我們的研究結(jié)果顯示1.0mg/L 的噻蟲(chóng)啉會(huì)顯著降低蜜蜂幼蟲(chóng)的化蛹率、羽化率，延遲由幼蟲(chóng)到成蟲(chóng)的發(fā)育時(shí)間[29]；增大了蜜蜂幼蟲(chóng)的死亡率，從而影響了蜂群的數(shù)量。這可能是噻蟲(chóng)啉影響了蜜蜂幼蟲(chóng)一系列生理生化活動(dòng)，比如降低幼蟲(chóng)免疫、排毒過(guò)程相關(guān)基因的表達(dá)[30]，進(jìn)而影響幼蟲(chóng)的健康，導(dǎo)致死亡。但是相對(duì)較低濃度的噻蟲(chóng)啉對(duì)蜜蜂幼蟲(chóng)發(fā)育的影響不明顯，前人已有的研究結(jié)果顯示蜜蜂幼蟲(chóng)對(duì)新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑的耐受性要比成年蜜蜂強(qiáng)，這可能是由于新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑主要作用于蜜蜂大腦中乙酰膽堿受體，而該受體的表達(dá)在蜜蜂幼蟲(chóng)階段相對(duì)較少，并且其主要的分布區(qū)域磨菇體（MBs）在幼蟲(chóng)階段還沒(méi)有發(fā)育完全[31]。

亞致死濃度的噻蟲(chóng)啉不僅影響蜜蜂幼蟲(chóng)的發(fā)育，同時(shí)降低了蜜蜂出房后成年蜜蜂的學(xué)習(xí)效率和短時(shí)程記憶。嗅葉是蜜蜂的嗅覺(jué)中樞，可以感受到蔗糖溶液的氣味，進(jìn)而將氣味分子傳遞到用于感官整合的更高級(jí)中樞蘑菇體上[32]。新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑在蜜蜂大腦中可以競(jìng)爭(zhēng)性地與突觸后膜上的乙酰膽堿受體結(jié)合，阻斷神經(jīng)信號(hào)的傳導(dǎo)，由嗅葉接收到的蔗糖溶液的氣味信息傳送不到蘑菇體中，造成蜜蜂對(duì)蔗糖溶液敏感性下降[33]。蜜蜂學(xué)習(xí)記憶能力的形成主要與蘑菇體有關(guān)，當(dāng)蘑菇體損傷后，蜜蜂自然有學(xué)習(xí)遲鈍、記憶保存時(shí)間短等表現(xiàn)。Peng 等[34]發(fā)現(xiàn)亞致死劑量的吡蟲(chóng)啉使蜜蜂蘑菇體中的突觸密度降低，Wu 等[8]發(fā)現(xiàn)亞致死劑量吡蟲(chóng)啉會(huì)增加蜜蜂大腦蘑菇體神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。

總之，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，雖然亞致死濃度的噻蟲(chóng)啉沒(méi)有完全殺死蜜蜂幼蟲(chóng)，但出房后的蜜蜂學(xué)習(xí)和記憶能力都受到了不同程度的損傷，很可能影響成年蜜蜂的外出采集行為，比如采集花蜜花粉量減少，甚至無(wú)法正常回巢，從而影響整個(gè)蜂群。雖然噻蟲(chóng)啉相對(duì)低毒，但濃度較低的亞致死濃度就會(huì)對(duì)蜜蜂幼蟲(chóng)產(chǎn)生影響。我們的工作可以為安全使用噻蟲(chóng)啉提供一定的理論指導(dǎo)。