汗克孜.吐爾遜 趙廷勇 熱孜萬古麗·阿木提 姜湘英 帕爾哈提.吐爾遜 沙代提古麗·買合蘇提

摘要：目的：建立復(fù)方羅布麻合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用TLC法鑒別金絲桃苷;采用HPLC法檢測金絲桃苷含量。色譜柱：WondaSil C18（150 mm×4.6 mm 5 μm）;流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（17：83）;柱溫：30℃;流速：1.0 ml＼min;檢測波長：360 nm;結(jié)果：薄層色譜法對金絲桃苷的鑒別效果好，重現(xiàn)性好，陰性對照無干擾。高效液相色譜法測定金絲桃苷的含量，其線性范圍8.4825～127.2375 μg＼ml（r=0.99998），回收率為103.2%（RSD=1.9%）。結(jié)論：薄層色譜法操作簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可以用于復(fù)方羅布麻合劑的質(zhì)量控制。

維吾爾醫(yī)藥學(xué)是中華醫(yī)藥學(xué)寶庫的璀璨明珠，她自成體系，獨(dú)樹一幟，具有顯著的地域特色和民族特征，是經(jīng)長期實(shí)踐證明能戰(zhàn)勝疾病、維護(hù)健康的有效利器。維吾爾藥復(fù)方羅布麻合劑為庫爾勒市中醫(yī)醫(yī)院（庫爾勒市第三人民醫(yī)院）（原庫爾勒市維吾爾醫(yī)醫(yī)院）驗(yàn)方，由羅布麻葉、羅布麻花、菟絲草、對葉大戟果、甘松、牛舌草等6味藥材組成，具有利尿消腫，改善血液循環(huán)作用，臨床上主要用于高血壓、動(dòng)脈硬化。以現(xiàn)配現(xiàn)用形式少量供應(yīng)臨床，多年臨床使用過程中以其明顯的療效得到廣大患者好評。復(fù)方羅布麻合劑無質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，因此生產(chǎn)過程中很難保證其技術(shù)指標(biāo)的穩(wěn)定性。本研究通過對復(fù)方羅布麻合劑中的主要成分金絲桃苷進(jìn)行研究，采用TLC法鑒別金絲桃苷，采用HPLC法測定金絲桃苷的含量，可以用于復(fù)方羅布麻合劑的質(zhì)量控制，并通過實(shí)驗(yàn)確定穩(wěn)定性、質(zhì)量，為取得制劑批準(zhǔn)文號做前期研究工作提供科學(xué)依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（LC-20AT，日本島津），包含自動(dòng)進(jìn)樣器和LC Solution色譜數(shù)據(jù)工作站，紫外檢測器;數(shù)控超聲波清洗器（KQ-500 DE）;電子分析天平（XS205 DU）;半自動(dòng)薄層點(diǎn)樣儀（LinoMAT5）;薄層照相系統(tǒng)（CAMAG TLC Visualizer）。

1.2 材料

復(fù)方羅布麻合劑3批（批號：20180910，20180912，20180914），庫爾勒市中醫(yī)醫(yī)院（庫爾勒市第三人民醫(yī)院）（原庫爾勒市維吾爾醫(yī)醫(yī)院）;對照品：金絲桃苷（批號：111521-201708，供含量測定用，含量為95.1%），購于中國食品藥品檢定研究院;硅膠G薄層板（天津思利達(dá)科技有限公司，批號170612），乙腈（色譜純，F(xiàn)isher公司，美國），水為超純水（自制），其他試劑均為分析純。

2鑒別

復(fù)方羅布麻合劑中金絲桃苷薄層色譜鑒別。按《中國藥典》2015年版四部通則（0502）下方法，取本品20 ml，置分液漏斗中，用乙酸乙酯提取3次，每次30 ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)? ml甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取金絲桃苷對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液和對照品溶液各10 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

3含量測定

復(fù)方羅布麻合劑中金絲桃苷含量照高效液相色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則（0512）進(jìn)行測定。

3.1 色譜條件的確定與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（17：83），檢測波長為360 nm。按金絲桃苷峰計(jì)算理論板數(shù)應(yīng)不低于3000，取對照品溶液、供試品溶液各20 ?l，分別注入液相色譜儀，金絲桃苷的理論塔板數(shù)均大于3000，分離度大于1.5，符合要求。

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取金絲桃苷對照品適量，精密穩(wěn)定，加甲醇制成每1 ml含100 μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備

取本品10 ml，加水10 ml混勻，用乙酸乙酯提取5次（40 ml、30 ml、30 ml、30 ml、30 ml），合并提取液，85℃水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至20 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 陰性對照溶液的制備

陰性對照不含羅布麻葉、羅布麻花、菟絲草，其他成分均按復(fù)方羅布麻合劑的處方比例及制備方法配制，陰性對照溶液制備方法同供試品溶液。

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密吸取上述金絲桃苷（濃度為169.65 μg/ml）對照品儲備液，精密量取對照品儲備液1，2，5，10，15 ml分別置于20 ml的量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混合均勻，即得8.4825，16.9650，42.4125，84.8250，127.2375 μg/ml等系列質(zhì)量濃度的對照品溶液。按照色譜條件，對系列質(zhì)量濃度的對照品溶液取20 μl體積進(jìn)樣，記錄金絲桃苷色譜峰的面積。以金絲桃苷對照品系列質(zhì)量濃度x（μg/ml）對金絲桃苷峰面積值y進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程y=ax+b（a=41538.2，b=-7866.16，r=0.99998），結(jié)果表明金絲桃苷質(zhì)量濃度在8.4825～127.2375 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

3.6 儀器精密度試驗(yàn)

金絲桃苷對照品溶液（濃度為20 μg/ml）分別進(jìn)樣5次，每次20 μl，金絲桃苷峰面積值分別為875918、873750、870893、871695、871636，平均為872778，RSD%為0.2%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

3.7 陰性對照試驗(yàn)

分別取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照溶液20 μl進(jìn)樣，記錄各樣品色譜圖，結(jié)果如圖所示，在對照品色譜峰保留時(shí)間處陰性對照的色譜圖中無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性樣品無干擾。

3.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批復(fù)方羅布麻合劑樣品6份，按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，按上述方法測定金絲桃苷的含量，結(jié)果得出供試品中金絲桃苷的含量分別為38.68 μg/ml，39.50 μg/ml，40.09 μg/ml，40.24 μg/ml，39.99 μg/ml，39.93 μg/ml，平均含量為39.74 μg/ml，計(jì)算RSD值為1.4%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好，HPLC色譜圖。見圖1。

3.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知含量的同批復(fù)方羅布麻合劑樣品（樣品金絲桃苷含量39.7 μg/ml）6份各5.0 ml，分別精密加入一定質(zhì)量濃度（13.69 μg/ml）的對照品溶液3 ml，按供試品項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液，按色譜條件分別進(jìn)樣20 μl測定，計(jì)算回收率，平均回收率為103.1%，RSD為1.9%。見表1。

3.10 供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)

取1號樣品，按含量測定項(xiàng)下的方法制成供試品溶液，分別取20 μl于配制后0，2，4，8，16，24 h測定金絲桃苷峰面積積分值，分別為817219，820226，830432，827049，833384，835693，平均值為827334，計(jì)算RSD值為0.9%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.11 空白干擾試驗(yàn)

在各自色譜條件下，分別以流動(dòng)相與甲醇作為空白供試品溶液。從液相色譜圖可看出，空白供試品溶液與對照品溶液在相同時(shí)間無相同的保留峰，對金絲桃苷的含量測定無干擾。

3.12 樣品的測定

分別取3個(gè)不同批次的復(fù)方羅布麻合劑樣品，按上述方法將每批樣品制得編號為1，2和3的樣品溶液，經(jīng)高效液相法測定，計(jì)算得出金絲桃苷的峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算樣品中金絲桃苷的含量，結(jié)果3批樣品溶液中金絲桃苷的平均質(zhì)量濃度分別為38.68，39.50，40.09 μg/ml。

4討論

4.1 流動(dòng)相的確定

除了采用含量測定項(xiàng)下的流動(dòng)相，還使用了乙腈-0.2%磷酸溶液（15：85）為流動(dòng)相;檢測波長為256 nm。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，含量測定項(xiàng)下的流動(dòng)相是測定復(fù)方羅布麻合劑中金絲桃苷含量的較為理想的流動(dòng)相。

4.2 色譜柱的選擇

利用WondaSil C18中藥分析專用柱，柱長150 mm與250 mm及島津Shim-Pack VP-ODS色譜柱分別比對檢測，結(jié)果表明，三種色譜柱的分離效果都很好。柱長150 mm的WondaSil C18中藥分析專用柱分離效果好，分離相對較短。

參考文獻(xiàn)

[1]國家藥典委員會.中國藥典2015年版[M].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2]新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.新疆維吾爾自治區(qū)中藥維吾爾藥飲片炮制規(guī)范2010年版[S].一部.新疆：新疆人民衛(wèi)生出版社，2010.