許宏彩，高 翀，龐懷林

(1.上海泰禾化工有限公司，上海 210612；2.南通泰禾化工股份有限公司，南通 226407)

草甘膦是一種有機磷類滅生性輸導型的莖葉處理劑，具有廣譜、低毒、安全、無土壤殘留等特點[1-2]。它是迄今為止最重要、應用最廣泛的除草劑品種之一，也是全球銷售量最大的農(nóng)藥品種[3]。該藥劑應用廣泛，主要用于非耕地、果園、茶園等除草。2甲4氯屬于苯氧羧酸類選擇性輸導型除草劑，主要用于水稻、小麥田防除闊葉雜草和莎草科雜草。近年來，在解決草甘膦應用中存在的問題時，草甘膦與2甲4氯的混配制劑成為了熱點品種之一。研究表明，草甘膦與2甲4氯混用對雜草不但具有增效作用，而且還可以提高藥劑的速效性和持效性[4-7]。而在眾多草甘膦鹽中，異丙胺鹽的效果最好[8]。

隨著新《農(nóng)藥管理條例》實施程度的加深，農(nóng)藥產(chǎn)品的管控變得更加嚴格，對農(nóng)藥產(chǎn)品的全面檢測分析顯得尤為重要。本文參照草甘膦水劑和2甲4氯鈉水劑含量測定的國家標準[9-10]，采用液相色譜法測定2甲4氯的含量，分光光度法測定草甘膦的含量，以及離子色譜法測定異丙胺離子的含量。首次對復配制劑40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑有效成分的定量分析方法進行了研究。該方法簡便、準確、靈敏度高，適用于產(chǎn)品的質(zhì)量檢測分析。

1 試驗部分

1.1 2甲4氯

1.1.1 儀器與試劑

具有可變波長紫外檢測器，自動進樣器和色譜工作站的島津2010型高效液相色譜儀(島津公司)。

水為超純水；乙腈為色譜純；磷酸為分析純，磷酸水溶液，調(diào)節(jié)pH為2.5。所有試劑均采購于國藥集團化學試劑有限公司。2甲4氯標樣：純度≥98.6%(沈陽化工研究院有限公司)；40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑(蘇州佳輝化工有限公司)。

1.1.2 色譜條件

色譜柱：采用Eclipse XDB-C18[150 mm×4.6 mm(i.d.)不銹鋼柱]；檢測波長：229 nm；流動相：乙腈∶磷酸水=50∶50(體積比)；流速：1.0 mL/min；柱溫：(35±2) ℃；進樣體積：5 μL。在上述色譜條件下，2甲4氯的保留時間約為4.8 min。

1.1.3 溶液配制

1.1.3 .1 標樣溶液的配制

稱取0.05 g (精確至0.000 1 g) 2甲4氯標樣于100 mL容量瓶中，用流動相溶解，超聲波振蕩5 min使標樣完全溶解，冷卻至室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

1.1.3 .2 試樣溶液的制備

稱取約1.0 g (精確至0.000 1 g) 2甲4氯試樣于100 mL容量瓶中，用流動相溶解，超聲波振蕩5 min使其完全溶解，冷卻至室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻。

1.1.4 測定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直至相鄰2針2甲4氯峰面積相對變化小于1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.1.5 計算

試樣中2甲4氯的質(zhì)量分數(shù)X1按式(1)計算：

式中：X1為2甲4氯的質(zhì)量分數(shù)，以%表示；為試樣溶液中2甲4氯峰面積的平均值；m1為2甲4氯標樣的質(zhì)量，單位為克(g)；P為2甲4氯標樣的質(zhì)量分數(shù)，以%表示；為試樣前后2針標樣溶液中2甲4氯峰面積的平均值；m2為試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。

1.2 草甘膦

1.2.1 儀器與試劑

島津UV-1800分光光度計(島津公司)。石英比色皿，1 cm。

硫酸(分析純)；硫酸溶液：Ψ(H2SO4∶水)=50∶50。溴化鉀(分析純)；溴化鉀溶液：ρ(KBr)=250 g/L。亞硝酸鈉(分析純)；亞硝酸鈉溶液：ρ(NaNO2)=14 g/L，使用時配置。所有試劑均采購于國藥集團化學試劑有限公司。草甘膦標準品：純度≥98.0% (沈陽化工研究院有限公司)。

1.2.2 紫外分光光度法分析條件

試樣在酸性介質(zhì)中與亞硝酸鈉作用生成草甘膦亞硝基衍生物，在242 nm處有最大吸收峰，通過測定吸光度可定量。

1.2.3 溶液配制

1.2.3 .1 空白溶液的配制

用移液管移取7 mL水于100 mL容量瓶中，依次加入0.5 mL硫酸溶液、0.1 mL溴化鉀溶液、0.5 mL亞硝酸鈉溶液后，將塞子塞緊，充分搖勻。放置20 min后，用水稀釋至刻度，搖勻。打開塞子，放置15 min。

1.2.3 .2 標準溶液的配制

稱取0.1 g (精確至0.000 1 g)草甘膦標樣置于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，超聲波振蕩10 min使標樣溶解，冷卻至刻度，搖勻。用移液管精確吸取2 mL標準溶液于100 mL棕色容量瓶中，依次加入5 mL水、0.5 mL硫酸溶液、0.1 mL溴化鉀溶液、0.5 mL亞硝酸鈉溶液后，立即將塞子塞緊，充分搖勻。放置20 min后，用水稀釋至刻度，搖勻。打開塞子，放置15 min。

1.2.3 .3 試樣溶液的配制

稱取0.4 g (精確至0.000 1 g)試樣置于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。用移液管精確吸取2 mL上述溶液于100 mL棕色容量瓶中，依次加入5.0 mL水、0.5 mL硫酸溶液、0.1 mL溴化鉀溶液、0.5 mL亞硝酸鈉溶液后，立即將塞子塞緊，充分搖勻。放置20 min后，用水稀釋至刻度，搖勻。打開塞子，放置15 min (注：反應溫度不低于15 ℃)。

1.2.4 測定

以空白溶液為參比，在242 nm波長下，用1 cm石英比色皿，分別測定標樣溶液及試樣溶液的吸光度。

1.2.5 計算

試樣中草甘膦的質(zhì)量分數(shù)X2按式(2)計算：

式中：X2為草甘膦的質(zhì)量分數(shù)，以%表示；A2為試樣溶液的吸光度；m1為草甘膦標樣的質(zhì)量，單位為克(g)；P為標樣中草甘膦的質(zhì)量分數(shù)，以%表示；A1為標樣溶液的吸光度；m2為試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。

1.3 異丙胺離子

1.3.1 儀器與試劑

具有電導檢測器、DIONEX ICS-2000離子色譜儀，以及賽默飛離子色譜工作站。水為超純水；甲基磺酸(國藥集團化學試劑有限公司)為分析純；異丙胺標樣(沈陽化工研究院有限公司)純度≥98.0%。

1.3.2 色譜條件

色譜柱：250 mm×4 mm (i.d.) Dionex IonPac CS12A陽離子分析柱；淋洗液：甲基磺酸水溶液，c (甲基磺酸)=12 mmol/L；流速：1.0 mL/min；柱溫：(30 ± 2) ℃；電導池溫度：(35 ± 2) ℃；進樣體積：25 μL。上述操作條件下，異丙胺離子保留時間約為7.3 min。

1.3.3 溶液配制

1.3.3 .1 標樣溶液的配制

稱取約0.06 g (精確至0.000 1 g)的異丙胺標樣，置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液1 mL于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，以此為標樣溶液。

1.3.3 .2 試樣溶液的配制

稱取0.6 g (精確至0.000 1 g)的試樣，置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液1 mL于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。

1.3.4 測定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入2針標樣溶液，直至相鄰2針異丙胺離子峰面積相對變化小于1.5 %，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.3.5 計算

試樣中異丙胺離子質(zhì)量分數(shù)X3按公式(3)計算：

式中：X3為異丙胺離子的質(zhì)量分數(shù)，以%表示；為試樣溶液中異丙胺離子峰面積的平均值；m1—異丙胺標樣的質(zhì)量，單位為克(g)；p為標樣中異丙胺的質(zhì)量分數(shù)，以%表示；為試樣前后2針標樣溶液中異丙胺離子峰面積的平均值；m2為試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；M1為異丙胺離子的相對分子質(zhì)量的數(shù)值，單位為克每摩爾(g/mol)，M1=60.11 g/mol；M2為異丙胺的相對分子質(zhì)量的數(shù)值，單位為克每摩爾(g/mol)，M1=59.11 g/mol。

2 結(jié)果與討論

2.1 2甲4氯

2.1.1 色譜條件的選擇

本方法流動相比例和檢測波長的選擇，參照了2甲4氯鈉水劑[10]的檢測方法，根據(jù)儀器和樣品性質(zhì)對溫度略作調(diào)整。

2.1.2 特異性的測定

試驗采用HPLC-DAD峰純度分析法來鑒別2甲4氯。2甲4氯標樣、2甲4氯原藥、40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中的2甲4氯HPLC-DAD峰純度中均未檢測到不純物，即有效成分處無其他物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。峰純度色譜圖見圖1～圖3。

圖1 標樣中2甲4氯的峰純度圖

圖3 40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中2甲4氯峰純度圖

2.1.3 線性相關性測定

按1.1.3.1節(jié)標樣溶液的配制方法，準確制備6個質(zhì)量濃度遞增的2甲4氯線性相關溶液。按標準規(guī)定的操作步驟進行分析，測定線性溶液中2甲4氯的峰面積，取2次測定的平均結(jié)果。以2甲4氯質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，從而得到2甲4氯的線性相關曲線(圖4)。

圖4 2甲4氯線性關系圖

2甲4氯線性回歸方程為y=9 941.351 5x+251 186.280 7，相關系數(shù)R2=0.999 8。

2.1.4 分析方法的精密度測定

按1.1.3.2試樣溶液的制備方法配制6個40.5%2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑的2甲4氯精密度溶液。在前述色譜操作條件下，對樣品平行測定。2甲4氯的標準偏差為0.005 5，變異系數(shù)為0.11%。

表1 40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中2甲4氯精密度試驗結(jié)果

2.1.5 分析方法的準確度測定

制劑空白：按照配方比例要求，將除2甲4氯原藥、草甘膦原藥和異丙胺外將所有助劑混合均勻。以有效成分含量配比，在制劑空白中加入2甲4氯標樣、草甘膦標樣及異丙胺水溶液，震蕩，搖勻。按前述步驟制成6份40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑樣品，以備用作準確度試驗。

對上述6份試樣按照樣品溶液配制方法，在前述操作條件下進行測定，結(jié)果見表2。

表2 40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中2甲4氯回收率試驗結(jié)果

40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中2甲4氯的平均回收率99.86%。

2.1.6 非分析物干擾試驗

2甲4氯原藥、溶劑空白、制劑空白的原始分析譜圖顯示，溶劑和制劑空白中不存在其他物質(zhì)的干擾，見圖2～4。

圖2 2甲4氯原藥峰純度圖

圖5 2甲4氯原藥液相色譜圖

圖6 溶劑空白液相色譜圖

圖7 制劑空白液相色譜圖

2.2 草甘膦

2.2.1 條件的選擇

本方法試驗條件的選擇，參照了草甘膦水劑標準[9]，該標準中提供了高效液相法和分光光度法，2種方法操作較簡便，但是鑒于草甘膦高效液相法易出現(xiàn)拖尾[11]及復配制劑產(chǎn)品易受其他成分影響，經(jīng)試驗表明，在本實驗室方法驗證對比試驗中，分光光度法略優(yōu)于高效液相法，所以本方法中選擇了分光光度法。

2.2.2 特異性的測定

試樣在酸性介質(zhì)中與亞硝酸鈉作用生成草甘膦亞硝基衍生物，在242 nm處有最大吸收峰。

2.2.3 線性相關性測定

按1.2.3.2節(jié)標樣溶液的配制方法，準確制備6個質(zhì)量濃度遞增的草甘膦線性溶液。

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，按照濃度從小到大的順序，測定每個溶液中草甘膦的吸光度，以吸取的草甘膦標準溶液體積為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，結(jié)果見圖8。草甘膦溶液的體積與吸光度之間呈現(xiàn)良好的線性關系，計算得回歸方程為y=0.378 1x+0.139 2，相關系數(shù)R2=1.000 0，完全可以滿足定量分析要求。

圖8 草甘膦標準溶液體積與草甘膦吸光度關系圖

2.2.4 分析方法的精密度測定

按1.2.3節(jié)試樣溶液的制備方法配制6個40.5%2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中的草甘膦的精密度溶液。

在前述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，按順序測定每個試樣溶液的吸光度，結(jié)果見表3。草甘膦的標準偏差為0.001 2，變異系數(shù)為0.49%。

表3 40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中草甘膦精密度試驗結(jié)果

2.2.5 分析方法的準確度測定

對2.1.5節(jié)中制成的樣品，按1.2.3節(jié)試樣溶液的制備方法配制6個40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中的草甘膦的準確度溶液。在前述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后進行測定，結(jié)果見表4。

表4 40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中草甘膦準確度試驗結(jié)果

40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中的草甘膦的平均回收率為99.88%。

2.3 異丙胺離子

2.3.1 色譜條件的選擇

本方法試驗條件的選擇，參照了《GB/T 20684—2017草甘膦水劑》中異丙胺離子的色譜條件，并依據(jù)儀器和樣品性質(zhì)對溫度和進樣量略作調(diào)整。

2.3.2 特異性的測定

標樣與40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑的原始分析譜圖顯示，標樣中的異丙胺離子的保留時間約為7.30 min，樣品中異丙胺離子的保留時間約為7.30 min，兩者一致。

2.3.3 線性相關性測定

按1.3.3.1節(jié)標樣溶液的制備方法，配制5個濃度遞增的異丙胺離子標樣溶液，按標準規(guī)定的操作步驟進行分析。測定異丙胺離子的峰面積，取2次測定的平均結(jié)果。

以異丙胺離子質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，結(jié)果見圖9。計算得回歸方程為y=0.108 7x+0.028 8，相關系數(shù)R2=0.999 8，完全可以滿足定量分析要求。2.3.4分析方法的精密度測定

圖9 異丙胺離子線性關系圖

按1.3.3.2節(jié)試樣溶液的制備方法配制5個40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑異丙胺離子的精密度溶液。在前述操作條件下，對5個精密度溶液進行測定，結(jié)果見表5。異丙胺離子標準偏差為0.000 4，變異系數(shù)為0.29%。

表5 40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中異丙胺離子精密度試驗結(jié)果

2.3.5 分析方法的準確度測定

取制成的5份試樣按照前述測定條件，進行測定，結(jié)果見表6。

表6 40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中異丙胺離子準確度試驗結(jié)果

40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑中異丙胺離子的平均回收率99.85%。

2.3.6 非分析物干擾試驗

溶劑空白、制劑空白與40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑的原始分析譜圖顯示，不存在其他物質(zhì)的干擾。見圖10～12。

圖10 40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑

圖11 制劑空白

圖12 溶劑空白

3 結(jié) 論

本文建立了40.5% 2甲·草甘膦異丙胺鹽可溶液劑有效成分的分析方法。此方法具有高精密度和高準確度的特點，其線性關系良好，操作簡便，是進行該制劑產(chǎn)品有效成分全面檢測較理想的分析方法。