周海燕，哈瑞雯，王繼永，肖蘇萍，詹志來(lái)，王輝，梁寒峭

1.中國(guó)中藥有限公司，北京 102600；2.北京城市學(xué)院，北京 100094；3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 中藥資源中心 道地藥材國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，北京 100700

沒(méi)藥Myrrha為橄欖科植物地丁樹(shù)CommiphoramyrrhaEngl.和哈地丁樹(shù)C.molmolEngl.的干燥樹(shù)脂，分為天然沒(méi)藥和膠質(zhì)沒(méi)藥，味辛、苦，性平，歸心、肝、脾經(jīng)，具有散瘀定痛、消腫生肌之功效[1]?，F(xiàn)代研究表明，沒(méi)藥中的主要化學(xué)成分有萜類(lèi)、甾體類(lèi)、黃酮類(lèi)、木脂素類(lèi)、長(zhǎng)鏈脂肪醇等，其藥理作用有抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗氧化應(yīng)激、調(diào)節(jié)脂肪代謝、促進(jìn)創(chuàng)面愈合等[2-4]。

沒(méi)藥是一種應(yīng)用廣泛、歷史悠久的天然藥物和香料，為國(guó)際上重要的藥用植物品種，相關(guān)產(chǎn)品涉及醫(yī)藥、食品、化妝品、香料等多個(gè)領(lǐng)域。我國(guó)為沒(méi)藥進(jìn)口大國(guó)，貨源主要來(lái)自索馬里、埃塞俄比亞以及阿拉伯半島。受品種、產(chǎn)地、采收加工、貯藏等的差異影響，市場(chǎng)上的沒(méi)藥質(zhì)量參差不齊，時(shí)有摻假、摻雜問(wèn)題?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》(以下簡(jiǎn)稱(chēng)《中國(guó)藥典》)2020年版中制定了沒(méi)藥性狀、鑒別、雜質(zhì)、總灰分、酸不溶性灰分檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，并以揮發(fā)油含量作為沒(méi)藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)[1]。此標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施過(guò)程簡(jiǎn)單易行，但不可用來(lái)鑒別沒(méi)藥的基原，也無(wú)法衡量藥材的品質(zhì)優(yōu)劣。隨著近年來(lái)沒(méi)藥特有的化學(xué)成分被發(fā)現(xiàn)和鑒定，成分與質(zhì)量的相關(guān)性日益受到關(guān)注。鑒于此，本文對(duì)近年來(lái)沒(méi)藥的混偽品研究現(xiàn)狀、質(zhì)量分析方法及國(guó)內(nèi)外質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了歸納總結(jié)，為建立科學(xué)、合理的沒(méi)藥藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)方法提供參考。

1 混偽品研究現(xiàn)狀

沒(méi)藥屬(CommiphoraJacq.)植物約150個(gè)種[5]，地丁樹(shù)和哈地丁樹(shù)為《中國(guó)藥典》2020年版記載的沒(méi)藥正品來(lái)源[1]，其他沒(méi)藥屬植物的樹(shù)脂也常作為商品沒(méi)藥使用[5-6]?！度珖?guó)中草藥匯編》[7]、《新編中藥志》[8]和《中華本草》[9]將沒(méi)藥基原擴(kuò)展為沒(méi)藥屬植物。于新蘭等[10]通過(guò)查閱國(guó)內(nèi)外藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、植物學(xué)專(zhuān)著和相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)天然沒(méi)藥、膠質(zhì)沒(méi)藥和穆庫(kù)沒(méi)藥的原植物進(jìn)行考證，得出天然沒(méi)藥的原植物主要為C.myrrha，膠質(zhì)沒(méi)藥的原植物主要為C.erythraea(Ehrenb.)Engl.，穆庫(kù)沒(méi)藥的原植物為C.mukul(Hook.ex Stocks)Engl.。

沒(méi)藥原植物均系低矮灌木或小喬木，源于野生，周邊常與其他可分泌樹(shù)脂的類(lèi)似植物共生，產(chǎn)地采收時(shí)常不加選擇，導(dǎo)致原裝貨中混有不可供藥用的樹(shù)脂[11]。近年來(lái)，隨著沒(méi)藥飲片價(jià)格上漲，摻偽現(xiàn)象日趨嚴(yán)重，市場(chǎng)上沒(méi)藥時(shí)有以松香、樹(shù)皮、泥沙、其他雜膠等摻假問(wèn)題，嚴(yán)重影響了藥品的安全和質(zhì)量[12]。松香(即松脂的提取物)是沒(méi)藥常見(jiàn)的摻假物質(zhì)，早在明代《本草乘雅半偈》就有“市肆多用松脂、瀝青，偽造入藥，殊為患也”的記載[13]。江先文等[14]應(yīng)用理化和紫外鑒別手段鑒別沒(méi)藥中的松香。張文婷等[12]通過(guò)天然沒(méi)藥與膠質(zhì)沒(méi)藥高效液相色譜(HPLC)特征圖譜色譜峰的匹配來(lái)判斷是否為摻偽沒(méi)藥。李哲等[15]按照《中國(guó)藥典》2015年版一部和2011年國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗(yàn)補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件(沒(méi)藥中松香酸檢測(cè))，連續(xù)2年對(duì)129批次沒(méi)藥的性狀、鑒別、檢查、含量等項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藥品生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)和使用環(huán)節(jié)均存在沒(méi)藥質(zhì)量不合格現(xiàn)象，其中揮發(fā)油和酸不溶性灰分的不合格率最高，分別為38.8%和37.2%，其次是松香酸，不合格率為15.2%。2013—2016年全國(guó)中藥材及飲片的專(zhuān)項(xiàng)抽驗(yàn)工作中抽檢了204批沒(méi)藥，其中99批不合格，不合格率為48.5%，不合格項(xiàng)目為雜質(zhì)、含量、總灰分、性狀、檢出松香酸[16]。

2 質(zhì)量分析方法

《中國(guó)藥典》2020年版一部以揮發(fā)油的定量作為沒(méi)藥藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，規(guī)定天然沒(méi)藥中揮發(fā)油不得少于4.0%，膠質(zhì)沒(méi)藥不得少于2.0%。此標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施簡(jiǎn)單易行，但評(píng)價(jià)指標(biāo)單一，無(wú)法從整體上評(píng)價(jià)沒(méi)藥質(zhì)量。將中藥標(biāo)準(zhǔn)采用圖譜的形式生動(dòng)直觀地展現(xiàn)出來(lái)，讓標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單清晰地表達(dá)出來(lái)，更容易被接受和理解，這是“深入研究，淺出標(biāo)準(zhǔn)”這一理念最好的表現(xiàn)形式[17]。建立指紋圖譜(或特征圖譜)結(jié)合多成分含量測(cè)定是中藥質(zhì)量控制的重要組成部分，可用于沒(méi)藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升。目前，特征圖譜或指紋圖譜已逐漸應(yīng)用到?jīng)]藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣鑒別中。

2.1 薄層色譜法

陳黃保等[18]通過(guò)薄層色譜法對(duì)天然沒(méi)藥和膠質(zhì)沒(méi)藥進(jìn)行研究和比較，發(fā)現(xiàn)兩者色譜完全不同，該方法重現(xiàn)性好，專(zhuān)一性強(qiáng)，可用于兩者的鑒別。

2.2 液相色譜法

張文婷等[12]通過(guò)HPLC分別建立天然沒(méi)藥與膠質(zhì)沒(méi)藥的特征指紋圖譜，標(biāo)定了天然沒(méi)藥7個(gè)特征峰和膠質(zhì)沒(méi)藥2個(gè)特征峰，發(fā)現(xiàn)天然沒(méi)藥和膠質(zhì)沒(méi)藥的成分存在明顯差異，提示可通過(guò)特征圖譜檢查識(shí)別天然沒(méi)藥或膠質(zhì)沒(méi)藥，同時(shí)也能通過(guò)色譜峰的匹配，判斷是否為摻偽沒(méi)藥。李霞等[19]采用HPLC建立沒(méi)藥藥材的特征圖譜，確定了9個(gè)共有峰，對(duì)14批沒(méi)藥藥材及天然沒(méi)藥、膠質(zhì)沒(méi)藥對(duì)照藥材的指紋圖譜進(jìn)行分析，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地不同批次的藥材之間質(zhì)量雖然存在差異，但仍具有較好的相關(guān)性，為沒(méi)藥的基原鑒定和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了參考。宿樹(shù)蘭等[20]采用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器法(HPLC-PDA)建立了非揮發(fā)性成分的特征圖譜，標(biāo)出52個(gè)共有峰；相似度分析結(jié)果表明，不同批次沒(méi)藥藥材相似度較低；主成分分析結(jié)果表明，倍半萜烯類(lèi)成分、二萜酸和有機(jī)酸酯類(lèi)成分對(duì)藥材品質(zhì)起到主導(dǎo)作用。

倍半萜類(lèi)化合物是沒(méi)藥揮發(fā)油的主要成分之一，具有重要的生物功能和生理活性，其相對(duì)含量與沒(méi)藥藥材質(zhì)量密切相關(guān)。已有研究者以沒(méi)藥倍半萜為標(biāo)準(zhǔn)建立檢測(cè)沒(méi)藥品質(zhì)的方法。陳露等[21]采用HPLC同時(shí)測(cè)定沒(méi)藥中相對(duì)-1S，2S-環(huán)氧-4R-呋喃大根香葉-10(15)-烯-6-酮、[1(10)E，2R，4R]-2-甲氧基-8，12-環(huán)氧大根香葉-1(10)，7，11-三烯-6-酮和莪術(shù)酮3個(gè)倍半萜類(lèi)化合物含量。但目前針對(duì)倍半萜類(lèi)化合物的沒(méi)藥質(zhì)量評(píng)價(jià)尚無(wú)科學(xué)明確的標(biāo)準(zhǔn)，僅通過(guò)1個(gè)或幾個(gè)倍半萜成分的檢測(cè)，暫時(shí)也無(wú)法合理地對(duì)沒(méi)藥質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。多成分含量測(cè)定在沒(méi)藥研究中較少，迄今尚無(wú)其他類(lèi)成分如二萜、三萜類(lèi)化合物研究。

2.3 氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)

沒(méi)藥中揮發(fā)油質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%～9.0%[20]，是沒(méi)藥發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤、抑制子宮平滑肌收縮、抑制芳香化酶活性等作用[22-23]。目前多采用纖維素酶提取法[24]、水蒸氣蒸餾提取法[20，24-26]、超臨界CO2萃取法(SFE-CO2)[26]、索氏提取法[26]、超聲提取法[26]等方法提取沒(méi)藥揮發(fā)油，并通過(guò)GC-MS分析和鑒定揮發(fā)油的化學(xué)成分及其相對(duì)含量。研究結(jié)果表明，沒(méi)藥揮發(fā)油成分、相對(duì)含量與其提取方法、來(lái)源、產(chǎn)地等密切相關(guān)，但多為單萜、倍半萜和鏈狀芳香族化合物(烷烴、醇、酯及羧酸)。陳華等[24]利用GC-MS對(duì)纖維素酶提取法(CE)和水蒸氣蒸餾提取法(DSE)提取的沒(méi)藥揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行分析，從中分別鑒定出34個(gè)和38個(gè)化學(xué)成分，各化學(xué)成分在揮發(fā)油中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為70.05%和67.95%，共同組分中含量最多的是乙酸辛酯和辛醇。宿樹(shù)蘭等[20]采用GC-MS分析鑒定了沒(méi)藥揮發(fā)油中28個(gè)化學(xué)成分，以單萜、倍半萜和有機(jī)酸酯類(lèi)成分為主。符繼紅等[25]利用水蒸氣蒸餾法提取沒(méi)藥藥材中揮發(fā)油成分，運(yùn)用GC-MS分析鑒定了42個(gè)成分，占揮發(fā)性物質(zhì)的87.46%，萜烯類(lèi)及其衍生物占較大比例，主要有α-香檸檬烯(12.52%)、β-蛇床烯(8.75%)、β-紅沒(méi)藥烯(10.03%)、2-羥基-2，4，6-環(huán)庚三烯-1-酮(6.25%)等。王勇等[26]發(fā)現(xiàn)SFE-CO2優(yōu)于水蒸氣蒸餾提取法、索氏提取法、超聲提取法，其萃取物得率和β-欖香烯質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，且萃取物中成分種類(lèi)多。

3 國(guó)內(nèi)外藥典中沒(méi)藥及其制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

沒(méi)藥是國(guó)際上廣泛使用的藥用植物品種，被多個(gè)國(guó)家及地區(qū)標(biāo)準(zhǔn)收錄。對(duì)比分析《中國(guó)藥典》[1](下文中均指2020年版)、我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)的《臺(tái)灣中藥典》[27](以下簡(jiǎn)稱(chēng)“臺(tái)灣標(biāo)準(zhǔn)”)、《美國(guó)藥典》[28]及《歐洲藥典》[29]中沒(méi)藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之間的異同點(diǎn)，見(jiàn)表1?；矫?，“臺(tái)灣標(biāo)準(zhǔn)”、《美國(guó)藥典》及《歐洲藥典》的沒(méi)藥來(lái)源均為沒(méi)藥屬植物，《中國(guó)藥典》僅收載橄欖科植物地丁樹(shù)和哈地丁樹(shù)2個(gè)品種。性狀描述時(shí)，各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)沒(méi)藥的性狀分別從形狀、大小、顏色、質(zhì)地、氣味等宏觀方面進(jìn)行描述，盡管《中國(guó)藥典》和“臺(tái)灣標(biāo)準(zhǔn)”將天然沒(méi)藥、膠質(zhì)沒(méi)藥分類(lèi)敘述且內(nèi)容一致，《美國(guó)藥典》和《歐洲藥典》未進(jìn)行區(qū)分，但總的來(lái)說(shuō)各標(biāo)準(zhǔn)間的性狀描述沒(méi)有明顯差異。鑒別方面，《中國(guó)藥典》和《美國(guó)藥典》仍用到了顯色反應(yīng)；《歐洲藥典》對(duì)粉末顯微形態(tài)特征等進(jìn)行了鑒別描述；各標(biāo)準(zhǔn)均采用了薄層鑒別，但在制備方法、展開(kāi)劑、比對(duì)物質(zhì)等方面均有區(qū)別(表2)；在驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)上，《美國(guó)藥典》《歐洲藥典》均采用對(duì)照品作為對(duì)照物質(zhì)，通過(guò)薄層條帶位置及顏色來(lái)鑒別與檢識(shí)待測(cè)物質(zhì)。檢查項(xiàng)下，《中國(guó)藥典》、“臺(tái)灣標(biāo)準(zhǔn)”及《美國(guó)藥典》均進(jìn)行了總灰分、酸不溶性灰分要求，《歐洲藥典》僅進(jìn)行總灰分檢測(cè)，比較而言《美國(guó)藥典》對(duì)總灰分、酸不溶性灰分要求更細(xì)致，《歐洲藥典》要求最高；《美國(guó)藥典》規(guī)定雜質(zhì)不得超過(guò)2%，雖未同《中國(guó)藥典》對(duì)天然沒(méi)藥和膠質(zhì)沒(méi)藥的雜質(zhì)分類(lèi)規(guī)定，但要求相當(dāng)嚴(yán)格；“臺(tái)灣標(biāo)準(zhǔn)”二氧化硫指標(biāo)的要求和《中國(guó)藥典》相同，未規(guī)定雜質(zhì)要求，但增設(shè)了總重金屬含量限度檢查；《歐洲藥典》相對(duì)《中國(guó)藥典》增設(shè)了干燥失重、醇不溶性物質(zhì)的檢查。含量測(cè)定中，《中國(guó)藥典》以揮發(fā)油含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，規(guī)定揮發(fā)油天然沒(méi)藥不得少于4.0%，膠質(zhì)沒(méi)藥不得少于2.0%；“臺(tái)灣標(biāo)準(zhǔn)”則要求稀乙醇抽提物質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥10.0%，水抽提物≥21.0%；《美國(guó)藥典》中使用了揮發(fā)油、醇溶性提取物和水溶性提取物進(jìn)行質(zhì)控，其要求明顯高于《中國(guó)藥典》的含量標(biāo)準(zhǔn)；《歐洲藥典》未進(jìn)行相關(guān)含量測(cè)定。

表1 各標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)藥標(biāo)準(zhǔn)比較

4 討論

沒(méi)藥是我國(guó)進(jìn)口中藥材的重點(diǎn)品種之一[30]，其藥材、飲片及中成藥制品已步入產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程?！吨袊?guó)藥典》收載的沒(méi)藥基原、鑒別、檢查、含量測(cè)定等指標(biāo)與國(guó)外藥典標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)內(nèi)外相關(guān)著作、文獻(xiàn)均存在差異，尚沒(méi)有形成統(tǒng)一的基于特征性化學(xué)成分的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。在中藥標(biāo)準(zhǔn)化及質(zhì)量溯源體系構(gòu)建的總體要求下，首先有必要理清沒(méi)藥品種，確定沒(méi)藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系構(gòu)建的基石；其次，目前對(duì)沒(méi)藥及相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制多限于浸出物和揮發(fā)油測(cè)定的含量標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)法控制藥材整體質(zhì)量，有必要在沒(méi)藥特征性化學(xué)成分逐漸清晰并增多的研究基礎(chǔ)上，開(kāi)展沒(méi)藥真?zhèn)蝺?yōu)劣與相關(guān)成分含量之間的相關(guān)性研究，建立多點(diǎn)控制、專(zhuān)屬性強(qiáng)的相關(guān)成分分析和含量測(cè)定方法；再次，完善安全性指標(biāo)，如重金屬、非法添加物，以確保沒(méi)藥臨床用藥的安全性和有效性；最后，作為我國(guó)常用的傳統(tǒng)進(jìn)口樹(shù)脂類(lèi)中藥，構(gòu)建完善的沒(méi)藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，主導(dǎo)沒(méi)藥國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的制定，從而引領(lǐng)國(guó)際。綜上所述，建立沒(méi)藥指紋圖譜、多成分含量的標(biāo)準(zhǔn)，完善安全性指標(biāo)，建立科學(xué)、合理、簡(jiǎn)便、可行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有極為重要的意義。

表2 各標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)藥薄層鑒別方法