徐 鵬 李 偉 梁興東

柳州市人民醫(yī)院，廣西 柳州 545000

肝癌細(xì)胞(HCC)是我國(guó)常見惡性腫瘤疾病，近些年來(lái)，該病發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，每年約有360,000例新發(fā)病例和350,000例死亡病例[1-2]。有關(guān)研究表明，LncRNA SNHG15于甲狀腺癌組織呈上調(diào)，主要通過(guò)對(duì)細(xì)胞增殖分化促進(jìn)其在癌變組織中發(fā)揮作用[3]。另有研究表明，LncRNA鋅指蛋白反義鏈1(ZFAS1)于結(jié)腸癌血清中高表達(dá)，其通過(guò)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和結(jié)腸癌發(fā)病過(guò)程[4]。本研究現(xiàn)于本院住院治療HCC患者作為本次研究對(duì)象，并與健康人員進(jìn)行對(duì)照研究，同時(shí)予以檢測(cè)HCC患者血清外泌體中LncRNA ZFAS1表達(dá)水平，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 研究對(duì)象由2019年3月至2020年4月于本院住院治療60例HCC患者(實(shí)驗(yàn)組)及另同時(shí)期60例健康體檢患者(對(duì)照組)，對(duì)照組35～71歲，平均(53.69±1.04)歲，男25例，女35例，實(shí)驗(yàn)組34～72歲，平均(54.01±1.74)歲，男29例，女31例，兩組HCC一般資料呈正比，P>0.05。

1.2方法

1.2.1血清外泌體提取與鑒定 對(duì)兩組患者均采取10ml靜脈血，4℃3000r/min離心10min(r=10cm)，用于提取外泌體。外泌體依據(jù)美國(guó)Exo QuickTM試劑，獲取血清外泌體蛋白，進(jìn)而獲取外泌體樣本，將其經(jīng)磷鎢酸染色后于透射電鏡下觀察其顆粒形態(tài)。

1.2.2熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)HCC患者血清外泌體LncRNA ZFAS1表達(dá) 主要采用總RNA提取試劑盒提取血清外泌體LncRNA ZFAS1，以瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)總RNA完整性與純度。依據(jù)Real-time反轉(zhuǎn)試劑盒說(shuō)明，將LncRNA ZFAS1反轉(zhuǎn)錄為cDNA，操作時(shí)依據(jù)qRT-PCR試劑說(shuō)明加配合反應(yīng)體系。待體系加配完成后放置Bio-Rad熒光定量PCR儀器進(jìn)行放音，其程序設(shè)為95℃30s，95℃15s，60℃15s，72℃15s，一共40個(gè)循環(huán)，72℃延伸為9分鐘，待結(jié)束后將數(shù)據(jù)進(jìn)行收集，且對(duì)其Ct值進(jìn)行分析。隨后應(yīng)用2-ΔΔCt算法對(duì)LncRNA ZFAS1表達(dá)量進(jìn)行計(jì)算。

1.3觀察指標(biāo) 血清外泌體中LncRNA ZFAS1在HCC患者中的表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)組患者血清外泌體中LncRNA ZFAS1表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，差異顯赫，P<0.05，見下表1：

表1 相較2組血清外泌體中LncRNA ZFAS1表達(dá)水平

3 討 論

HCC臨床常見惡性腫瘤，具有生長(zhǎng)快速、浸潤(rùn)性強(qiáng)以及早期即發(fā)生轉(zhuǎn)移特點(diǎn)。目前，有關(guān)研究表明，丙型、乙型肝炎病毒感染、飲酒以及遺傳性人體代謝物均可導(dǎo)致其誘發(fā)HCC[5]。AFP為早期診斷HCC血清標(biāo)志物，但因特異性較低，易出現(xiàn)誤診與漏診現(xiàn)象，對(duì)此，臨床需尋找更為有效的新分子標(biāo)志物，將HCC診斷與預(yù)后改善情況提高，具有重要意義。

外泌體由細(xì)胞內(nèi)多泡體與質(zhì)膜融合而成，大小約100～200um雙膜微泡[6]。由腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體其攜帶腫瘤細(xì)胞特異性標(biāo)志物，其與內(nèi)容物和腫瘤微環(huán)境有關(guān)，通過(guò)其對(duì)外泌體物組成部分進(jìn)行分析，能夠直接貨物癌細(xì)胞相關(guān)信息，是腫瘤診斷新方式[7]。由最新研究報(bào)道，LncRNA ZFAS1在肝癌患者血清外泌體中升高，可表示為血清外泌體內(nèi)容物較血清因子更具有臨床價(jià)值意義。對(duì)此，本研究現(xiàn)探討血清外泌體中LncRNA ZFAS1水平在肝癌細(xì)胞中的意義。LncRNA為一類非編碼RNA，普遍存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)和細(xì)胞核中。隨著功能基因?qū)W的發(fā)展，研究發(fā)現(xiàn)多種LncRNA主要通過(guò)對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，將使翻譯、基因轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)修飾具有影響，并能夠參與正常生理過(guò)程與疾病發(fā)展。以往研究表明，LncRNA SNHG15于甲狀腺癌細(xì)胞中高表達(dá)能夠阻滯癌細(xì)胞增長(zhǎng)，表明LncRNA SNHG15在甲狀腺癌中占據(jù)重要作用。由本研究結(jié)果可知實(shí)驗(yàn)組患者LncRNA ZFAS1水平明顯高于對(duì)照組，且與吳鋒[8]等學(xué)者研究結(jié)果相一致，進(jìn)一步提示LncRNA ZFAS1參與HCC發(fā)病過(guò)程。

綜上所述，血清外泌體LncRNA ZFAS1在HCC患者中表達(dá)上調(diào)，與其發(fā)展進(jìn)程與預(yù)后有關(guān)，且為尋找新的診斷標(biāo)志物提供依據(jù)。