李俊年，康紹華，楊冬梅，何纖，李雙，陶雙倫

（1.吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南 吉首416000；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南 鄭州450046）

西南山區(qū)是我國(guó)集中連片的貧困地區(qū)，貴州、廣西、云南等地均以發(fā)展山羊養(yǎng)殖作為脫貧攻堅(jiān)的主要途徑，但優(yōu)質(zhì)豆科牧草的缺乏是限制該區(qū)域山羊養(yǎng)殖的主要因素。葛藤（Pueraria lobata）俗稱野葛，為多年生蝶形花科（Papilionaceae）葛藤屬植物，我國(guó)除西藏和新疆各省皆有分布［1］。葛藤生長(zhǎng)條件較低，耐旱耐貧瘠，其嫩莖和葉片適口性好，是優(yōu)良的飼料來(lái)源［2］。葛藤營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，粗蛋白質(zhì)16.5%~22.5%，粗脂肪2.65%~4.87%［3］。同時(shí)，葛藤含有葛根素、葛根黃酮、葛根甙元等活性成分，可提高機(jī)體免疫力、生殖器官發(fā)育和生殖力，并能預(yù)防由應(yīng)激原引起的應(yīng)激綜合癥［4-7］。紫花苜蓿（Medicago sativa）是世界上栽培面積最大的多年生豆科牧草，其生物產(chǎn)量高、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、適口性好，耐干旱寒冷，怕潮濕炎熱環(huán)境，不耐水澇［8-9］。我國(guó)西南地區(qū)年降水量高達(dá)1300~1500 mm，高溫高濕的氣候和酸性土壤條件，對(duì)紫花苜蓿的生長(zhǎng)極為不利［10-11］。因此，紫花苜蓿在西南地區(qū)難以發(fā)揮高產(chǎn)潛力，種植范圍受到很大限制。篩選高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、適應(yīng)性強(qiáng)的蛋白質(zhì)飼草資源，是解決南方優(yōu)質(zhì)豆科牧草不足的有效途徑之一。

迄今，以葛藤作為小反芻動(dòng)物飼料原料還缺乏系統(tǒng)的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分、養(yǎng)分利用效率等方面的研究。本試驗(yàn)擬將葛藤草粉以不同比例替代全混合日糧中的苜蓿草粉，研究葛藤草粉替代苜蓿草粉的日糧對(duì)波雜山羊日糧養(yǎng)分表觀消化率、生長(zhǎng)性能、血清生化參數(shù)等性能的影響，為我國(guó)西南地區(qū)葛藤資源在小反芻動(dòng)物日糧中的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 葛藤的采收與葛藤草粉制備

2018年9 月在湖南湘西土家族苗族自治州古丈縣斷龍鄉(xiāng)楊家寨采集新鮮葛藤，曬干后粉碎備用。采樣區(qū)海拔800~1200 m，地理坐標(biāo)為東經(jīng)109°10′-110°22.5′、北緯27°44.5′-29°38′，屬亞熱帶季風(fēng)濕潤(rùn)氣候，年平均氣溫15.0~16.9℃，最高氣溫40.5℃、最低氣溫-5.5℃。年降水量1300~1500 mm，無(wú)霜期250~280 d。年平均相對(duì)濕度77%，年平均日照1397.2 h。

1.2 苜蓿

紫花苜蓿草粉顆粒采購(gòu)自甘肅省定西白盛塬草業(yè)有限責(zé)任公司。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2019年9-11月在湖南古丈縣斷龍鄉(xiāng)楊家寨進(jìn)行。選擇體重［（18.20±1.65）kg］相近的5月齡波爾山羊×馬頭山羊閹公羔75只，采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為5組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3只，每個(gè)重復(fù)飼喂于一個(gè)羊欄。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，其他4個(gè)處理組分別飼喂以葛藤草粉等量替代苜蓿草粉25%、50%、75%和100%的日糧。試驗(yàn)日糧成分及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）見表1。試驗(yàn)日糧利用制粒機(jī)（PKLP-125，河南省恒富機(jī)械設(shè)備有限公司）制成2~3 cm長(zhǎng)的顆粒后進(jìn)行飼喂，預(yù)試期10 d，正試期55 d。

表1 試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分Table 1 Diet composition and nutrient levels of the experimental diets（air dry-basis）

1.3.1 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)開始前對(duì)羊舍及設(shè)備消毒，試驗(yàn)羊進(jìn)行防疫和驅(qū)蟲。試驗(yàn)個(gè)體在預(yù)試期開始時(shí)連續(xù)2 d空腹稱重，并依據(jù)平均體重分組。每天08：00和15：00進(jìn)行飼喂，自由采食飲水。

1.3.2 生長(zhǎng)性能測(cè)定 試驗(yàn)個(gè)體在正試期開始和結(jié)束時(shí)08：00分別空腹稱重。每天測(cè)定每個(gè)試驗(yàn)個(gè)體投入的食物量和食物剩余殘?jiān)?jì)算每個(gè)試驗(yàn)個(gè)體的飼料攝入量，日均采食量（average daily feed intake，ADFI）、平均日增重（average daily gain，ADG）及料重比（the ratio of feed to gain，F(xiàn)/G）。

1.4 樣品采集

每個(gè)處理組隨機(jī)選取5只試驗(yàn)羊，自頸靜脈采血10 mL，分離血清，-20℃保存。

1.4.1 血清生化指標(biāo) 采用貝克曼庫(kù)爾特全自動(dòng)生化分析儀（AU 680，美國(guó)Beckman Coulter公司）測(cè)定血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶（glutamic oxalacetic transaminase，GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）活性及白蛋白（albumin，ALB）和溶菌酶（lysozyme，LSZ）含量。

1.4.2 抗氧化指標(biāo) 采用南京建成生物工程研究所抗氧化試劑盒測(cè)定血清及組織中總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）、超氧化物歧化酶（superoxide diamutase，SOD）、過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）活性、丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性。

1.4.3 免疫指標(biāo) 采用南京建成生物工程研究所酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)定血清免疫球蛋白A（immunoglobulins A，IgA）、免疫球蛋白G（immunoglobulins G，IgG）、免疫球蛋白M（immunoglobulins M，IgM）含量。

1.4.4 養(yǎng)分表觀消化率的測(cè)定 于飼喂試驗(yàn)的第50~55天進(jìn)行消化試驗(yàn)。每組挑選3只進(jìn)行單欄飼喂，測(cè)定每只試驗(yàn)羊的日采食量、食物消化率，計(jì)算表觀消化率；每天測(cè)定每個(gè)試驗(yàn)個(gè)體的投喂量和剩料量，計(jì)算日均采食量；試驗(yàn)個(gè)體在正試期開始和結(jié)束時(shí)空腹稱重。同時(shí)采集飼料樣品，將消化試驗(yàn)期內(nèi)所收集的樣品充分混合，取20%置于-20℃冰箱中保存。每天收集糞便并稱重，取15%的糞樣75℃烘干至恒重，在-20℃冰箱中保存；采用凱氏定氮法［12］測(cè)定飼料樣品和糞中粗蛋白質(zhì)（crude protein，CP）含量；采用范氏法［13］測(cè)定飼料樣品和糞中的中性洗滌纖維（neutral detergent fiber，NDF）、酸性洗滌纖維（acid detergent fiber，ADF）含量。參照張麗英［14］的方法測(cè)定樣品的干物質(zhì)、粗脂肪、鈣、總磷和粗灰分含量。

各養(yǎng)分表觀消化率的計(jì)算公式如下：

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 16.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，差異顯著者采用Duncan氏法進(jìn)行均值多重比較，顯著性水平為0.05。結(jié)果采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

葛藤草粉的粗蛋白質(zhì)、鈣、磷含量與苜蓿草粉相近，但是粗脂肪、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維和粗灰分含量均高于苜蓿草粉（表2）。

表2 葛藤草粉和苜蓿草粉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量Table 2 Nutrient component contents of kudzu vine meal and alfalfa meal（%，DM basis）

隨葛藤草粉替代苜蓿草粉水平的增加，波雜山羊的干物質(zhì)、粗蛋白及中性洗滌纖維表觀消化率顯著提高（P<0.05）。但粗脂肪、酸性洗滌纖維、鈣及總磷表觀消化率各處理組間差異不顯著（P>0.05）（表3）。

表3 葛藤草粉替代不同比例苜蓿草粉對(duì)波雜山羊養(yǎng)分表觀消化率的影響Table 3 Effects of substituting dietary alfalfa meal by kudzu vine meal on apparent nutrient digestibility in Boer crossbred goats

當(dāng)攝食葛藤草粉替代苜蓿草粉25%、50%、75%及100%的日糧時(shí)，波雜山羊血清MDA含量比對(duì)照分別降低11.3%、19.8%、25.4%和26.3%；隨著替代水平的增加，血清SOD、T-AOC、CAT及GSH-Px活性顯著升高（P<0.05）；當(dāng)100%替代時(shí)，血清SOD、T-AOC、CAT及GSH-Px活性較對(duì)照組分別升高8.8%、20.7%、49.4%及34.4%（P<0.05）；而ALT和GOT活性在各處理組間差異不顯著（P>0.05）（表4）。

表4 葛藤草粉替代不同比例苜蓿草粉對(duì)波雜山羊血清生化指標(biāo)的影響Table 4 Effects of substituting dietary alfalfa meal by kudzu vine meal on serum biochemical indices of Boer crossbred goats

攝食含葛藤草粉日糧各組波雜山羊血清白蛋白較對(duì)照組有所提高，但差異不顯著（P>0.05）（表5）。25%、50%、75%及100%組血清IgA含量比對(duì)照組分別提高15.8%、21.0%、26.3%和21.0%（P<0.05），但4個(gè)處理組間差異不顯著（P>0.05），血清IgG分別提高6.8%、9.5%、12.2%、10.8%（P<0.05），血清IgM分別提高9.1%、12.1%、15.2%和12.1%（P<0.05），各組LSZ較對(duì)照組有所提高，但差異不顯著（P>0.05）。

表5 日糧中葛藤草粉替代不同比例苜蓿草粉對(duì)波雜山羊免疫功能的影響Table 5 Effects of substituting dietar y alfalfa meal by kudzu vine meal on immunity of Boer crossbr ed goats

以葛藤草粉替代苜蓿草粉50%、75%及100%組波雜山羊平均日增重比對(duì)照組顯著增加（P<0.05）。75%組平均日增重、平均日采食量及料重比最佳（表6），75%組平均日增重比對(duì)照組增加23.2%，料重比下降15.49%（P<0.05）。

表6 葛藤草粉替代不同比例苜蓿草粉對(duì)波雜山羊生產(chǎn)性能的影響Table 6 Effects of substituting dietary alfalfa meal by kudzu vine meal on growth performance of Boer crossbred goats

3 討論

葛藤?gòu)V泛分布于我國(guó)西南地區(qū)，其返青早、生長(zhǎng)期長(zhǎng)［15-16］。葛藤的根、莖、枝、葉不但富含蛋白質(zhì)、碳水化合物等易被消化吸收物質(zhì)，且具有防治動(dòng)物疾病的功效，是飼藥合用、畜禽喜食的優(yōu)質(zhì)牧草［17-18］。本研究首次利用葛藤草粉替代苜蓿草粉飼喂波雜山羊，結(jié)果發(fā)現(xiàn)苜蓿草粉組和葛藤草粉組間粗脂肪、酸性洗滌纖維、鈣及總磷表觀消化率均無(wú)顯著差異。隨葛藤草粉替代日糧中苜蓿草粉水平的增加，波雜山羊的干物質(zhì)、中性洗滌纖維和粗蛋白表觀消化率均有顯著提高，這可能與葛藤含豐富的黃豆甙元及葛根黃酮可增強(qiáng)動(dòng)物食欲、消化液分泌，增強(qiáng)了動(dòng)物對(duì)食物的消化和吸收、減少了能量消耗有關(guān)［6-7］。飼料中添加葛根素可緩解肉牛熱應(yīng)激，促進(jìn)脂肪代謝，但是對(duì)肉牛生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響［19］。滿晨等［20］報(bào)道，在豬日糧中添加3%葛根粉可提高豬飼料轉(zhuǎn)化率和生產(chǎn)性能。

ALT和GOT是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)重要的轉(zhuǎn)氨酶，可反映肝細(xì)胞健康狀況。一般情況下，動(dòng)物機(jī)體內(nèi)只有少量ALT和GOT被釋放到血液中，血清中ALT和GOT的活性較低。當(dāng)肝臟發(fā)生病變后，肝臟組織細(xì)胞內(nèi)大量ALT和GOT釋放進(jìn)入血液，致使血液中ALT和GOT活性升高［21-22］。本研究用葛藤草粉替代苜蓿草粉后，波雜山羊血清ALT和GOT未發(fā)生顯著變化，表明在日糧中，以葛藤草粉替代苜蓿草粉對(duì)機(jī)體養(yǎng)分的吸收和代謝以及健康狀況無(wú)不良影響。MDA是過(guò)氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，其含量越高，脂質(zhì)受到氧自由基攻擊的程度就越高，是反映膜脂過(guò)氧化程度的重要生理參數(shù)。本研究表明，隨著替代水平的增加，波雜山羊血清MDA含量呈線性降低；SOD、T-AOC、CAT及GSH-Px活性則呈線性升高。葛根素可促進(jìn)牛主動(dòng)脈上皮細(xì)胞增殖［23］。Guerra等［24］報(bào)道，葛根素能顯著提高大鼠心肝等組織中SOD活性，而心臟、腦、肝臟等組織中MDA含量顯著降低，表明葛根素能清除動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的自由基，減少脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)生。這可能是由于葛根異黃酮具有抗氧化損傷、清除自由基、調(diào)節(jié)血脂代謝、改善高脂血癥等藥理活性［25-26］所致。

免疫球蛋白主要參與體內(nèi)體液免疫，具有結(jié)合抗原、激活補(bǔ)體等作用［7］。本研究中，各處理組血清中免疫球蛋白的含量均有不同程度提高，說(shuō)明葛藤草粉替代苜蓿草粉可以提高波雜山羊血清免疫因子含量，從而提高免疫能力。汪紀(jì)倉(cāng)等［27］在肉雞飼料中添加葛根素后，胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均有不同程度的提高。

葛根素為異黃酮類化合物，具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的作用。本研究結(jié)果表明，以葛藤草粉替代苜蓿草粉，能顯著提高波雜山羊的平均日增重，特別是山羊日糧中葛藤草粉為75%時(shí)，其平均日增重及料重比最佳，料重比下降15.49%。張川黔等［28］在生長(zhǎng)兔日糧中添加60%的葛藤葉粉，生長(zhǎng)兔日增重可達(dá)20.37 g。同時(shí)，葛根總黃酮也可明顯提高肉雞的生長(zhǎng)性能［29］。因此，葛藤草粉替代苜蓿草粉，有利于解決西南山區(qū)山羊優(yōu)質(zhì)豆科牧草短缺的問題。

西南山區(qū)氣候炎熱潮濕，土壤呈酸性，不利于紫花苜蓿等豆科牧草生長(zhǎng)，種植面積和范圍均受到一定的限制。本研究表明葛藤因其營(yíng)養(yǎng)成分和苜蓿相近，且葛藤莖葉粉所含黃酮類有效成分不僅能提高山羊免疫功能，還具有抗氧化損傷、清除自由基、調(diào)節(jié)血脂代謝、改善高脂血癥等藥理活性。因此，葛藤有望成為替代苜蓿的飼料原料。

4 結(jié)論

葛藤草粉不僅能改善山羊的生產(chǎn)性能，而且可提高山羊的免疫能力。在西南山區(qū)葛藤再生性強(qiáng)，產(chǎn)量高、成本低，有望成為替代苜蓿的飼料原料。