郭文韜，梁喜玲

（陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，陜西西安 710048）

維生素C是一種水溶性維生素，是人體必需的營(yíng)養(yǎng)素之一，在維持正常的人體機(jī)能方面有著重要的作用。它參與了神經(jīng)介質(zhì)、激素的生物合成，促進(jìn)膠原蛋白的合成，具有抗癌的功效。在促進(jìn)膽固醇排泄防止其在動(dòng)脈內(nèi)壁沉積方面也有重要的作用。維生素C廣泛存在于植物組織中，新鮮的水果和蔬菜中含量較為豐富，尤其是花菜、青辣椒、橙子、獼猴桃等果蔬。人體缺乏維生素C會(huì)引起相關(guān)疾病，但其攝入量只需滿足機(jī)體正常需求即可，無(wú)需過(guò)量攝入。人體自身無(wú)法合成維生素C，只能從食物或腸外營(yíng)養(yǎng)供給，但其容易氧化，且在體內(nèi)儲(chǔ)存時(shí)間短。一些特殊的人群，如孕產(chǎn)婦，除正常的飲食攝取以外，可適當(dāng)補(bǔ)充一些添加維生素C的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

研究建立快速準(zhǔn)確測(cè)定特殊配方食品中維生素C含量的方法具有重要意義，可為保障生命體健康和安全提供有力的技術(shù)支撐。對(duì)于維生素C的檢測(cè)方法研究較多，有高效液相色譜法[1-2]、紫外分光光度法[3]、熒光比色法[4-5]及光學(xué)快速檢測(cè)卡法[6]等?！妒称钒踩珖?guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素C的測(cè)定》（GB 5413.18—2010）[4]中的熒光法，是目前檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和乳粉企業(yè)普遍采用的方法，該方法具有操作簡(jiǎn)便高效、重復(fù)性好、靈敏度高、檢出限低和線性關(guān)系好等優(yōu)點(diǎn)。本研究擬采用質(zhì)控樣品、精密度實(shí)驗(yàn)、加標(biāo)實(shí)驗(yàn)和實(shí)際樣本測(cè)試等方法研究熒光法用于檢測(cè)特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中（孕產(chǎn)婦營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑）維生素C含量的適用性。

1 材料與方法

1.1 樣本與試劑

不同批次的孕產(chǎn)婦營(yíng)養(yǎng)配方谷粉（2個(gè)不同廠家各3批次），總計(jì)6個(gè)樣本，均由企業(yè)提供。本實(shí)驗(yàn)方法中所涉及到的常規(guī)試劑除活性炭（化學(xué)純）外均為分析純，質(zhì)控樣購(gòu)買于中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心。

1.2 儀器與設(shè)備

溫度可調(diào)節(jié)的烘箱；培養(yǎng)箱；ATL-224電子天平；RF-6000熒光分光光度計(jì)。

1.3 樣本的前處理與標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

樣本的前處理過(guò)程和維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度0.1 mg/mL） 的配制方法參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素C的測(cè)定》（GB 5413.18—2010）中的方法 進(jìn)行。

1.4 方法

1.4.1 樣本的測(cè)定

樣本的測(cè)定中，用樣本溶液熒光值減去樣本空白溶液熒光值后，可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找對(duì)應(yīng)的維生素C的質(zhì)量濃度。

1.4.2 待測(cè)液的制備

按照GB 5413.18—2010中的方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，試劑添加量按表1進(jìn)行，分別移取不同體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL試管中，1到4編號(hào)備用，用蒸餾水補(bǔ)充至2 mL，同時(shí)吸取2 mL空白溶液于另一個(gè)10 mL試管中，標(biāo)記為5號(hào)。定容到2 mL后繼續(xù)添加鄰苯二胺溶液，搖勻，在避光條件下靜置1 h后待測(cè)。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備時(shí)的試劑添加量

1.4.3 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

在相同的實(shí)驗(yàn)操作下，將質(zhì)控樣與6個(gè)樣本進(jìn)行測(cè)定，得到其維生素C的含量。質(zhì)控樣的維生素C含量測(cè)定后，與該理論值進(jìn)行比較，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性進(jìn)行驗(yàn)證。加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)：對(duì)已測(cè)得維生素C含量的樣本，加入一定量的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液（其質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL）。測(cè)定樣本、加標(biāo)樣本、質(zhì)控樣和加標(biāo)質(zhì)控樣，對(duì)實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，考察回收率的情況。

1.4.4 精密度實(shí)驗(yàn)

3號(hào)孕婦配方谷粉為精密度測(cè)試實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象。分別稱取3號(hào)樣本6份，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，平行測(cè)定6份產(chǎn)品中的維生素C含量，研究本實(shí)驗(yàn)方法的精密度情況。

1.4.5 數(shù)據(jù)處理

采用常用軟件Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣本測(cè)定結(jié)果

取質(zhì)控樣品和6個(gè)不同批次的樣本2.5 g，同一種樣品均取平行樣，分別測(cè)定維生素C含量，結(jié)果見(jiàn)表2（該方法的檢出限為0.1 mg/100 g）。

表2 質(zhì)控樣和6個(gè)樣本的維生素C含量

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.18—2010中維生素C的測(cè)定方法，將熒光分光光度計(jì)激發(fā)波長(zhǎng)設(shè)定為350 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為430 nm，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的熒光值，標(biāo)準(zhǔn)曲線的橫坐標(biāo)為維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度（μg/mL），標(biāo)準(zhǔn)曲線的縱坐標(biāo)為相應(yīng)的凈熒光值（標(biāo)準(zhǔn)系列熒光值減去標(biāo)準(zhǔn)空白熒光值），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（圖1），所擬合的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程為y=10.921 3x+0.630 3（R2=0.999 2），線性良好。

圖1 維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.3 加標(biāo)回收驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在表3中，前4組數(shù)據(jù)是3號(hào)樣本的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，最后一組是質(zhì)控樣本（樣品質(zhì)量為2.500 6 g）的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。由表3可知，特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品樣本和質(zhì)控樣的加標(biāo)回收率均較高，樣本的回收率結(jié)果為90.0%～93.5%，質(zhì)控樣為92.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.25%，值相對(duì)較小。熒光法適合檢測(cè)特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中的維生素C含量，且本方法可靠性高，具有較好的準(zhǔn)確度。

表3 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表4可知，對(duì)3號(hào)樣本測(cè)定6次平行實(shí)驗(yàn)，維生素C含量平均值為155.1 mg/100 g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.64%，在國(guó)標(biāo)規(guī)定的范圍內(nèi)，表明該方法的精密度較好，可以滿足檢測(cè)要求。

表4 3號(hào)樣本精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本研究中質(zhì)控樣維生素C含量理論值與測(cè)定值在允許誤差范圍內(nèi)，證明測(cè)定結(jié)果是可靠的。質(zhì)控樣和3號(hào)樣本的加標(biāo)回收率為90.0%～93.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.64%，表明熒光法準(zhǔn)確度較高，精密度較好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可信。6批次市售的特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中維生素C含量均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)維生素C含量添加量的要求，表明熒光法適合檢測(cè)特殊醫(yī)學(xué)用途配方食品中的維生素C含量，具有實(shí)際參考 價(jià)值。