柳詩雅，王攀，周劍鎖，王天成，崔麗艷（北京大學(xué)第三醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100191）

研究顯示，糖尿病是導(dǎo)致老年癡呆的重要因素［1-2］。2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）患者高血糖導(dǎo)致活性氧、糖基化終末產(chǎn)物及炎癥因子升高，這些因子造成神經(jīng)元損傷、血腦屏障功能障礙［3］、胰島素信號通路傳導(dǎo)異常，使患者的信息加工處理能力下降，最終導(dǎo)致患者認(rèn)知能力障礙，甚至癡呆［4］。S-100β 蛋白主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，是反映早期腦損傷的重要生化指標(biāo)［5］。神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron specific endase，NSE）是腦神經(jīng)元損傷及壞死的重要指標(biāo)［6］。神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（gial fibrillary acidic protein，GFAP）是一種集中在星形膠質(zhì)細(xì)胞骨架的蛋白，對腦組織具有特異性，是一種較敏感的腦損傷指標(biāo)［7］。研究表明，缺血性腦卒中患者血清S-100β 及NSE 與神經(jīng)缺損程度、認(rèn)知障礙程度呈正相關(guān)［8］。研究表明，首發(fā)性抑郁癥患者GFAP、NSE水平與認(rèn)知功能密切相關(guān)［5］。本研究旨在通過分析不同糖化血紅蛋白（HbA1c）水平T2DM患者S-100β、NSE、GFAP 水平差異，探討血糖控制水平與上述神經(jīng)認(rèn)知障礙指標(biāo)的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2020 年9 月至2021 年1 月就診于北京大學(xué)第三醫(yī)院的130 例T2DM 患者為研究對象，所有病例的臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果均符合《中國2型糖尿病防治指南（2017版）》［9］和《糖尿病的實(shí)驗(yàn)室診斷管理專家共識》［10］的明確診斷，且排除患有明顯意識障礙、神經(jīng)系統(tǒng)疾病以及腫瘤的患者。同時(shí)選取體檢中心年齡、性別相匹配的健康人66例作為健康人對照組。以HbA1c水平作為衡量糖尿病患者治療效果是否達(dá)標(biāo)的監(jiān)測指標(biāo)將其分為3組［11］：血糖控制較好組（65 例，6.5%＜HbA1c＜7.0%）、血糖控制較差組（65 例，HbA1c＞9.0%）和健康人對照組。3 組研究對象之間性別、年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。2 組糖尿病患者之間患病時(shí)長差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究遵守國際協(xié)調(diào)理事會臨床試驗(yàn)規(guī)范和赫爾辛基宣言，經(jīng)北京大學(xué)第三醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理審查委員會審核通過（倫理批件號：M2021113），并批準(zhǔn)予以豁免患者知情同意。

表1 3組研究對象的基本信息

1.2 主要儀器與試劑 Bio-Rad 全自動酶聯(lián)免疫分析儀購自美國Bio-Rad 公司，Cobas e602 電化學(xué)發(fā)光全自動免疫分析儀及配套血清S-100β 試劑盒（批號：47355901）、NSE 試劑盒（批號：48318201）購自羅氏公司，AU5800 全自動生化分析儀及配套葡萄糖檢測試劑盒（批號AUZ8808）購自貝克曼庫爾特公司，TOSOH HLC－723G8 全自動糖化血紅蛋白分析儀及配套HbA1c 檢測試劑盒購自東曹株式會社，血清GFAP 檢測試劑盒（批號：Z19038609）購自武漢華美生物工程公司。

1.3 標(biāo)本采集與檢測 用含EDTA-K2抗凝劑真空采血管采集研究對象空腹靜脈血，混勻，用高效液相離子交換色譜法檢測HbA1c。用真空促凝分離膠管采集研究對象空腹靜脈血3 mL，3 500×g離心5 min，取血清，－80 ℃保存。按照試劑盒說明書，用己糖激酶法檢測血糖，用ELISA 檢測血清GFAP，用電化學(xué)發(fā)光法檢測血清S-100β和NSE。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。用Kolomogorov-Smirnov法檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的分布特征，正態(tài)分布數(shù)據(jù)以表示，其余數(shù)據(jù)采用對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行分析。兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，三組間進(jìn)行單因素方差分析，符合方差齊性時(shí)進(jìn)一步采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。采用Spearman 相關(guān)性分析和多元線性回歸分析血清S-100β、NSE、GFAP 水平與血糖控制水平等變量間的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Glu、HbA1c、S-100β、NSE、GFAP 水平比較 3組研究對象相比，血糖控制較差組空腹血糖（Glu）、HbA1c水平均高于血糖控制較好組，血糖控制較好組Glu高于健康人群組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）。同時(shí)3組之間S-100β、NSE水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），而GFAP 差異不明顯（P＞0.05），見表2。進(jìn)一步行組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)：血糖控制較差組與對照組相比，血清中S-100、NSE水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；血糖控制較差組與血糖控制較好相比，血清中S-100β、NSE水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）；血糖控制較好組與對照組相比，血清中S-100β、NSE 水平有升高，僅S-100β升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 3組研究對象Glu、HbA1c、S-100β、NSE、GFAP 水平比較（）

表2 3組研究對象Glu、HbA1c、S-100β、NSE、GFAP 水平比較（）

2.2 血清S-100β、NSE、GFAP 水平與血糖控制水平的相關(guān)性分析 血清S-100β、NSE、GFAP 水平與血糖呈正相關(guān)（r分別為0.155、0.189、0.262，P＜0.05），且S-100β 與NSE 呈正相關(guān)（r為0.279，P＜0.05）。通過多元線性回歸分析血清S-100β、NSE、GFAP 水平的影響因素，在納入患者性別、年齡、血糖水平等變量進(jìn)行多因素分析時(shí)，血清S-100β、NSE、GFAP 水平與血糖水平的標(biāo)準(zhǔn)化系數(shù)β 均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），表明患者血糖水平是血清S-100β、NSE、GFAP 水平的一個影響因素。

3 討論

隨著人們生活方式的轉(zhuǎn)變及人口老齡化的影響，T2DM和神經(jīng)認(rèn)知功能障礙成為臨床最常見的嚴(yán)重威脅人類生存質(zhì)量的兩種慢性疾病。兩者有著共同的病生理機(jī)制和危險(xiǎn)因素。糖尿病與認(rèn)知功能障礙相互加重，形成“雙向”的惡性循環(huán)［12］。數(shù)據(jù)分析表明T2DM 與大腦的緩慢進(jìn)行性終末器官損害有關(guān)，表現(xiàn)在認(rèn)知功能的輕度至中度損害［13］，使神經(jīng)認(rèn)知障礙增加了1.25～1.91 倍的風(fēng)險(xiǎn)［14］，特別是老年患者。

在本研究中，S-100β是唯一一個在血糖控制較好組跟健康人對照組之間也有顯著性差異的指標(biāo)，表明相比較于NSE、GFAP，S-100β對于糖尿病人血糖控制水平的變化更敏感，可以更靈敏反映出糖尿病患者神經(jīng)認(rèn)知功能損傷與血糖之間的關(guān)系。

NSE是一種急性神經(jīng)損傷的標(biāo)志物，神經(jīng)元受損后，NSE自細(xì)胞內(nèi)溢出并透過血腦屏障進(jìn)入腦脊液和血循環(huán)中，使得血清中的含量升高，是腦實(shí)質(zhì)損傷的標(biāo)志［15］。在本研究中，血糖控制較差組T2DM患者的血清NSE水平也顯著升高，也可以提示T2DM的血糖控制水平可能與神經(jīng)認(rèn)知功能障礙密切相關(guān)。GFAP 是中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達(dá)蛋白，可以抑制成熟大腦中的神經(jīng)元增殖和神經(jīng)突延伸，調(diào)節(jié)血流，促進(jìn)血腦屏障，支持髓鞘形成。腦部缺血缺氧時(shí)會導(dǎo)致GFAP 含量升高，誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞不斷分裂，從而引起中樞系統(tǒng)神經(jīng)細(xì)胞損傷［16］，GFAP 已被成功地用于評估神經(jīng)損傷嚴(yán)重程度和預(yù)測急性顱腦損傷的結(jié)果［17］。本研究結(jié)果表明，3組之間GFAP 水平差異不明顯，可能是由于GFAP 水平的檢測采用了ELISA方法，檢測過程可能會受到洗滌、加樣等因素的影響，使得檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度較低。

在進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析時(shí)，血清S-100β、NSE、GFAP 水平與血糖值呈正相關(guān)。與此同時(shí)，在進(jìn)行多因素分析時(shí)，考慮到糖化血紅蛋白（HbA1c）反映的是患者近期2～3 個月血糖水平，其與血糖水平之間相關(guān)性較強(qiáng)，為了排除兩者之間共線性的影響，本研究只納入了年齡、性別、血糖值3 個因素進(jìn)入多元線性回歸模型，結(jié)果顯示血清S-100β、NSE、GFAP 水平與血糖水平呈明顯正相關(guān)，表明血糖控制水平可能是神經(jīng)認(rèn)知功能障礙相關(guān)指標(biāo)變化的一個獨(dú)立影響因素。

本研究較大的局限性在于沒充分考慮血壓、血脂、患病時(shí)長等其他可能會影響神經(jīng)認(rèn)知功能的因素，也缺乏對于T2DM患者神經(jīng)認(rèn)知功能的評估以及后續(xù)的追蹤調(diào)查，使得病例納入可能存在一定的樣本選擇性偏倚，有待后續(xù)設(shè)計(jì)更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究。