張瑜，黃萍，陳雪飛，鄭小變

(1.華仁藥業(yè)<日照>有限公司，山東 日照 276800；2.山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東 濟(jì)南 250101；3.大道隆達(dá)<北京>醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司，北京 100086)

羥乙基淀粉130/0.4是以玉米淀粉為原料通過酸水解和羥乙基化處理而得到的分子量為130 000 Da，摩爾取代度約為0.4的一種物質(zhì)；以羥乙基淀粉130/0.4制成的注射液為血液容量擴(kuò)充劑，用于治療和預(yù)防血容量不足，急性等溶血液稀釋(ANH)。羥乙基淀粉130/0.4屬于多糖類化合物[1]，在水溶液中與葡萄糖類似，經(jīng)過高溫滅菌后，有5-羥甲基糠醛的產(chǎn)生。5-羥甲基糠醛是由葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸性等條件下脫水產(chǎn)生的具有呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)的醛類化合物，是麥拉德反應(yīng)的典型產(chǎn)物之一[2]。5-羥甲基糠醛過量對(duì)人體有一定的損害[3-6]，其不良反應(yīng)臨床多表現(xiàn)為過敏性休克及呼吸系統(tǒng)損傷[7-8]，并具有一定的腎毒性[9]。為保證制劑的質(zhì)量及臨床用藥安全,需對(duì)滅菌工藝參數(shù)及藥液pH進(jìn)行篩選并加以控制，盡可能降低制劑中5-羥甲基糠醛的含量。5-羥甲基糠醛檢測(cè)的方法有比色法、紫外法和高效液相色譜(HPLC)法，其中干擾較少、準(zhǔn)確度較高的為HPLC法[3-6]。本文采用HPLC法測(cè)定羥乙基淀粉130/0.4氯化鈉注射液中的5-羥甲基糠醛，建立了5-羥甲基糠醛的分析方法，經(jīng)驗(yàn)證，該方法適用于羥乙基淀粉130/0.4氯化鈉注射液中的5-羥甲基糠醛的檢測(cè)，為控制該制劑的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 樣品來源 羥乙基淀粉130/0.4與氯化鈉注射液[華仁藥業(yè)(日照)有限公司]，規(guī)格：500 mL：羥乙基淀粉130/0.4 30 g與氯化鈉4.5 g，批號(hào)：190622R1、190623R1、190703C1。

1.2 儀器與試藥 2030Cplus島津高效液相色譜儀，LC-2030紫外檢測(cè)器(一體機(jī))，6.50SP1島津網(wǎng)絡(luò)版工作站；Mettler AE240電子天平；5-羥甲基糠醛對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111626-201711)；甲醇(色譜純，F(xiàn)isher)；注射用水(石家莊四藥有限公司，批號(hào)：1906023204)；純化水。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用VP-ODS C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，以甲醇∶水(10∶90)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm。柱溫30 ℃，流速：1.0 mL·mL-1。理論板數(shù)按5-羥甲基糠醛峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2 對(duì)照品溶液 精密稱取5-羥甲基糠醛11.62 mg，置100 mL量瓶中，加注射用水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為5-羥甲基糠醛貯備液(0.116 2 mg·mL-1)。

精密量取5-羥甲基糠醛貯備液2 mL，置100 mL量瓶中，加注射用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液(2.324 μg·mL-1)。

2.3 供試品溶液 精密量取本品5 mL，置25 mL量瓶中，加注射用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液(含羥乙基淀粉130/0.4：12 mg·mL-1)。

2.4 定量限溶液 精密量取對(duì)照品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置20 mL量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，搖勻，作為定量限溶液(0.006 μg·mL-1)。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 專屬性考察 照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白溶液(注射用水)各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，色譜圖見圖1。對(duì)照品溶液中5-羥甲基糠醛保留時(shí)間為4.769 min，供試品溶液中5-羥甲基糠醛保留時(shí)間為4.766 min。結(jié)果表明，理論板數(shù)按5-羥甲基糠醛峰計(jì)算為6 860，空白溶液與供試品溶液均不干擾5-羥甲基糠醛檢測(cè)。

A.對(duì)照品溶液；B.供試品溶液圖1 5-羥甲基糠醛測(cè)定HPLC圖譜

2.5.2 線性關(guān)系考察 在定量限溶液濃度至5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液的200%濃度范圍內(nèi)制備線性溶液，濃度分別為0.006、1.162、1.859、2.324、2.789、3.718、4.648 μg·mL-1。

精密量取上述線性溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以5-羥甲基糠醛濃度X(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=1 211 941.060 7X+375.233 5(r=1.000 0)。結(jié)果表明，5-羥甲基糠醛在0.006～4.648 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.5.3 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液20 μL按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各色譜圖峰面積，RSD為0.96%，結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.3”項(xiàng)下制備的供試品溶液，精密量取20 μL，分別在0、1、2、4、8、12 h，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液中5-羥甲基糠醛峰面積的RSD為0.21%，在12 h內(nèi)溶液穩(wěn)定。

2.5.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取供試品溶液20 μL按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各色譜圖峰面積，計(jì)算每份樣品的5-羥甲基糠醛含量，RSD為0.66%，結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

2.5.6 回收率試驗(yàn) 供試品溶液：精密量取本品(批號(hào)：190622R1)5 mL，置25 mL量瓶中，加注射用水使溶解，作為供試品溶液。

分別精密量取供試品溶液2 mL，置10 mL量瓶中，再分別精密量取“2.5.2”項(xiàng)下制備的4.648 μg·mL-1的對(duì)照品溶液4、5、6 mL，分置于上述10 mL量瓶中，用注射用水稀釋至刻度，搖勻，作為加標(biāo)80%、100%、120%的供試品溶液，每個(gè)濃度平行配制3份。

分別精密量取加標(biāo)80%、100%、120%的供試品溶液及對(duì)照品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算5-羥甲基糠醛的回收率，平均回收率為102.0%，RSD=0.59%(n=9)，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.5.7 檢測(cè)限LOD與定量限LOQ 取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，逐級(jí)稀釋并進(jìn)樣，以信噪比為3∶1時(shí)，計(jì)算檢測(cè)限；以信噪比10∶1時(shí)，計(jì)算定量限。結(jié)果：檢測(cè)限LOD=0.03 ng，定量限LOQ=0.1 ng。

2.6 樣品測(cè)定 按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，以“2.2”項(xiàng)下溶液作為對(duì)照品溶液，測(cè)定3批樣品中5-羥甲基糠醛的含量，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 樣品中5-羥甲基糠醛測(cè)定結(jié)果

3 討論

羥乙基淀粉130/0.4與氯化鈉注射液為羥乙基淀粉130/0.4與氯化鈉的滅菌水溶液，參考《中國藥典》2020年版(二部)[10]中收載的葡萄糖注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于5-羥甲基糠醛檢查的規(guī)定，考慮到羥乙基淀粉130/0.4屬于糖類，在溶液中與葡萄糖類似，有5-羥甲基糠醛的產(chǎn)生，故對(duì)本品中可能含有的5-羥甲基糠醛進(jìn)行質(zhì)量研究。

《中國藥典》2020年版(二部)葡萄糖注射液項(xiàng)下，5-羥甲基糠醛的檢測(cè)方法中，10 mg·mL-1的葡萄糖溶液，在284 nm處測(cè)定吸光度不得大于0.32[10]。故本研究中，取5-羥甲基糠醛對(duì)照品，用注射用水定量稀釋制成每1 mL約含2.324 μg的溶液，在284 nm處進(jìn)行吸光度測(cè)定，吸光度為0.315，小于0.32。因此，當(dāng)樣品濃度為10 mg·mL-1時(shí)，5-羥甲基糠醛的限度濃度為2 μg·mL-1，即限度為0.02%(以葡萄糖計(jì))[10]。參考葡萄糖注射液項(xiàng)下5-羥甲基糠醛檢測(cè)方法，擬定本品中5-羥甲基糠醛的限度為不得過0.017%(以羥乙基淀粉130/0.4計(jì)，12 mg·mL-1)。

本研究采用高效液相色譜法對(duì)羥乙基淀粉130/0.4氯化鈉注射液中的5-羥甲基糠醛進(jìn)行考察，建立了5-羥甲基糠醛的分析方法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證方法適用于羥乙基淀粉130/0.4中的5-羥甲基糠醛的檢測(cè)。