唐婷婷，胡佳惠，劉佳欣，孫翔宇，王巍，王靜

(遼寧中醫(yī)藥大學藥學院，遼寧 大連 116600)

毛茛科植物威靈仙(ClematischinensisOsbeck)、棉團鐵線蓮(ClematishexapetalaPall.)及東北鐵線蓮(ClematismanshuricaRupr.)的干燥根和根莖均為中藥威靈仙的正規(guī)來源[1]。中藥威靈仙入藥始載于《新修本草》，性味辛、咸、溫，性猛善走，通行十二經(jīng)脈，具有很好的祛風濕、通經(jīng)止痹痛的功效[2]。《仙授理傷續(xù)斷秘方》中提出威靈仙“治痛(腰痛不可忍)”[3]。有文獻報道，原植物威靈仙和東北鐵線蓮主要化學成分均為皂苷類，而棉團鐵線蓮主要化學成分為黃酮類，藥理研究表明，威靈仙和東北鐵線蓮主要具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用[4]。但其中威靈仙特有的三萜皂苷有32種，東北鐵線蓮特有的三萜皂苷有11種[5]，由于化學成分決定生物效應(yīng)，所以威靈仙和東北鐵線蓮可能存在藥效的差異。因此，本研究比較了威靈仙和東北鐵線蓮酒炙前后在抗炎鎮(zhèn)痛方面的藥理效應(yīng)，以期為新藥的進一步開發(fā)研究提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 試驗藥物 威靈仙、東北鐵線蓮均采自遼寧省營口市蓋州，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定均為正品；阿司匹林腸溶片(北京曙光藥業(yè)有限責任公司，批號：20140607)；黃酒(山東即墨黃酒廠有限公司，批號：20160203)。

1.2 動物 SPF級昆明小鼠，300只，雌雄各半[購自遼寧長生生物技術(shù)有限公司，許可證號為：SCXK(遼)2015-0001]，體質(zhì)量(20±2)g。

1.3 試劑 二甲苯、冰醋酸(成都市科龍化工試劑廠，化學級，批號分別為2010111110、2014020801)。

1.4 儀器 FA1004B分析天平(上海精密科學儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 酒炙威靈仙和酒炙東北鐵線蓮的制備 稱取威靈仙或東北鐵線蓮適量，加入黃酒拌勻，燜潤，待酒被吸盡后，置炒制容器內(nèi)，文火加熱，炒干至顏色加深，取出晾涼，待用[6]。

2.2 供試品溶液的制備 分別稱取威靈仙和東北鐵線蓮生品及酒炙品適量，加8倍量、6倍量水，水煎提取兩次，每次1 h，合并濾液，濃縮至濃度為0.065、0.13及0.26 g·mL-1的低、中、高濃度給藥溶液(以生藥量計)，備用[6]；取阿司匹林腸溶片，用研缽研磨成細粉狀，稱取粉末適量，加水制成0.01 g·mL-1的阿司匹林混懸液[7]。

2.3 耳腫脹抗炎實驗 小鼠隨機分成15組，每組10只。分別是空白組、模型組、阿司匹林組、生品威靈仙高、中、低組，酒炙威靈仙高、中、低組，生品東北鐵線蓮高、中、低組，酒炙東北鐵線蓮高、中、低組。阿司匹林組灌胃阿司匹林懸濁液0.4 mL/20 g，生品威靈仙高、中、低組，酒炙威靈仙高、中、低組，生品東北鐵線蓮高、中、低組，酒炙東北鐵線蓮高、中、低組分別灌胃相應(yīng)給藥溶液0.4 mL/20 g，空白組和模型組灌胃等量的水，各組均連續(xù)灌胃給藥7 d。除空白組外，其余各組小鼠末次給藥1 h后，于右耳前后兩面涂抹20 μL二甲苯致炎。1 h后脫頸椎處死小鼠，用直徑8 mm的打孔器沿耳緣沖下耳郭，左右兩耳取同一部位，分別置于分析天平上稱其質(zhì)量，計算鼠耳腫脹度及抑制率[8]。

小鼠耳腫脹度(%)=(小鼠致炎耳片質(zhì)量-小鼠未致炎耳片質(zhì)量)/小鼠未致炎耳片質(zhì)量×100%

腫脹抑制率(%)=(模型組小鼠致炎后耳片平均腫脹度-給藥組小鼠致炎后耳片平均腫脹度)/模型組小鼠致炎后耳片平均腫脹度×100%

2.4 冰醋酸扭體鎮(zhèn)痛實驗 小鼠隨機分成15組，每組10只。分組及給藥方法同上。末次給藥1 h后，除空白組外各組小鼠腹腔注射新配制的0.6%冰醋酸溶液0.2 mL。觀察并記錄注射冰醋酸溶液后首次出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時間(潛伏期)與15 min內(nèi)各小鼠扭體反應(yīng)(腹部凹陷、伸展后肢、臀部抬高)次數(shù)，計算鎮(zhèn)痛抑制率[9]。

扭體抑制率(%)=(模型組小鼠15 min內(nèi)平均扭體次數(shù)-給藥組小鼠15 min內(nèi)平均扭體次數(shù))/模型組小鼠15 min內(nèi)平均扭體次數(shù)×100%

2.6 結(jié)果

2.6.1 耳腫脹抗炎實驗結(jié)果 與模型組比較，阿司匹林組、威靈仙及東北鐵線蓮各中、高劑量組均明顯降低小鼠耳腫脹度(P<0.05)，提高抑制率(P<0.05)，與生品比較，相對應(yīng)的酒炙組均有提高，但無顯著性差異，結(jié)果見表1。

表1 各組小鼠耳腫脹度及腫脹抑制率

2.6.2 冰醋酸扭體鎮(zhèn)痛實驗結(jié)果 與模型組比較，阿司匹林組、威靈仙及東北鐵線蓮各中、高劑量組均可明顯增加小鼠扭體潛伏期率(P<0.05)，減少扭體次數(shù)率(P<0.05)，增強扭體抑制率(P<0.05)。與生品比較，相對應(yīng)的酒炙組效果均有提高，但無顯著性差異，結(jié)果見表2 。

表2 各組小鼠扭體鎮(zhèn)痛實驗結(jié)果

3 討論

威靈仙在《中國藥典》2015年版中并未記載炮制方法，但各省標準均有各自的炮制工藝[10]，其中酒炙為較常見的炮制方法。威靈仙經(jīng)酒炙后走竄之性增強，善治骨關(guān)節(jié)痛，且疼痛病位偏上，呈游走性者[11]。酒威靈仙通十二經(jīng)脈，可作為引經(jīng)藥，輔助諸藥直達病灶[12]。本研究實驗結(jié)果顯示各劑量組酒炙后藥效均有提高，在小鼠醋酸扭體鎮(zhèn)痛實驗中，酒炙東北鐵線蓮作用最為明顯，優(yōu)于生品東北鐵線蓮和酒炙威靈仙，其中高劑量組效果最佳；小鼠耳腫脹抗炎實驗中，酒炙東北鐵線蓮仍然具有最佳的抗炎作用，其次為酒炙威靈仙組。

研究表明威靈仙和東北鐵線蓮的主要化學成分均為三萜皂苷類[4]，但威靈仙主要含clematochinenosides類三萜皂苷[13-14]，而東北鐵線蓮主要含clematomandshurica saponins類[15]及mandshunosides類[16]三萜皂苷。威靈仙和東北鐵線蓮有效成分種類及含量均不同，直接影響抗炎鎮(zhèn)痛的藥理效果。其中東北鐵線蓮在遼寧省資源豐富，為推動東北鐵線蓮的進一步開發(fā)，并帶動遼寧省的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟發(fā)展，可對威靈仙飲片的基源進一步劃分。

4 結(jié)論

綜上所述，兩種來源的威靈仙中，東北鐵線蓮的抗炎鎮(zhèn)痛效果更好，且酒炙后藥效增強，可進一步對東北鐵線蓮和威靈仙進行區(qū)分，擴大其應(yīng)用范圍，帶動遼寧省種植業(yè)的發(fā)展，但對于藥物產(chǎn)生療效的物質(zhì)基礎(chǔ)，還有待進一步研究。