黃茹潤(rùn) 楊嬌 劉姍 母育成 賴泳

【摘 要】 目的：評(píng)價(jià)參松養(yǎng)心膠囊、芪藶強(qiáng)心膠囊和通脈養(yǎng)心丸3種抗心血管疾病的中成藥對(duì)大鼠肝微粒體CYP450酶4種亞型CYP1A2、CYP2C11、CYP2D1和CYP3A1的體外活性影響。方法：選取15.04 μmol·L-1咖啡因、4.98 μmol·L-1奧美拉唑、7.81 μmol·L-1美托洛爾和6 μmol·L-1咪達(dá)唑侖分別為CYP1A2、CYP2C11、CYP2D1和CYP3A1特異性探針底物，三種抗心血管疾病的中成藥分別與4種CYP450酶亞型的混合探針底物在大鼠肝微粒體中共孵育，HPLC測(cè)定大鼠肝微粒體孵育體系中探針底物剩余量，求出相應(yīng)酶活性抑制百分?jǐn)?shù)并計(jì)算IC50值。結(jié)果：與空白組比較，隨著三藥濃度增高各亞酶活性呈降低趨勢(shì)（P<0.05）;三藥對(duì)大鼠肝微粒體CYP1A2、CYP2C11、CYP2D1、CYP3A1的IC50值分別為：參松養(yǎng)心膠囊1.896、31.97、12.37、1.357 μmol·L-1;芪藶強(qiáng)心膠囊 >100、1.513、35.2、6.669 μmol·L-1;通脈養(yǎng)心丸 >100、33.970、0.566、14.380 μmol·L-1。結(jié)論：參松養(yǎng)心膠囊對(duì)CYP1A2、CYP3A1有中度抑制作用，芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)CYP2C11、CYP3A1有中度抑制作用，通脈養(yǎng)心丸對(duì)CYP2D1有強(qiáng)抑制作用，其余作用不明顯。

【關(guān)鍵詞】 大鼠肝微粒體;參松養(yǎng)心膠囊;芪藶強(qiáng)心膠囊;通脈養(yǎng)心丸;CYP450酶

【中圖分類號(hào)】R965?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2021）17-0030-08

Effects of three Chinese Patent Medicines Against Cardiovascular Disease on the in Vitro Activity of four Subtypes of Liver Microsomal Cytochrome P450 in Rats

HUANG Rurun YANG Jiao LIU Shan MU Yucheng LAI Long*

Department of Pharmacology，College of Pharmacy，Dali University，Dali 671000，China

Abstract：Objectives To evaluate the effects of Shensong Yangxin capsule，Qili Qiangxin capsule and Tongmai Yangxin Pill on the in vitro activities of four subtypes of liver microsomal CYP450 enzyme CYP1A2，CYP2C11，CYP2D1 and CYP3A1 in rats. Methods 15.04 μmol·L-1Caffeine，4 .98 μmol·L-1omeprazole，7.81 μmol·L-1metoprolol and 6 μmol·L-1midazolam were selected as CYP1A2，CYP2C11，CYP2D1 and CYP3A1 specific probe substrates，respectively. The residual probe substrates in rat liver microsome incubation system were determined by HPLC，the corresponding enzyme activity percentage was calculated and IC50value was calculated，and then the effects of the three drugs on the activity of rat liver microsomal subenzymes in vitro were evaluated.Results The results showed that the IC50values of Shensong yangxin capsules on rat liver microsomes CYP1A2，CYP2C11，CYP2D1 and CYP3A1 were 1.896，12.37，31.97 and 1.357 μmol·L-1. The IC50values of Qili Qiangxin capsules on rat liver microsomes CYP2C11，CYP3A1，and CYP2D1 were 1.513，6.669，and 35.2 μmol·L-1，respectively，and IC50values of CYP1A2 were greater than 100 μmol·L-1. The IC50values of Tongmai Yangxin pill for CYP2C11，CYP2D1，and CYP3A1 were 33.970，0.566，and 14.380 μmol·L-1，respectively，and IC50values for CYP1A2 were greater than 100 μmol·L-1. Conclusion Shensong Yangxin capsule had moderate inhibitory effect on CYP1A2 and CYP3A1，but no obvious inhibitory effect on CYP2C11 and CYP2D1，Qili Qiangxin capsule had moderate inhibitory effect on CYP2C11 and CYP3A1，but had no obvious effect on CYP1A2 and CYP2D1，Tongmai Yangxin Pill had strong inhibitory effect on CYP2D1 and had no obvious effect on CYP1A2，CYP2C11 and CYP3A1.

Keywords：Rat liver microsome; Shensong yangxin capsules; Qili qiangxin capsules; Tongmai yangxin pills; CYP450

隨著人們膳食結(jié)構(gòu)的改變，加之社會(huì)人口老齡化，心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)病率和死亡率已明顯增多，嚴(yán)重威脅著人類的健康，目前主要以化學(xué)藥治療心血管疾病，但化學(xué)藥的不良反應(yīng)會(huì)限制其使用，如噻嗪類利尿藥可能導(dǎo)致低血鉀、高尿酸、高血糖;腎素-血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑類藥物易產(chǎn)生干咳;鈣拮抗劑可能引起外周水腫、便秘、心悸、面部潮紅;β受體阻滯藥可能使糖尿病病人產(chǎn)生低血糖、乏力;硝酸酯類藥可能導(dǎo)致頭痛、心率放射性加快、低血壓;抗血小板藥物可能引起肝臟損害和肌病等[1]，而中藥和中藥制劑因其溫和、持久的治療作用，以及多途徑、多靶點(diǎn)的治療特點(diǎn)，使其在抗心血管疾病中得到廣泛使用[2]。由中藥-中藥、中藥-西藥聯(lián)合用藥引起CYP450酶（CYPs）的誘導(dǎo)/抑制，產(chǎn)生的藥物相互作用明顯增加[3]，因此評(píng)價(jià)臨床常見(jiàn)中成藥對(duì)CYPs的體外活性影響，對(duì)于臨床安全用藥、降低藥-藥相互作用的風(fēng)險(xiǎn)有重要的意義。本研究通過(guò)前期大量查閱文獻(xiàn)及對(duì)大理大學(xué)第一附屬醫(yī)院、大理州人民醫(yī)院及大理市第一人民醫(yī)院3家醫(yī)院走訪，選出常用于抗心血管疾病且多與西藥聯(lián)合應(yīng)用的3種中成藥：參松養(yǎng)心膠囊（Shensong yangxin capsule，SS）、芪藶強(qiáng)心膠囊（Qili Qiangxin capsule，QL）和通脈養(yǎng)心丸（Tongmai yangxin pill，TM），但以上三藥對(duì)肝臟 CYPs 有無(wú)影響尚未見(jiàn)報(bào)道，且人的CYP1A2、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4與大鼠CYP1A2、CYP2C11、CYP2D1、CYP3A1存在同源性[4]，鑒于此，本課題采用“Cocktail”探針?biāo)幬锓?，體外評(píng)價(jià)大鼠肝微粒體中 3 種常見(jiàn)抗心血管病中成藥對(duì) CYP1A2、CYP2C19、CYP2D6 和 CYP3A4 酶的抑制活性，為預(yù)測(cè)臨床上此 3 種常見(jiàn)抗心血管病中成藥與以CYPs 4種亞酶為底物的藥物合用時(shí)可能產(chǎn)生的相互作用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為臨床藥物的合理應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 主要儀器 EL-304電子分析天平（Mettler Toledo）;pH計(jì)（上海雷磁）;色譜：Agilent 1260 HPLC工作系統(tǒng) （美國(guó)Agilent 公司）;TARGIN VX-III多管渦旋震蕩器（中國(guó)北京踏科技有限公司）;3-15臺(tái)式高速離心機(jī)（美國(guó)Sigma）。

1.2 試劑及藥品 咖啡因（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)20161014）;奧美拉唑（批號(hào)G1325050）和美托洛爾（批號(hào)C1729022）均購(gòu)自阿拉丁;咪達(dá)唑侖注射液（江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)20170328）;地西泮注射液（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號(hào)AH160602）;α-萘黃銅（批號(hào)O0506A）、奎尼?。ㄅ?hào)A1210A）、酮康唑（批號(hào)J0620AS）、氟康唑（批號(hào)O0615AS）均購(gòu)自大連美侖生物技術(shù)有限公司;參松養(yǎng)心膠囊（北京以嶺藥業(yè)有限公司，批號(hào)1703008）;芪藶強(qiáng)心膠囊（石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)A1704018）;通脈養(yǎng)心丸（樂(lè)仁堂制藥廠，批號(hào)1070275）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠10只，體重（200±20） g，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供（SYXK湘2013-0004）。

2 方法

2.1 溶液配制 內(nèi)標(biāo)溶液配制：精密量取2 mL地西泮注射液（5 mg·mL-1），超純水定容于5 mL容量瓶，得2.00 mg·mL-1的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。精密量取適量?jī)?nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，甲醇-乙腈（1∶1）稀釋成8 μg·mL-1的內(nèi)標(biāo)工作液。

三種中成藥溶液配制：精密稱取SS、QL、TM各20 mg，加甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，得400 μg·mL-1待測(cè)藥物液，臨用時(shí)采用倍比稀釋法配制為200、100、50、25、12.5、6.25μg·mL-1溶液。具體操作[5]：采用96孔板，先向第1孔加入100 μL 400 μg·mL-1的待測(cè)藥物液，吸走50 μL加入第2孔，向第2孔加入50 μL甲醇，混勻后吸走50 μL加入到第3孔，再向第3孔加入50 μL甲醇，混勻后吸走50 μL加入到第4孔，依此類推，直到第7孔，則第1孔至第7孔的藥物濃度分別為：400、200、100、50、25、12.5、6.25 μg·mL-1。

2.2 大鼠肝微粒體制備 鈣沉淀法[6]制備肝微粒體：取出大鼠肝臟稱重，剪碎，用KCl磷酸鹽緩沖液（pH=7.4）反復(fù)沖洗后，按1∶4（W/V）加入50 mmol·L-1Tris-1.15 %? KCl緩沖溶液，冰上勻漿，然后4 ℃，10000 r/min，離心20 min，取上清液加入適量CaCl2溶液（1∶1，V∶V）后再以4 ℃，14000 r/min，離心40 min，棄上清，沉淀加入1mL上述KCl緩沖液混勻，4 ℃，14000 r/min，離心20 min，紅色沉淀即為肝微粒體。將其懸浮于 PBS-20 % 甘油緩沖液中，分裝至EP管中，采用BCA法，測(cè)定肝微粒體蛋白含量并于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 色譜條件 色譜柱：Zorbax SB-C18（250mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1% 甲酸水溶液（B），洗脫程序：0～8 min，A為10 %～ 40 %;8～15 min，A為40 %～ 45 %;15～30 min，A為45 %～ 35 %;30～35 min，A為35 %～20 %;35～40 min，A為20 %～ 10 %。流速0.5 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm;柱溫30 ℃;進(jìn)樣量20 μL。

2.4 樣品處理 參考文獻(xiàn)[7]處理樣品，加入10 μg·mL-1地西泮內(nèi)標(biāo)500 μL，渦旋混勻1 min，12000 r/min離心10 min，取上清液200 μL，進(jìn)樣20 μL。

2.5 探針底物與大鼠肝微粒體體外反應(yīng)及HPLC法測(cè)定 孵育體系總體積500 μL，包含15 μL大鼠肝微粒體蛋白（0.5 mg·mL-1），10 μL NADPH再生系統(tǒng)（1 mmol·L -1NADP+，10 mmol· L-1G-6-P，1 U·mL-1G-6-PDH），472.5 μL PBS緩沖液（pH=7.4），2.5 μL混合探針底物（15.04 μmol·L-1咖啡因、7.81 μmol·L-1美托洛爾、4.98 μmol·L-1奧美拉唑和6 μmol·L-1咪達(dá)唑侖）。在37 ℃水浴中預(yù)孵育5 min， NADHP再生系統(tǒng)啟動(dòng)反應(yīng)，37 ℃反應(yīng)30 min后取出，按“2.4”項(xiàng)下處理樣品，“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，每組平行做3份。

2.6 方法學(xué)考察 按照美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局方法學(xué)評(píng)價(jià)指導(dǎo)方針[8]，進(jìn)行專屬性、線性關(guān)系、回收率、精密度和穩(wěn)定性考察。

2.6.1 專屬性 分別取大鼠空白肝微粒體、空白肝微粒體+內(nèi)標(biāo)溶液、空白肝微粒體+標(biāo)準(zhǔn)品+內(nèi)標(biāo)，按“2.4”項(xiàng)下處理樣品，“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，考察色譜峰分離與干擾情況。

2.6.2 線性關(guān)系 將2.00 mg·mL-1的咖啡因、美托洛爾、咪達(dá)唑侖儲(chǔ)備液，1.00 mg·mL-1的奧美拉唑儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋成不同濃度的混合探針溶液，終濃度分別為咖啡因 1.91、3.75 、7.52 、15.04 、30.02 、37.59 、45.16 μmol·L-1，奧美拉唑0.64、1.24 、2.49 、4.98 、9.99 、12.56 、15.14 μmol·L-1，美托洛爾0.98 、1.96 、3.91 、7.81 、15.62 、19.52 、23.42 μmol·L-1，咪達(dá)唑侖0.74 、1.51 、3.02、6.00 、12.00 、16.49、18.00 μmol·L-1。將25 μL大鼠肝微粒體加入472.5 μL PBS緩沖液中，60 ℃加熱滅活，放置至室溫后分加入2.5 μL混合底物孵育體系，按“2.5”下孵育。每個(gè)樣本平行制備3份。

2.6.3 精密度 取空白肝微粒體25 μL，加入472.5 μL PBS緩沖液，再分別加入2.5 μL 低、中、高濃度的混合探針標(biāo)準(zhǔn)液（咖啡因3.75、15.04、37.59μmol·L-1，美托洛爾1.96、7.81、19.52μmol·L-1，奧美拉唑1.24、4.98、12.56μmol·L-1，咪達(dá)唑侖1.51、6.00、1.49μmol·L-1），其余按“2.4”項(xiàng)下方法操作后，于同日內(nèi)進(jìn)樣3次測(cè)定，求得日內(nèi)RSD;連續(xù)3日測(cè)定3次，求得日間RSD。

2.6.4 回收率 取空白肝微粒體 25 μL，加入472.5 μL PBS緩沖液，再分別加入2.5 μL按“2.6.3”項(xiàng)下方法制備的低、中、高濃度的混合探針標(biāo)準(zhǔn)液，其余按“2.4”項(xiàng)下處理進(jìn)樣后，記錄峰面積A1，再選取對(duì)應(yīng)濃度的對(duì)照品溶液進(jìn)樣，獲得峰面積 A2，計(jì)算絕對(duì)回收率（絕對(duì)回收率 = A1/A2 × 100 %）。用以求得的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，計(jì)算出藥物濃度，與理論濃度相比較，計(jì)算相對(duì)回收率（相對(duì)濃度= 實(shí)測(cè)濃度/理論濃度 × 100 %）。

2.6.5 穩(wěn)定性 取空白肝微粒體 25 μL，加入472.5 μL PBS緩沖液后，再分別加入“2.6.3”項(xiàng)下低、中、高濃度樣品2.5 μL，每個(gè)質(zhì)量濃度6份樣品分析，分別于室溫放置6 h，-80 ℃冷凍放置2周，反復(fù)凍融3次條件下，按“2.4”項(xiàng)下處理樣品并測(cè)定。

2.7 陽(yáng)性抑制劑抑制作用的研究 置冰浴，向已加入15 μL 大鼠肝微粒體（0.5 mg·mL-1）的PBS液中分別加入2.5 μL不同濃度的陽(yáng)性抑制劑（α-萘黃銅，奎尼丁，氟康唑，酮康唑終濃度分別為：10、50、50、10 μmol·L-1）和2.5 μL混合探針溶液，以下操作同“2.4”項(xiàng)，空白組使用等體積甲醇溶液，每份平行做3份。

2.8 三種抗心血管病中成藥對(duì)大鼠肝微粒體的抑制作用 以各待測(cè)中成藥置換孵育體系中的陽(yáng)性抑制劑，藥物組系列濃度為6.25、12.5、25、50、100、200 μg·mL-1，按“2.4”項(xiàng)下操作進(jìn)行孵育。由不同濃度反應(yīng)組底物剩余量來(lái)計(jì)算相應(yīng)酶抑制率：酶活性=（總底物濃度-剩余底物濃度）/ 總底物濃度。采用GraphPad Prism 5.0軟件線性回歸，將酶相對(duì)活性對(duì)待測(cè)藥物濃度對(duì)數(shù)值作圖，并計(jì)算各藥的半數(shù)抑制濃度（ IC50）值。

2.9 數(shù)據(jù)處理 使用SPSS 22.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以（x±s）描述，待測(cè)藥物組和空白組采用單因素方差分析，當(dāng)P<0.05可認(rèn)為兩組之間有顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 探針底物與大鼠肝微粒體體外反應(yīng)及HPLC測(cè)定

3.1.1 專屬性 各探針底物與大鼠肝微粒體共孵育30 min后的色譜圖如圖1（A）～（C）所示?？Х纫?、美托洛爾、奧美拉唑、咪達(dá)唑侖和內(nèi)標(biāo)的相對(duì)保留時(shí)間分別為：8.006、9.205、10.216、11.678和19.120 min。結(jié)果表明在選定的色譜條件下，孵育體系中的其他物質(zhì)不干擾混合探針底物及內(nèi)標(biāo)的測(cè)定，各探針底物峰與內(nèi)標(biāo)物峰均良好分離，說(shuō)明該方法具有良好的專屬性。

3.1.2 線性關(guān)系 以探針底物濃度為橫坐標(biāo)，待測(cè)物的峰面積和內(nèi)標(biāo)峰面積比值為縱坐標(biāo)，采用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行線性回歸，見(jiàn)表1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在濃度范圍內(nèi)，各探針?biāo)幬锏幕貧w方程線性關(guān)系良好，表明該方法靈敏度好，在線性范圍內(nèi)測(cè)定樣品時(shí)準(zhǔn)確可靠。

3.1.3 精密度 4 種探針底物在肝微粒體中的日內(nèi)、日間精密度均RSD<10 %，精密度良好，結(jié)果見(jiàn)表2。

3.1.4 回收率 相對(duì)回收率范圍為（88.18±0.32）% ～（108.92±0.34）%，絕對(duì)回收率范圍為（75.85±6.09）% ～（93.37±1.40）%，符合檢測(cè)要求，結(jié)果見(jiàn)表2。

3.1.5 穩(wěn)定性 肝微粒體樣品高、中、低濃度分別于室溫放置6h、-80℃反復(fù)凍融3次，長(zhǎng)期凍存14 d，各探針?lè)€(wěn)定性良好，符合生物樣品分析要求。

3.2 陽(yáng)性抑制劑對(duì)CYPs的抑制作用 利用陽(yáng)性抑制劑抑制 CYPs 亞酶的活性，見(jiàn)表4。加入陽(yáng)性抑制劑后，各亞酶的代謝明顯減慢，表明 α-萘黃銅，奎尼丁，氟康唑，酮康唑分別對(duì)CYP1A2、P2D1、P2C11、P3A1活性有明顯抑制作用，與對(duì)照組比較差異有顯著性（P<0.05），進(jìn)一步驗(yàn)證檢測(cè)試驗(yàn)方法的合理性。將陽(yáng)性抑制劑的 IC50值與文獻(xiàn)比較[9]，符合文獻(xiàn)范圍，所用實(shí)驗(yàn)體系滿足 CYPs 抑制活性評(píng)價(jià)的要求。

3.3 三種抗心血管疾病中成藥對(duì)CYPs的抑制作用 不同濃度藥物組對(duì)4種CYPs酶的抑制曲線如圖2 ～ 4所示。由圖可見(jiàn)，隨著各藥物濃度的增高，各亞酶活性呈明顯降低趨勢(shì)。由抑制曲線計(jì)算得到的 IC50值見(jiàn)表2。據(jù)通用CYPs酶抑制強(qiáng)度分級(jí)規(guī)則[10]：IC50<1 μmol·L-1為強(qiáng)抑制劑;1 μmol·L-1 10 μmol·L-1為弱抑制劑。因此，參松養(yǎng)心膠囊對(duì)CYP1A2、P3A1和芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)CYP2C11、P3A1 IC50值分別為：1.896、1.357 、1.513、6.669 μmol·L-1，均為中等抑制劑，;通脈養(yǎng)心丸對(duì)CYP2D1 IC50值為0.566 μmol·L-1，是其強(qiáng)抑制劑。參松養(yǎng)心膠囊對(duì)CYP2D1、P2C11，芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)CYP2D1、P1A2和通脈養(yǎng)心丸對(duì)CYP2C11、P3A1、P1A2的IC50值均大于10 μmol·L-1，抑制CYPs 的可能性較小，不易產(chǎn)生代謝性藥物相互作用。

4 討論

CYPs作為一類重要的藥物代謝酶，參與75%的臨床藥物代謝，中藥制劑在體內(nèi)代謝酶作用下發(fā)生代謝轉(zhuǎn)化的同時(shí)對(duì)酶也會(huì)產(chǎn)生抑制或誘導(dǎo)作用，產(chǎn)生代謝性相互作用[10]。對(duì) CYPs的抑制作用所致的藥物相互作用（約占全部相互作用的70%）的臨床意義遠(yuǎn)大于誘導(dǎo)作用（23%）[11]?！癈ocktail” 探針?biāo)幬锓ㄖ敢环N為獲取多個(gè)代謝酶的表型信息，首先同時(shí)給予多種相對(duì)低劑量的探針?biāo)幬?，然后測(cè)定生物樣本中各探針?biāo)幬锏拇x率或者其他代謝分型指標(biāo)的方法，具有快速、高效、重現(xiàn)性好等優(yōu)勢(shì)[12]。筆者通過(guò)“Cocktail”探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)參松養(yǎng)心膠囊、芪藶強(qiáng)心膠囊和通脈養(yǎng)心丸對(duì)肝微粒體中CYPs各亞酶活性的影響，從而預(yù)測(cè)藥物相互作用，提供臨床用藥參考。根據(jù)文獻(xiàn)[10]，可知參松養(yǎng)心膠囊對(duì)CYP1A2、P3A1和芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)CYP2C11、P3A1均有中度抑制作用;通脈養(yǎng)心丸對(duì)CYP2D1有強(qiáng)抑制作用。藥物對(duì)CYP1A2、CYP2C11和CYP3A1酶的抑制作用，將使酶活性相應(yīng)降低，可能會(huì)導(dǎo)致經(jīng)上述亞酶代謝的其他藥物代謝減慢，血藥濃度升高或體內(nèi)藥物蓄積，作用時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)，臨床上應(yīng)謹(jǐn)慎合用。中藥作用是由多種有效成分的有機(jī)結(jié)合，與多種疾病相關(guān)靶點(diǎn)綜合影響而產(chǎn)生的兩個(gè)復(fù)雜體系之間的相互作用[13]。有文獻(xiàn)[14-15]報(bào)道，參松養(yǎng)心膠囊的主組分酸棗仁的水提液，山茱萸、桑寄生等的主要活性成分沒(méi)食子酸能抑制CYP3A活性。芪藶強(qiáng)心膠囊組分黃芪的主要活性成分胡椒苷II對(duì)人CYP2C16活性有抑制作用，且組分中的人參的主要藥效物質(zhì)人參總皂苷能夠下調(diào)人CYP3A4酶活性，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間[16-17]。參松養(yǎng)心膠囊和芪藶強(qiáng)心膠囊均含有丹參成分， Wang等[18]研究表明丹參醇提物顯著抑制人及大鼠肝微粒CYP1A2活性，還抑制人肝微粒CYP3A4和大鼠肝微粒CYP3A1酶活性。通脈養(yǎng)心丸中甘草的有效成分甘草酸（甘草甜素）、甘草次酸、甘草苷、甘草素等均能抑制CYP2D1的活性[19-20]。這些研究結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果不矛盾。因此，參松養(yǎng)心膠囊、芪藶強(qiáng)心膠囊和通脈養(yǎng)心丸對(duì)CYPs亞酶的抑制作用可能與其主組分的活性成分有關(guān)。

本次研究，三藥直接作用于大鼠肝微粒體，與傳統(tǒng)給藥途徑差異較大，且中藥成分復(fù)雜，口服給藥吸收后對(duì)肝微粒體CYPs亞酶活性的影響與體外實(shí)驗(yàn)差異較大，體外研究或動(dòng)物研究不能完全代替人的體內(nèi)研究，因此三藥是否在臨床應(yīng)用時(shí)產(chǎn)生抑制作用還需進(jìn)行人肝微粒體或人體合并用藥進(jìn)一步驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)

[1]葛均波，徐永健，王辰.內(nèi)科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2019：170-226.

[2]姚錦英，呂燊，王如偉.緩控釋及靶向給藥新劑型在心血管類中藥中的應(yīng)用[J].中草藥，2014，45（12）：1809-1812.

[3]董宇，王階，楊慶，等. CYP450酶與中藥代謝相互作用關(guān)系研究概況[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2011，18（1）：100-103.

[4]潘潔，陸苑，孫佳，等.艾迪注射液對(duì)體外人和大鼠肝微粒體中CYP450酶的抑制作用[J]. 中成藥，2016，38（11）：2332-2337.

[5]皮榮標(biāo). 藥物篩選和成藥性評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)與實(shí)踐[M]. 廣州：中山大學(xué)出版社，2019：60-61.

[6]GUENGERICH F P. Cytochrome P450s and other enzymes in drug metabolism and toxicity [J]. Aaps Journal，2006，8（1）： E101-E111.

[7]陳偉. “Cocktail”探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)新藤黃酸對(duì)大鼠肝微粒體細(xì)胞色素P450不同亞型酶體內(nèi)外代謝活性的影響[D].合肥：安徽中醫(yī)藥大學(xué)，2016.

[8]FDA，Center for Drug Evaluation and Research，Center for Biological Evaluation and Research，et al.Guidance for industry：in vivo drug metabolism/drug interaction studies study design data analysis and recommendations for dosing and labeling[M]. Rockville：Federal Register，1999.

[9]YAO M，ZHU M，SINZ M W，et al. Development and full validation of six inhibition assays for five major cytochrome P450 enzymes in human liver microsomes using an automated 96-well microplate incubation format and LC-MS/MS analysis[J]. J Pharm Biomed Anal. 2007，44（1）：211-223.

[10]范宰文，馬思琪，徐愛(ài)軍，等. 3種中藥成分對(duì)CYP2C9酶的影響[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2019，38（4）：486-490.

[11]賈元威，沈杰，謝海棠，等.天麻素對(duì)人肝微粒體細(xì)胞色素P450酶的抑制作用[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2016，21（2）：134-138.

[12]GIRI P，PATEL H，SRINIVAS N R. Use of Cocktail Probe Drugs for Indexing Cytochrome P450 Enzymes in Clinical Pharmacology Studies-Review of Case Studies[J].Drug Metab Lett. 2019，13（1）：3-18.

[13]馬增春，王宇光，譚洪玲，等.中藥與肝臟藥物代謝酶之間的相互作用[J]. 世界華人消化雜志，2016，24（7）：994-1001.

[14]武佰玲，劉萍，高月，等. 酸棗仁、遠(yuǎn)志和桔梗水提液對(duì)大鼠肝CYP450酶活性及mRNA表達(dá)的調(diào)控作用[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（18）：235-239.

[15]石亮，張遠(yuǎn)冬，王二豪，等.沒(méi)食子酸及其氧化產(chǎn)物對(duì)大鼠肝微粒體CYP3A的抑制效應(yīng)[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，36（2）：130-134.

[16]XIAO Y J，JIANG Z Z，YAO J C，et al. Investigation of Picroside IIs impacts on the P450 activities using a cocktail method[J]. Chin J Nat Med，2008，6（4）：292-297.

[17]易劍峰，吳波，劉蒼龍，等.人參總皂苷對(duì) γ 射線照射后大鼠肝P450酶調(diào)節(jié)作用研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2015，40（20）：4037-4043.

[18]WANG X，CHEUNG C M，NAYNE Y W，et al. Major tanshinones of Danshen （ Salvia miltiorrhiza ） exhibit different modes of inhibition on human CYP1A2，CYP2C9，CYP2E1 and CYP3A4 activities in vitro[J]. Phytomedicine，2010，17（11）：868-75.

[19]劉麗，肖娟，彭志紅，等.甘草次酸在人細(xì)胞色素CYP450中體外代謝研究[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011，46（0-1）：81-87.

[20]CHEN H，ZHANG X，F(xiàn)ENG Y，et al. Bioactive components of Glycyrrhiza uralensis mediate drug functions and properties through regulation of CYP450 enzymes[J]. Mol Med Rep，2014，10 （3） ：1355-1362.

（收稿日期：2021-01-15 編輯：劉 斌）

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81360511）。

作者簡(jiǎn)介：黃茹潤(rùn)（1995-），女，彝族，碩士研究生，研究方向?yàn)榕R床藥學(xué)。E-mail：2041151163@qq.com

通信作者：賴泳（1973-），女，漢族，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)樗幚韺W(xué)、中藥學(xué)。E-mail：laiyong8879@163.com