趙 晨， 孫彥君*， 陳豪杰， 韓瑞杰， 馮衛(wèi)生*

(1.河南中醫(yī)藥大學(xué)呼吸疾病中醫(yī)藥防治省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，河南 鄭州 450046；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院, 河南 鄭州 450046；3.河南省中藥特色炮制技術(shù)工程研究中心，河南 鄭州 450046)

小葉蓮來源于小檗科桃兒七屬植物桃兒七Sinopodophyllumhexandrum(Royle) Ying的干燥成熟的果實，收載于2015年版《中國藥典》，性味平、甘，有小毒，作為傳統(tǒng)藏藥，具有活血調(diào)經(jīng)的功效，常用于閉經(jīng)、痛經(jīng)、血瘀、難產(chǎn)、胎死腹中、胎盤不下等婦科病癥[1]。前期研究表明，小葉蓮中主要含有異戊烯基化黃酮類、芳基萘內(nèi)酯型木脂素類、半日花烷型二萜類，其中以異戊烯基化黃酮類和芳基萘內(nèi)酯型木脂素類為主[2-6]，而以鬼臼毒素為代表的芳基萘內(nèi)酯型木脂素類化合物具有顯著的抗腫瘤作用，鬼臼毒素結(jié)構(gòu)修飾的產(chǎn)物依托泊苷和替尼泊苷，對乳腺癌、睪丸癌、小細(xì)胞肺癌、淋巴癌、兒童白血病等多種癌癥均有良好的治療效果[7]。小葉蓮乙醇提取物對裸鼠移植性乳腺癌、小鼠移植性肝癌和艾氏腹水癌均具有較強(qiáng)的抑制作用[8]，但截至目前從中僅分離得到4個芳基萘內(nèi)酯型木脂素類化合物。為了進(jìn)一步揭示小葉蓮藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實驗對其木脂素類成分進(jìn)行研究，從中分離得到14個化合物，其中化合物1～2、5、11、14為首次從該屬植物中發(fā)現(xiàn)，3～4、8、12～13為首次從小葉蓮中發(fā)現(xiàn)，并首次對1的核磁數(shù)據(jù)進(jìn)行了歸屬。

1 材料

microTOF-Q 高分辨質(zhì)譜儀、ARX-500核磁共振波譜儀 (瑞士Bruker公司)；制備型高效液相色譜儀(北京賽譜銳思科技有限公司)；半制備型C18色譜柱(250 mm×10 mm, 5 μm, 日本YMC公司)；薄層色譜硅膠GF254、柱色譜硅膠 (青島海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20凝膠色譜填料(美國Amersham Blosclences公司)；ODS色譜填料 (100 μm，日本YMC公司)；AB-8大孔吸附樹脂(鄭州勤實科技有限公司)。所用試劑均為分析純(天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)。小葉蓮采集于云南省德欽縣升平鎮(zhèn)，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)教研室董誠明教授鑒定為桃兒七屬植物桃兒七Sinopodophyllumhexandrum(Royle)Ying干燥成熟果實，憑證標(biāo)本(SE 20130929)保存于河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院標(biāo)本館。

2 提取與分離

9 kg小葉蓮粉末加20 L 95%乙醇回流提取3次，每次1 h，合并提取液，減壓回收乙醇后加水混懸，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，得到各個萃取部位的浸膏。二氯甲烷萃取部位經(jīng)硅膠柱分離，以石油醚-丙酮(100∶0、100∶5、100∶7、100∶30、100∶50、100∶70、 100∶100、0∶100)梯度洗脫，根據(jù)薄層色譜檢識結(jié)果，得到11個組分A1～A11。A6組分利用ODS柱，以20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%及純甲醇洗脫，每一梯度用500 mL溶劑，每100 mL為1個流分，共收集40個，即A6-1～A6-40，收集A6-18得化合物6(20 mg)，收集A6-22流分經(jīng)重結(jié)晶得化合物2(5 mg)，收集A6-28流分經(jīng)重結(jié)晶得化合物7(30 mg)，收集A6-31流分經(jīng)重結(jié)晶得化合物9(200 mg)。A7組分利用Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脫，得到亞組分A7-1～A7-5，A7-3經(jīng)制備型HPLC分離，經(jīng)51%甲醇洗脫，得化合物1(6 mg)、3(15 mg)、10(11 mg)、11(8 mg)、14(5 mg)；亞組分A7-2經(jīng)制備型HPLC，50%甲醇洗脫，得化合物8(26 mg)。A10組分利用Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脫，每20 mL為1個流分，共收集30個，即A10-1～A10-30，收集A10-7流分經(jīng)重結(jié)晶得化合物12(14 mg)，收集A10-11流分經(jīng)重結(jié)晶得化合物13(18 mg)。A11組分利用AB-8大孔吸附樹脂柱，經(jīng)20%、30%、50%、70%乙醇洗脫，每一梯度用300 mL溶劑，每50 mL為1個流分，共收集24個，即A11-1～A11-24，收集A11-14經(jīng)重結(jié)晶得化合物4(11 mg)，收集A11-17經(jīng)重結(jié)晶得化合物5(17 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

圖1 化合物1的主要NOE和HMBC相關(guān)Fig.1 Key NOE and HMBC correlations of compound 1

化合物12：無色針晶(丙酮)。mp 285～287 ℃。ESI-MSm/z: 411.1[M+H]+,分子式C22H18O8。在UV 254和365 nm下呈藍(lán)色熒光。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.61 (1H, s, H-5), 6.85 (1H, s, H-8), 6.16 (2H, s, -OCH2O-), 5.36 (2H, s, H-11), 6.52 (2H, s, H-2′, 6′), 3.72 (6H, s, 3′, 5′-OCH3), 3.76 (6H, s, 4′-OCH3), 10.40 (1H, s, 4-OH)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 119.3 (C-1), 122.5 (C-2), 130.4 (C-3), 145.9 (C-4), 108.0 (×2) (C-5,C-8), 148.9 (C-6), 148.5 (C-7), 131.0 (C-9), 131.1 (C-10), 66.8 (C-11), 169.6 (C-12), 124.8 (C-1′), 102.7 (×2) (C-2′, 6′), 152.6 (×2) (C-3′, 5′), 136.9 (C-4′), 56.3 (×2) (3′,5′-OCH3), 60.3 (4′-OCH3), 98.3 (-OCH2O-)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]基本一致，故鑒定為去氫鬼臼毒素。

化合物13：無色針晶(丙酮)。mp 286～288 ℃。ESI-MSm/z: 397.1[M+H]+,分子式C21H16O8。在UV 254和365 nm下呈藍(lán)色熒光。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.62 (1H, s, H-5), 6.91 (1H, s, H-8), 6.17 (2H, s, -OCH2O-), 5.36 (2H, s, H-11), 6.49 (2H, s, H-2′, 6′), 3.73 (6H, s, 3′,5′-OCH3), 10.35 (1H, brs, 4-OH), 8.47 (1H, brs, 4′-OH)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 122.6 (C-1), 124.9 (C-2), 119.2 (C-3), 145.5(C-4), 108.2(×2)(C-5，C-8), 148.9 (C-6), 148.3 (C-7), 131.0 (C-9), 131.4 (C-10), 66.7 (C-11), 169.6 (C-12), 130.3 (C-1′), 102.9(×2)(C-2′, C-6′), 147.7 (C-3′, 5′), 135.2 (C-4′), 56.2 (×2) (3′,5′-OCH3), 98.2 (-OCH2O-)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]基本一致，故鑒定為4′-去甲-去氫鬼臼毒素。

4 討論

小葉蓮作為藏族習(xí)用藥材，用于治療各種婦科疾病。本實驗對小葉蓮木脂素類化學(xué)成分進(jìn)行提取分離與結(jié)構(gòu)鑒定，共分離得到14個化合物，13個為芳基萘型木脂素類、1個為四氫呋喃型木脂素類，為進(jìn)一步研究小葉蓮的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、制定其藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、擴(kuò)大藥用價值提供理論依據(jù)。