劉 兵，馬珍馳，宋秀梅，張其暉，侯宗良

（棗莊市畜牧漁業(yè)事業(yè)發(fā)展中心，山東棗莊 277800）

禽白血?。╝vian leukosis，AL）是由禽白血病病毒（avian leukosis virus，ALV）引起的，通過垂直和水平方式傳播的一種免疫抑制性疾病[1]，主要表現(xiàn)為腫瘤、血管瘤以及產(chǎn)蛋下降、免疫或生長抑制等癥狀[2]。ALV 屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科α-反轉(zhuǎn)錄病毒屬，共有10 個亞群（A—J），其中ALV-J 致病性和感染性最強(qiáng)。1988 年英國首次分離到J 亞群ALV（ALV-J）。1999 年我國在江蘇和內(nèi)蒙古首次分離到ALV-J[3-4]。ALV-J 感染宿主范圍在不斷擴(kuò)大，最初主要感染肉雞，后感染蛋雞，目前在地方雞品種中也有存在[5-6]。本研究于2019—2020 年采集棗莊市39 家雞場的1 174 份雞血清樣品，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）進(jìn)行ALV-J 血清抗體檢測，以便了解該地區(qū)雞場中的ALV-J 感染情況，從而為凈化ALV-J 提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

1.1.1 抽樣框 棗莊市下轄5 區(qū)1 市，存欄2 000只以上的規(guī)模商品蛋雞場共有320 家，共存欄約310 萬只。

1.1.2 抽樣方法 采用多階段抽樣方法。第一層，以估計流行率方式計算場戶抽取數(shù)量。按照預(yù)期流行率（p）2%、置信水平95%（z=1.96）、可接受誤差（e）7%，在320 個場戶中，依據(jù)公式（1）計算出抽樣場群數(shù)為15 個（每年選擇的場戶不重復(fù)）。第二層，以估計流行率方式進(jìn)行計算個體抽樣數(shù)量。按照流行率（p）8%、置信水平95%（z=1.96）、可接受誤差（e）10%，依據(jù)公式（1）計算出每個場群需要采樣28 份。樣品的采集、運(yùn)輸、血清分離、保存，均按照規(guī)范操作。2019—2020 年共采集6個轄區(qū)內(nèi)39家養(yǎng)雞場的1 174血清樣品（表1）。

表1 2019—2020 年雞場血清采樣情況

1.2 主要儀器與試劑

酶標(biāo)儀，型號Multiskan MK3，美國熱電公司產(chǎn)品；ALV-J 抗體檢測試劑盒，IDEXX 公司產(chǎn)品，批號為AR411、KR867、DS851。

1.3 檢測與數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求的環(huán)境和條件進(jìn)行；對檢測結(jié)果和有關(guān)數(shù)據(jù)，使用Excel 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 場群陽性 本場群所有樣品中，只要檢出1 份陽性，即判定本場為陽性場。

1.4.2 個體陽性 樣品檢測結(jié)果為陽性，即判定為個體陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

2019—2020 年在全市 39 家雞場1 174 份血清樣品中，檢出陽性樣品200 份，個體陽性率為17.0%（95%CI：15.2%～19.6%）；檢出陽性場27 家，群體陽性率為69.2%（95%CI：56.2%～85.1%）。

2.2 不同區(qū)域情況

不同區(qū)域統(tǒng)計結(jié)果（表2）顯示：臺兒莊區(qū)個體陽性率最高（23.4%），嶧城區(qū)最低（8.8%），經(jīng)卡方檢驗(yàn)，χ2=27.48、P＜0.01，區(qū)域間個體陽性率差異顯著；山亭區(qū)群體陽性率最高（83.3%），滕州市和嶧城區(qū)最低（均為60.0%），經(jīng)fishers 確切檢驗(yàn)，P＞0.05，區(qū)域間群體陽性率差異不顯著。

表2 2019—2020 年棗莊市ALV-J 抗體不同區(qū)域檢測統(tǒng)計結(jié)果

2.3 不同年份情況

不同年份統(tǒng)計結(jié)果（表3）顯示：2019年個體陽性率為12.4%（95%CI：10.0%～15.3%），2020年為21.8%（95%CI：18.9%～25.7%），經(jīng)卡方檢驗(yàn)，χ2=18.51、P＜0.01，不同年份間個體陽性率差異顯著，有加重趨勢；2019 年群體陽性率為65.0%（95%CI：45.4%～87.3%）、2020年為73.7%（95%CI：55.5%～94.9%），經(jīng)fishers 確切檢驗(yàn)，P=0.73，不同年份間群體陽性率差異不顯著。

表3 2019—2020 年棗莊市ALV-J 抗體不同年份檢測統(tǒng)計結(jié)果

3 討論

目前，從雞身上分離到的ALV 亞型有A—E和J 亞群，其中ALV-J 對不同品種的雞均具有感染性和致病性，且目前尚無有效的預(yù)防性疫苗和治療性藥物[1，5]，因此需要通過檢測血清抗體淘汰ALV-J 感染雞群來實(shí)現(xiàn)凈化目標(biāo)。

2020 年邢林林等[7]對山東省7 個種雞場進(jìn)行ALV-J 抗體檢測，發(fā)現(xiàn)個體陽性率為19.80%，群體陽性率為100%；2017 年鮑偉華等[8]對浙江寧波市雞場進(jìn)行ALV-J 抗體檢測，發(fā)現(xiàn)個體陽性為21.5%，群體陽性率為86.7%；馬亞珍等[9]2017—2019 年在新疆定點(diǎn)調(diào)查3 個縣，均檢測出ALV-J陽性抗體，個體抗體陽性率為26%；王倩等[6]對安徽省部分禽場進(jìn)行ALV-J 抗體檢測，發(fā)現(xiàn)2017—2019年個體陽性率分別為22.51%、15.12%、26.11%，群體陽性率分別為75.00%、42.86%、40.00%，在檢測的8 個市（縣）中有7 個檢出陽性。本研究檢測結(jié)果顯示：2019—2020 年棗莊市雞場的ALV-J個體陽性率為17.0%，群體陽性率為69.2%，與上述檢測結(jié)果基本相似。上述檢測結(jié)果表明，全國范圍內(nèi)的ALV-J 陽性檢出率較高，污染面較廣，需要加強(qiáng)開展ALV-J 凈化工作。

調(diào)查發(fā)現(xiàn)，棗莊市雛雞主要從外地調(diào)入，轄區(qū)內(nèi)僅有1 家父母代種雞場，對AL 防控很難從源頭上控制。AL 為垂直性傳播疫病，在發(fā)達(dá)國家的大型種雞公司多基于切斷垂直傳播途徑逐步實(shí)現(xiàn)了凈化[2].。我國出臺的《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020 年）》將AL 列為優(yōu)先防治和重點(diǎn)凈化的疫病之一。建議上游種禽企業(yè)加強(qiáng)AL防控，從源頭上凈化該病，提供優(yōu)質(zhì)雛雞。在控制水平傳播上，地方雞場應(yīng)該從凈化該病的種禽企業(yè)引進(jìn)雛雞，同時加強(qiáng)雞場的綜合生物安全防控，有效控制該病的發(fā)生和擴(kuò)散。崔治中[10]指出，外源性ALV 污染的弱毒疫苗是雞群中ALV 傳播的最可能原因之一；秦樂[11]指出，在馬立克疫苗中有多種外源性ALV 污染，因此養(yǎng)雞場應(yīng)購買正規(guī)疫苗生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的疫苗，阻斷因疫苗污染造成該病傳播。

本次調(diào)查在計算樣本量時，預(yù)計流行率均較低，與實(shí)際差異較大，導(dǎo)致檢測結(jié)果存在一定誤差。建議在后續(xù)研究中，提高預(yù)計流行率，從而擴(kuò)大樣本量，以達(dá)到檢測結(jié)果更加真實(shí)的目的。對于上一年度檢測過的場戶，下一年度也應(yīng)該納入檢測范圍，以便進(jìn)行時間上的比較分析。本監(jiān)測未開展相關(guān)問卷調(diào)查，缺少養(yǎng)殖場戶調(diào)入調(diào)出、生物安全、人員管理等方面的數(shù)據(jù)信息，未能全面分析陽性場出現(xiàn)的原因，需要后續(xù)進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

監(jiān)測表明，棗莊市蛋雞場普遍存在ALV-J感染，感染率持續(xù)較高，防控效果不佳。建議加大對該病的監(jiān)測力度，及時淘汰陽性雞，繼續(xù)深入推進(jìn)AL凈化，同時加強(qiáng)引種管理，嚴(yán)把疫苗免疫關(guān)，做好綜合防控。