周鍵超,韋雪飛,羊超菠
(磐安縣食品藥品檢驗檢測中心,浙江磐安 322300)
鐵皮石斛,學名為Dendrobium officinaleKimura et Migo,是蘭科石斛屬草本植物,生于海拔1 600 m的山地半陰濕的巖石上,主要分布于我國安徽、浙江、福建等地區(qū)[1],鐵皮石斛以其莖入藥,屬補益藥中的補陰藥,益胃生津,滋陰清熱。鐵皮石斛成分復雜,包括石斛多糖、生物堿、黃酮、酚類物質(zhì)、石斛其他類結(jié)構(gòu)物質(zhì)及微量元素等[2],為食藥同源中藥材。浙江省磐安縣是“中國藥材之鄉(xiāng)”,全縣有家種和野生中草藥1 219種,“浙八味”中白術(shù)、元胡、玄參、貝母和白芍主產(chǎn)于磐安,俗稱“磐五味”,2016年,鐵皮石斛與三葉青、靈芝、玉竹、天麻被評為新磐五味。作為道地藥材之一,鐵皮石斛在種植、藥用、臨床等研究方法發(fā)揮著重大作用,但對鐵皮石斛原料中有機氯農(nóng)藥多殘留研究有所欠缺。人工栽培、生長環(huán)境等會造成中藥材中農(nóng)藥不同程度的殘留[3],但《中國藥典》2020版中未對鐵皮石斛農(nóng)藥殘留有明確限量指標[4],這不僅影響藥材的用藥安全,也不利于中藥材出口走出國門及助推產(chǎn)業(yè)更好發(fā)展。因此,研究并制定簡單、快速、準確,并可同時定性、定量的農(nóng)藥多殘留檢測方法是保障人們用藥安全、推動中藥材現(xiàn)代化建設迫切需要結(jié)果的問題之一[5]。
抽樣市面銷售鐵皮石斛;氯化鈉(分析純);乙腈(色譜純);正己烷(色譜純);中藥農(nóng)殘專用柱HLB-A(納普分析技術(shù)(蘇州)有限公司);13種有機氯農(nóng)藥標準品,國家標準物質(zhì)研究中心。13種有機氯農(nóng)藥標準品具體見表1。
表1 13種有機氯農(nóng)藥標準品表
賽默飛TRACE1300氣相色譜儀,配有ECD檢測器(賽默飛世爾科技);電子天平AL204/01(梅特勒-托利多公司);多管漩渦混合儀GL-50(杭州金譜科學儀器有限公司);智能氮吹儀MFV-24(廣州得泰儀器科技有限公司);臺式高速離心機ST8(蘇州Thermo);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀Precision(海道爾夫)。
1.3.1 試樣制備與提取
取鐵皮石斛樣品,將其磨碎過80目篩,制成待測樣。取待測樣粉末2.5 g,精密稱量,加入氯化鈉1 g,搖散后加入乙腈25 mL,以2 500 r/s渦旋混勻5 min,4 500 r/min離心5 min,分取上清液于平底燒瓶內(nèi),沉淀再加乙腈25 mL,渦旋5 min,離心5 min,合并兩次上清液,40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)上清液減壓濃縮至3~5 mL,放冷,用乙腈稀釋至10.0 mL,搖勻,即得。
1.3.2 凈化
量取直接提取法制備的供試品溶液3~5 mL,直接通過親水親油平衡材料(HLB SPE)固相萃取柱(200 mg,6 mL),收集全部凈化液,搖勻。吸取1.0 mL搖勻后的凈化液置水浴氮吹儀氮吹至近干,用正己烷定容至1.0 mL,過0.2 μm濾膜過濾進行測定。
1.3.3 標準溶液配制
(1)準確吸取各農(nóng)藥標準品0.1 mL,于10.0 mL容量瓶中,用正己烷定容至刻度,此時溶液濃度為1.0 μg/mL的標準儲備液,4 ℃保存。用鐵皮石斛基質(zhì)提取液稀釋標準儲備液,配制成各濃度的混合標準工作液,4 ℃保存,備用。
(2)準確吸取標準儲備液(1.0 μg/mL)0.10 mL,用正己烷定容至1.0 mL,此時混合標準品溶液濃度為0.10 μg/mL。
(3)分 別 準 確 吸 取 混 合 標 準 品 溶 液(0.10 μg/mL)0.01 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL和0.50 mL,用正己烷定容至1.0 mL,此時混合標準品濃度分別為0.001 μg/mL、0.005 μg/mL、0.010 μg/mL、0.020 μg/mL 和 0.050 μg/mL。
1.3.4 色譜條件
色譜柱:SPB-530 m×0.25 mm×0.25 μm;進樣口溫度:240 ℃;升溫程序:90 ℃保持1 min,以10 ℃/min的速率升至180 ℃并保持5 min,以4 ℃·min-1的速率升至280 ℃并保持10 min;檢測器溫度:300 ℃;進樣量:1 μL;載氣及流速:50 mL/min;定量方法:峰面積外標法定量。
13種有機氯農(nóng)藥標準品的色譜圖如圖1所示,具體參數(shù)見表1。
圖1 13種有機氯農(nóng)藥標準品的色譜圖
表1 13種有機氯農(nóng)藥標準品的色譜表
在對鐵皮石斛粉末進行提取過程中,觀察到加入水浸潤粉末后再加乙腈,會因為鐵皮石斛糖分多而發(fā)生黏連情況,導致最后回收率過低;而不加水直接乙腈提取,則沒有黏連情況,添加回收率也較好,因此選擇提取過程中直接加乙腈。
對鐵皮石斛粉末中13種有機氯農(nóng)藥多殘留的檢測中,選擇乙腈進行提取,離心完過濾濃縮凈化后較為清澈,且能充分提取出農(nóng)藥殘留,但選擇乙腈作為定容溶劑時,上機過程中發(fā)現(xiàn)溶劑響應值偏大,在做低濃度添加回收時有較大影響,故選擇凈化后取1 mL水浴氮吹至近干,換正己烷對其進行定容。
用以上混合標準品梯度溶液配制的基質(zhì)標,在1.3.4條件下進行測定,分別以各組分的溶液濃度(X,μg/mL)為橫坐標,峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線。從曲線結(jié)果上看,13種有機氯農(nóng)藥標準品在0.001~0.100 μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2≥0.997 0),滿足定量分析要求,同時,該條件下測定的檢出限定量限均滿足《中華人民共和國藥典》2020版四部有機氯農(nóng)藥殘留要求。13種有機氯農(nóng)藥殘留的線性關(guān)系見表2。
表2 13種農(nóng)藥線性范圍、線性關(guān)系及相關(guān)系數(shù)表
對空白均質(zhì)的鐵皮石斛樣品基質(zhì)分別做低、中、高3種添加回收實驗,每個水平重復6次,均按照1.3方法進行實驗,測定回收率及精密度,實驗結(jié)果表明,該方法下的添加回收率和精密度基本滿足農(nóng)藥殘留分析方法規(guī)定的相關(guān)要求。11種有機氯農(nóng)藥殘留在3個水平下的回收率及相對標準偏差范圍(n=6)見表3、表4。
表3 11種有機氯農(nóng)藥在3個水平下的回收率及相對標準偏差范圍表(n=6)
表4 2種有機氯農(nóng)藥在3個水平下的回收率及相對標準偏差范圍表(n=6)
根據(jù)以上實驗方法,抽取了本地市面銷售的10批鐵皮石斛樣品,對其分別進行上述13種有機氯農(nóng)藥多殘留檢測,結(jié)果見表5。實驗結(jié)果顯示,10批鐵皮石斛樣品中,13種有機氯農(nóng)藥殘留部分未檢出,檢出的均低于《中華人民共和國藥典》2020版四部有機氯農(nóng)藥殘留要求的定量限。
表5 鐵皮石斛樣品有機氯農(nóng)藥殘留檢測結(jié)果表
從檢測結(jié)果看,該實驗方法建立了鐵皮石斛原料中13種有機氯農(nóng)藥多殘留檢測方法:用乙腈對鐵皮石斛粉末進行提取,過親水親油平衡材料(HLB SPE)固相萃取柱凈化,凈化液氮吹至近干用正己烷定容。該方法下得出的各農(nóng)藥回收率均在60.01%~120.31%,RSD在0.846%~9.792%,符合農(nóng)藥殘留檢測標準,同時該方法高速、有效,可推廣并應用于鐵皮石斛原料中的有機氯農(nóng)藥的殘留檢測。