胡俊彪，張春霆，夏建洪，姚勇，陸俊儀

金華市人民醫(yī)院，浙江 金華 321000，1.泌尿外科；2.藥劑科

前列腺癌是男性最常見的生殖系統(tǒng)腫瘤，其發(fā)病率僅低于膀胱癌和腎癌，居男性泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤的第三位[1-2]。前列腺癌異質(zhì)性極高，分為惰性前列腺癌和侵襲性前列腺癌[3-4]。其中，惰性前列腺癌細(xì)胞長期局限于前列腺內(nèi)，進(jìn)展緩慢，可采用保守治療[3]。而侵襲性前列腺癌由于容易發(fā)生轉(zhuǎn)移，進(jìn)展迅速，只能采用睪丸切除術(shù)配合雄激素剝奪治療（androgen deprivation treatment,ADT）[4-5]。然而，侵襲性前列腺癌在接受了手術(shù)去勢或者ADT之后，往往容易發(fā)展為去勢抵抗性前列腺癌（castration resistant prostate cancer,CRPC）[6]。去勢抵抗性的產(chǎn)生，導(dǎo)致CRPC成為病死率極高的難治前列腺癌[6]。了解前列腺癌發(fā)展為CRPC的機(jī)制，尋找潛在治療靶點(diǎn)，是突破CRPC治療瓶頸的有效手段。

紡錘體有絲分裂驅(qū)動蛋白（Kinesin-5,Eg5），在細(xì)胞有絲分裂早期對雙極紡錘體的形成和染色體單體的分離起著至關(guān)重要的作用，與包括胰腺癌、肝癌及前列腺癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[7-9]。研究表明，Eg5是具有ATP酶活性的運(yùn)動特性馬達(dá)分子，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移及DNA損傷應(yīng)答等多種生物學(xué)功 能[7，10]。Eg5在惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)的過度表達(dá)會導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子c-Myc的過度表達(dá)[11]。而c-Myc的過度表達(dá)被證明可導(dǎo)致前列腺癌細(xì)胞產(chǎn)生去勢抵抗性[12]。作為c-Myc的下游靶點(diǎn)，特異性蛋白1（specificity protein 1,SP1）的過表達(dá)被證明和腫瘤進(jìn)展及預(yù)后不良密切相關(guān)[13]。作為重要的轉(zhuǎn)錄因子，SP1被證明與ATP的轉(zhuǎn)錄調(diào)控密切相關(guān)，參與調(diào)節(jié)DNA雙鏈損傷修復(fù)、細(xì)胞周期及腫瘤轉(zhuǎn)移[14-15]。Eg5及其下游靶點(diǎn)c-Myc及SP1的生物學(xué)功能表明，Eg5可能是治療CRPC的有效靶點(diǎn)。然而，Eg5調(diào)節(jié)前列腺癌細(xì)胞產(chǎn)生去勢抵抗性的機(jī)制卻鮮有研究。本研究擬通過沉默Eg5的表達(dá)或者用小分子抑制劑SB-743921抑制Eg5的活性來探究Eg5對CRPC細(xì)胞株DU145生長、凋亡、周期及遷移的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞：人CRPC細(xì)胞株DU145、PC-3及LNCaP均購自上海生命科學(xué)院細(xì)胞資源中心。人前列腺癌細(xì)胞株DU145用含10%胎牛血清、100 mg/L鏈霉素、100 kU/L青霉素的MEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。人前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3和LNCaP用含10%胎牛血清、100 mg/L鏈霉素、100 kU/L青霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。

1.1.2 主要試劑和儀器：Eg5單克隆抗體、c-Myc單克隆抗體、SP1單克隆抗體、CDK1單克隆抗體、E-cadherin單克隆抗體、Vimentin單克隆抗體、β-actin單克隆抗體、鼠二抗及兔二抗均購自美國Cell Signaling Technology公司。Cyclin B1 單克隆抗體、Cyclin A1單克隆抗體、CDC25B單克隆抗體及N-cadherin單克隆抗體均購自美國Abcam公司。MTT試劑盒、Annexin V-FITC和典化丙啶（PI）凋亡檢測試劑盒均購自上海碧云天生物技術(shù)公司。MEM培養(yǎng)基、胰酶及結(jié)晶紫染色液均購自南京凱基生物技術(shù)股份有限公司。RIPA細(xì)胞裂解緩沖液購自南京三翊生物科技有限公司。Eg5小分子抑制劑SB-743921購自美國MedChemExpress公司。RNAiso Plus購自日本Takara-Bio公司。反轉(zhuǎn)錄試劑盒及q-PCR試劑盒均購自南京諾唯贊生物科技有限公司。慢病毒NC shRNA載體及Eg5 shRNA載體購自上海吉凱基因醫(yī)學(xué)科技股份有限公司。Cytation 5酶標(biāo)儀購自美國Biotek公司；MACSQuant流式細(xì)胞儀購自德國美天旎生物技術(shù)公司；EVOS XL Core倒置熒光顯微鏡購自美國Thermo Fisher公司；Gel DocTM凝膠成像系統(tǒng)購自美國Bio-Rad公司；CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱購自美國Thermo Fisher公司；蛋白電泳儀系統(tǒng)購自美國Bio-Rad公司。

1.2 方法

1.2.1 構(gòu)建Eg5 shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株：Eg5在DU145細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)由慢病毒Eg5 shRNA載體干擾實(shí)現(xiàn)。慢病毒NC shRNA及Eg5 shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)DU145細(xì)胞株按照說明書構(gòu)建，通過測定細(xì)胞內(nèi)Eg5 mRNA及蛋白水平來確定基因是否被沉默。

1.2.2 MTT實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)分為對照組、NC shRNA組、Eg5 shRNA組和SB-743921組。其中，NC shRNA組和Eg5 shRNA組是將NC shRNA和Eg5 shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)DU145細(xì)胞以4×104/mL接種于96孔板分別培養(yǎng)24、48、72 h，隨后用MTT法測定各組細(xì)胞生長活力。SB-743921對3種前列腺癌細(xì)胞株的生長抑制作用同樣用MTT法測定。用0～24 nmol/L的SB-743921分別處理3種癌細(xì)胞72 h后，測定SB-743921對各細(xì)胞的IC50值。待確定IC50值后，設(shè)置SB-743921組，將對數(shù)生長期的人CRPC細(xì)胞株DU145、PC-3及LNCaP以4×104/mL鋪板至96孔板，待細(xì)胞貼壁后，分別用濃度為2.0、4.0、8.0 nmol/L的Eg5 抑制劑SB-743921分別處理細(xì)胞24、48、72 h，探索不同濃度SB-743921對細(xì)胞生長活力的影響。隨后，在每孔加入MTT繼續(xù)培養(yǎng)4 h，吸除上清液，每孔加入150 μL DMSO，震蕩30 s之后，用酶標(biāo)儀測定570 nm處的吸光度值。細(xì)胞生長活力（%）=實(shí)驗(yàn)組吸光度值/空白對照組吸光度值×100%。

1.2.3 單克隆形成實(shí)驗(yàn)：NC shRNA組和Eg5 shRNA組是將NC shRNA及Eg5 shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)DU145細(xì)胞以500個/孔接種在24孔板，用含有8%胎牛血清的MEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞14 d。SB-743921組是將處于對數(shù)生長期的DU145細(xì)胞以500個/孔接種在24孔板，待細(xì)胞貼壁之后，用SB-743921處理細(xì)胞14 d，由于實(shí)驗(yàn)細(xì)胞密度低，處理時(shí)間長，SB-743921的濃度選用2.0 nmol/L。各組細(xì)胞每3 d換一次液，待培養(yǎng)細(xì)胞14 d后，移除培養(yǎng)基，用PBS清洗兩遍，用預(yù)冷的甲醇固定10 min，隨后用0.1%（g/mL）結(jié)晶紫染色10 min，PBS清洗至背景干凈，拍照。

1.2.4 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)：NC shRNA組和Eg5 shRNA組是將NC shRNA及Eg5 shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)DU145細(xì)胞以1× 106/mL接種在6孔板上，培養(yǎng)細(xì)胞48 h。SB-743921組是將處于對數(shù)生長期的DU145細(xì)胞以1×106/mL接種在6孔板上，待細(xì)胞貼壁后分別加入4.0 nmol/L和8.0 nmol/L的SB-743921繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞48 h。待各組細(xì)胞處理結(jié)束后，收集細(xì)胞，PBS清洗細(xì)胞兩遍，用Annexin V-FITC室溫避光染細(xì)胞5 min，然后用PI對細(xì)胞染色5 min。標(biāo)記了Annexin V-FITC和PI的細(xì)胞用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡情況。細(xì)胞凋亡數(shù)據(jù)用FlowJo 7.6軟件處理。

1.2.5 細(xì)胞周期檢測：NC shRNA組和Eg5 shRNA組，將對數(shù)生長期的NC shRNA及Eg5 shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)DU145細(xì)胞以1×106/mL接種在6孔板上，待細(xì)胞貼壁后換液，培養(yǎng)48 h。SB-743921組將處于對數(shù)生長期的DU145細(xì)胞以1×106/mL接種在6孔板上，待細(xì)胞貼壁后分別加入4.0 nmol/L和8.0 nmol/L的SB-743921繼續(xù)培養(yǎng)48 h。收集各組細(xì)胞后，用PBS清洗細(xì)胞兩遍，隨后將各組細(xì)胞固定在70%的乙醇。待細(xì)胞固定之后，用含有RNAase A的PI染液室溫孵育細(xì)胞30 min，多余的PI用PBS清洗除去，上機(jī)測定細(xì)胞周期分布情況。細(xì)胞周期數(shù)據(jù)用ModFit LT3.3軟件分析。

1.2.6 劃痕實(shí)驗(yàn)：NC shRNA組和Eg5 shRNA組，將對數(shù)生長期的NC shRNA及Eg5 shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)DU145細(xì)胞以2×105/mL的濃度接種在6孔板中，待細(xì)胞貼壁后用移液器吸頭制造劃痕，將培養(yǎng)基換為含2%胎牛血清的MEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞48 h。SB-743921處理組，將處于對數(shù)生長期的DU145細(xì)胞按照2×105/mL的濃度接種在6孔板中，制造劃痕，為避免細(xì)胞凋亡對劃痕實(shí)驗(yàn)的干擾，用4.0 nmol/L的SB-743921處理細(xì)胞48 h。用倒置顯微鏡拍照記錄細(xì)胞遷移情況，細(xì)胞遷移率（%）=（1-48 h劃痕寬度/0 h劃痕寬度）×100%。

1.2.7 q-PCR實(shí)驗(yàn)：待各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h之后，收集細(xì)胞，用RNAiso Plus試劑提取總RNA。cDNA由1.0 μmol/L RNA通過R323 反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄得到。q-PCR根據(jù)Q311試劑盒說明書要求進(jìn)行。q-PCR通過real-time q-PCR儀測定各組細(xì)胞內(nèi)Eg5、c-Myc、SP1、CDK1、細(xì)胞周期蛋白Cyclin A1、細(xì)胞周期蛋白Cyclin B1、細(xì)胞分裂周期因子25B（cell division cycle protein 25B,CDC25B）、N-鈣黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）以及E-鈣黏蛋白（E-cadherin）表達(dá)的影響。溶解曲線分析中，以GAPDH基因作為內(nèi)參，使用2-△△Ct方法計(jì)算相對表達(dá)量。各基因引物序列見表1。

表1 q-PCR引物序列

1.2.8 蛋白質(zhì)印跡（Western blot）實(shí)驗(yàn)：待各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h之后，收集細(xì)胞，用RIPA細(xì)胞裂解緩沖液在冰上裂解40 min后，離dSDS-PAGE凝膠電泳分離，并將分離得到的目標(biāo)蛋白通過濕法電轉(zhuǎn)印到PVDF膜上。膜上的蛋白用5%（w/v）脫脂奶粉室溫封閉1 h，之后用一抗4 ℃孵育8 h，二抗室溫孵育1.5 h。最后，PVDF膜上的蛋白用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光液顯色，檢測系統(tǒng)檢測后，用ImageJ處理數(shù)據(jù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以±s表示，兩組比較采用Student’st檢驗(yàn)，多組比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Eg5表達(dá)和活性的抑制對前列腺癌細(xì)胞生長的影響 SB-743921組與對照組比，Eg5基因的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖1。Eg5抑制劑SB-743921處理細(xì)胞72 h之后，可顯著抑制3種細(xì)胞的生長（P＜0.05）。其中，SB-743921抑制DU145細(xì)胞生長的IC50值為（8.73±0.67）nmol/L，見圖2。通過考察不同時(shí)間SB-743921對細(xì)胞的生長抑制作用，發(fā)現(xiàn)SB-743921組和對照組比，可顯著抑制DU145細(xì)胞的生長（P＜0.05），見圖3。2.0 nmol/L的SB-743921組和Eg5 shRNA組與對照組和NC shRNA組比，細(xì)胞克隆數(shù)明顯減少（P＜0.05），見圖4。

圖1 DU145細(xì)胞內(nèi)Eg5表達(dá)情況

圖2 SB-743921抑制前列腺癌細(xì)胞增殖

圖3 不同時(shí)間DU145細(xì)胞生長情況

圖4 單克隆實(shí)驗(yàn)測定DU145細(xì)胞增殖情況

2.2 Eg5表達(dá)和活性的抑制對DU145細(xì)胞凋亡的影響 Annexin V-FITC（+）/PI（+）和Annexin V-FITC（+）/ PI（-）分別表示細(xì)胞處在凋亡中晚期和凋亡早期階段，見圖5。NC shRNA組和對照組相比，組間細(xì)胞凋亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Eg5 shRNA組、4.0 nmol/L和8.0 nmol/L SB-743921組與對照組相比，DU145細(xì)胞凋亡率均顯著增加（P＜0.05），見圖6。

圖5 DU145細(xì)胞凋亡情況

圖6 Eg5調(diào)節(jié)DU145細(xì)胞凋亡

2.3 Eg5 表達(dá)和活性的抑制對細(xì)胞周期的影響 NC shRNA組與對照組比，細(xì)胞周期分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖7。Eg5 shRNA組和SB-743921組與對照組比，細(xì)胞周期在G2/M期的含量均顯著增加（P＜0.05），見圖8。

圖7 DU145細(xì)胞周期分布

圖8 Eg5調(diào)節(jié)DU145細(xì)胞周期分布

2.4 Eg5表達(dá)和活性的抑制對DU145細(xì)胞遷移的影響 NC shRNA組與對照組相比，細(xì)胞遷移率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Eg5 shRNA組和SB-743921組與對照組比，細(xì)胞遷移率均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見圖9。

圖9 Eg5調(diào)節(jié)DU145細(xì)胞遷移

2.5 q-PCR檢測Eg5對c-Myc、SP1、CDK1等基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用 NC shRNA組和對照組比，c-Myc、SP1、CDK1、Cyclin A1、Cyclin B1、CDC25B、N-cadherin、E-cadherin及Vimentin mRNA的相對表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Eg5 shRNA組和SB-743921組與對照組比，細(xì)胞內(nèi)c-Myc、SP1、CDK1 Cyclin A1、Cyclin B1、CDC25B、N-cadherin及Vimentin mRNA的相對表達(dá)量均降低（P＜0.05），E-cadherin的相對表達(dá)量均顯著增加（P＜0.05），見圖10。

圖10 qPCR分析DU145細(xì)胞內(nèi)c-Myc、SP1及相關(guān)基因的表達(dá)量

2.6 Western blot測定Eg5對DU145細(xì)胞內(nèi)c-Myc、SP1、CDK1等蛋白表達(dá)的影響 Western blot檢測發(fā)現(xiàn)NC shRNA組和對照組比，c-Myc、SP1、CDK1、Cyclin A1、Cyclin B1、CDC25B、N-cadherin、E-cadherin及Vimentin蛋白的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Eg5 shRNA組和SB-743921組與對照組比，細(xì)胞內(nèi)c-Myc、SP1、CDK1 Cyclin A1、Cyclin B1、CDC25B、N-cadherin及Vimentin蛋白的表達(dá)量均降低（P＜0.05），E-cadherin蛋白的表達(dá)量顯著增加（P＜0.05），見圖11。

圖11 Western blot檢測DU145細(xì)胞內(nèi)c-Myc、SP1及相關(guān)蛋白的表達(dá)量

3 討論

Eg5生物功能的阻斷，會引起細(xì)胞有絲分裂阻滯及細(xì)胞凋亡，是一個非常重要的藥物靶點(diǎn)[8-10]。與很多參與調(diào)節(jié)有絲分裂的因子不同，Eg5在正常組織細(xì)胞中的表達(dá)量極低，而在惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量卻很高[9]。Eg5在正常細(xì)胞及惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)的差異性表達(dá)導(dǎo)致靶向Eg5的療法不良反應(yīng)相對較低，是很好的抗有絲分裂療法。CRPC細(xì)胞內(nèi)存在Eg5的過度表達(dá)和活化，探究Eg5對CRPC細(xì)胞惡性增殖以及侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)作用，可以為基于該類靶點(diǎn)的藥物開發(fā)提供理論依據(jù)。然而，關(guān)于Eg5調(diào)節(jié)CRPC細(xì)胞增殖的研究很少。本研究初步探究了Eg5對CRPC DU145細(xì)胞惡性增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)作用，同時(shí)評價(jià)了Eg5小分子抑制劑SB-743921對DU145細(xì)胞生長及轉(zhuǎn)移的影響，并對相應(yīng)的機(jī)制做了初步的探究。

本研究發(fā)現(xiàn)用Eg5 shRNA沉默Eg5在DU145細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)或者用SB-743921抑制Eg5的功能，均能抑制3種前列腺癌細(xì)胞DU145、PC3和LNCap的惡性增殖。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，Eg5表達(dá)和功能的抑制會促進(jìn)DU145細(xì)胞凋亡，阻斷細(xì)胞周期G2期到M期的轉(zhuǎn)換并削弱細(xì)胞的遷移能力。多種基因調(diào)節(jié)細(xì)胞周期G2期到M期的轉(zhuǎn)換，其中周期蛋白依賴性激酶CDK1、Cyclin A1、Cyclin B1及CDC25B發(fā)揮關(guān)鍵作用。CDK1是細(xì)胞有絲分裂重要的調(diào)節(jié)，通過與細(xì)胞周期蛋白Cyclin A1 及Cyclin B1 來調(diào)節(jié)細(xì)胞周期G2到M期的轉(zhuǎn)換[15-16]。當(dāng)CDK1表達(dá)降低，細(xì)胞周期會阻滯在G2/M期，繼而導(dǎo)致細(xì)胞無法進(jìn)行有絲分裂而死亡[15]。細(xì)胞分裂周期因子CDC25B與CDK1一樣，也是參與細(xì)胞有絲分裂的重要因子，當(dāng)CDC25B的表達(dá)量降低，會導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯在M期[15]。多種基因參與調(diào)節(jié)CDK1的表達(dá)和功能，其中轉(zhuǎn)錄因子SP1就被證實(shí)可以調(diào)節(jié)CDK1的表達(dá)[13-14]。Eg5是癌基因c-Myc的上游靶基因，研究表明Eg5表達(dá)和功能的抑制，會直接導(dǎo)致c-Myc表達(dá)量的降低[11，13]。而轉(zhuǎn)錄因子SP1是c-Myc的下游靶基因，與腫瘤的惡性增殖及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[13-14]。因此，Eg5可能通過調(diào)節(jié)c-Myc的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子SP1的表達(dá)和功能來調(diào)控CDK1等細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的功能。基于此設(shè)想，本研究用q-PCR和Western blot評價(jià)了Eg5對c-Myc、SP1、CDK1、Cyclin A1、Cyclin B1及CDC25B表達(dá)的影響。q-PCR和Western blot結(jié)果同時(shí)證明，當(dāng)Eg5表達(dá)和功能被抑制后，c-Myc、SP1以及參與調(diào)節(jié)G2到M期轉(zhuǎn)換的基因CDK1、Cyclin A1、Cyclin B1及CDC25B表達(dá)的均顯著降低。這表明，Eg5可能通過c-Myc/SP1/CDK1信號通路將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期。

作為重要的轉(zhuǎn)錄因子，特異性蛋白SP1通過調(diào)節(jié)多種通路來促進(jìn)腫瘤的惡性進(jìn)展[13]。除細(xì)胞周期，SP1還被證明參與調(diào)節(jié)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移[14]。包括N-cadherin、Vimentin和E-cadherin在內(nèi)的多種基因參與調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[17]，而轉(zhuǎn)錄因子SP1被證明參與調(diào)節(jié)N-cadherin、Vimentin和E-cadherin的表達(dá)和功能來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[17-18]。這表明，Eg5很可能是通過c-Myc間接的調(diào)節(jié)SP1的表達(dá)，繼而調(diào)節(jié)N-cadherin、Vimentin和E-cadherin的表達(dá)和功能來調(diào)控腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。本研究q-PCR和Western blot結(jié)果表明，當(dāng)Eg5表達(dá)和活性受到抑制，會導(dǎo)致細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因N-cadherin和Vimentin表達(dá)的降低以及E-cadherin表達(dá)的增加，繼而削弱腫瘤細(xì)胞的遷移能力。這表明，Eg5可能通過c-Myc/SP1信號通路來抑制CRPC細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，但具體的調(diào)節(jié)機(jī)制需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，本研究初步探討了Eg5對CRPC細(xì)胞惡性增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的影響及機(jī)制，為以Eg5為靶點(diǎn)的小分子藥物設(shè)計(jì)提供理論基礎(chǔ)。