陳鈺 陳斌斌 郭萌

【摘 要】目的：通過(guò)觀察IL-23及IL-35在正常人群及良、惡性胸腔積液患者中的表達(dá)水平，以探討這兩項(xiàng)指標(biāo)在不同種類(lèi)胸腔積液鑒別診斷中的意義。方法：選取2020年8月至2021年4月于我院就診的胸腔積液患者共60例，將其分為良性胸腔積液組和惡性胸腔積液組，用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）分別檢測(cè)病例組及正常對(duì)照組體內(nèi)的IL-23和IL-35的含量，通過(guò)組間及組內(nèi)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比和相關(guān)性分析。結(jié)果：在血清中，與正常對(duì)照組相比，良、惡性胸腔積液組的IL-23含量均顯著升高（P<0.05），其中良性胸腔積液組升高的更為明顯（P<0.05）；而IL-35在良性組則表現(xiàn)為含量下降，在惡性組表達(dá)上調(diào)（P<0.05）；在胸腔積液中，兩種白介素的表達(dá)與血清中的水平一致，即IL-23含量在良性組升高的更為明顯，而IL-35在良性胸腔積液中含量下降，在惡性組含量升高；良惡性胸腔積液患者外周血和胸腔積液中IL-23水平呈正相關(guān)（r=0.867，P<0.01），IL-35水平亦呈正相關(guān)（r=0.784，P<0.01）。結(jié)論：檢測(cè)患者體內(nèi)IL-23及IL-35的含量對(duì)不同種類(lèi)胸腔積液的鑒別診斷具有一定價(jià)值。不同種類(lèi)胸腔積液中IL-23及IL-35的含量也有所不同，且其在良惡性胸腔積液中鑒別中具有一定意義。

【關(guān)鍵詞】IL-23；IL-35；胸腔積液

在我國(guó)良惡性胸腔積液的代表即結(jié)核性胸膜炎與癌性（主要是肺癌）胸腔積液。近幾年來(lái)，鑒別胸腔積液的生物學(xué)標(biāo)志物很多，但是文獻(xiàn)的相關(guān)報(bào)道不一，范圍波動(dòng)大而且受地區(qū)的結(jié)合感染率影響較大[1]。因此，尋找直接或間接反映癌腫或結(jié)核菌引起炎癥反應(yīng)存在的指標(biāo)，以及探討聯(lián)合檢測(cè)的價(jià)值就成為近年研究熱點(diǎn)。

1 研究對(duì)象

選擇2018年8月至2019年4月于解放軍八一醫(yī)院就醫(yī)并確診的的良性胸腔積液30例，其中包括肺炎性胸腔積液14例，結(jié)核性胸腔積液16例；惡性腫瘤胸腔積液30例，均經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)。另選取于本院正常體檢病例30例，設(shè)立正常對(duì)照組。

2 研究方法

2.1 標(biāo)本采集與預(yù)處理

各組受試者于清晨采取靜脈血5ml，3000rpm離心10min，取上清存于-20℃冰箱備用。良、惡性胸腔積液組分別于治療前采集胸腔積液5ml，3000rpm離心10min，取上清存于-20℃冰箱備用。

2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定IL-23、IL-35含量

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：標(biāo)準(zhǔn)孔10個(gè)，加入相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)品。加樣：設(shè)空白孔一個(gè)及待測(cè)樣品孔若干，待測(cè)孔先加樣品稀釋液40uL，再加待測(cè)樣品10uL。溫育：封板膜封板，37℃水浴箱溫育30分鐘。洗滌：蒸餾水30倍稀釋濃縮洗滌液，撕去封板膜，甩干，洗滌液洗板5次，每次間隔30秒，拍干。加酶標(biāo)：每孔酶標(biāo)液50uL，空白孔除外。溫育：封膜溫育30分鐘。洗滌：稀釋洗滌液洗5次，拍干。顯色：每孔顯色A液50uL，B液50uL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。終止：每孔終止液50uL。測(cè)定：空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)測(cè)量每孔吸光度（OD值）。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料采用（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（χ±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 研究結(jié)果

3.1 血清中IL-23和IL-35的含量測(cè)定

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，與正常對(duì)照組相比，良、惡性胸腔積液組的IL-23含量均顯著升高（P<0.05），其中良性胸腔積液組升高的更為明顯（P<0.05）；而IL-35在良性組則表現(xiàn)為含量下降，在惡性組表達(dá)上調(diào)（P<0.05），見(jiàn)表1。

3.2 胸腔積液中IL-23和IL-35含量對(duì)比

通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，胸腔積液中兩種白介素的表達(dá)與血清中的水平一致，即IL-23含量在良性組升高的更為明顯（P<0.05），而IL-35在良性胸腔積液中含量下降，在惡性組含量升高（P<0.05），見(jiàn)表2。

3.3 良惡性胸腔積液患者外周血和胸水中IL-23/IL-35相關(guān)性分析

惡性胸腔積液患者外周血和胸水中IL-23水平呈正相關(guān)（r=0.867，P<0.01），IL-35水平亦呈正相關(guān)（r=0.784，P<0.01）。

4 討論

良性胸腔積液主要以結(jié)核性胸腔積液為主，通常屬于慢性疾病，其病因一般是胸膜下組織的破裂導(dǎo)致結(jié)核桿菌進(jìn)入胸腔，從而誘發(fā)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。惡性胸腔積液主要是由于腫瘤細(xì)胞侵犯了胸膜淋巴微孔和（或）縱隔淋巴結(jié)從而使局部淋巴回流受阻，導(dǎo)致正常胸腔內(nèi)液體的重吸收受阻，進(jìn)而導(dǎo)致胸腔積液的發(fā)生。雖然目前對(duì)于兩者的發(fā)病機(jī)制、鑒別診斷的研究越來(lái)越深入，但是由于兩者的臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果不易區(qū)分，以及缺少病因?qū)W、病理學(xué)的依據(jù)，所以良惡性胸腔積液的鑒別仍是一大難題[2]。

本研究結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，IL-23含量在良惡性胸腔積液患者的血清及胸水中均明顯升高（P<0.05），但在良性胸腔積液中升高更為顯著（P<0.05）。血清組也呈現(xiàn)正相關(guān)性，表明可以通過(guò)測(cè)量IL-23和IL-35在血清中的含量，為判斷受試者是否患有良惡性胸腔積液提供一定依據(jù)。

在本實(shí)驗(yàn)中，收集的良性胸腔積液可能CD4+T細(xì)胞含量升高，從而導(dǎo)致IL-23分泌增多。因此我們猜測(cè)良性胸腔積液產(chǎn)生過(guò)程中的機(jī)制可能為：機(jī)體在炎癥刺激下激活CD4+T，使其在體內(nèi)表達(dá)水平升高，活化之后的抗原提呈因子分泌IL-23增多，IL-23與受體結(jié)合后一方面促進(jìn)Th17細(xì)胞增殖分泌IL-17、IL-22等促炎因子，另一方面IL-23通過(guò)自分泌的方式作用于樹(shù)突狀細(xì)胞和吞噬細(xì)胞進(jìn)一步分泌IL-1、IL-6等促炎因子，放大局部炎癥效應(yīng)[3]。這與本實(shí)驗(yàn)中良性胸腔積液中IL-23含量升高的結(jié)果相符。

由于良性胸腔積液中促炎因子和趨化因子表達(dá)更為顯著，因此本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示IL-23在良性胸腔積液中的含量上高更為明顯。

在本研究中，IL-35含量在良性胸腔積液中降低，而在惡性胸腔積液中升高。在良性胸腔積液的免疫損傷和炎癥反應(yīng)中，Th17細(xì)胞和IL-17發(fā)揮著重要作用。由于IL-35具有抑制Th17細(xì)胞的發(fā)育、增殖，抑制干擾素γ、IL-17分泌的功能，所以在良性胸腔積液的形成中發(fā)揮炎性抑制作用，因此IL-35在良性胸腔積液中的表達(dá)程度降低，這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。在惡性胸腔積液中，CD4+CD25+Treg的含量顯著高于良性胸腔積液，其可以抑制自身細(xì)胞免疫，并且Treg細(xì)胞非常容易被趨化到積液中，并在其中大量堆積，最終導(dǎo)致胸腔積液的形成。Treg為CD4+T細(xì)胞中的一個(gè)亞群，抑制抗腫瘤免疫的產(chǎn)生[4]。由此可以得出在惡性胸腔積液中，Treg細(xì)胞含量較高，一定程度上可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)中IL-35在惡性胸腔積液中含量明顯增高，表明Treg細(xì)胞和IL-35的分泌互相影響，并且二者共同作用從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)與浸潤(rùn)。

在臨床上，良惡性胸腔積液由于臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果類(lèi)似，鑒別困難，因此尋找可以有效鑒別此類(lèi)疾病的相關(guān)指標(biāo)顯得尤為重要。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)，IL-23在不同種類(lèi)胸腔積液患者體內(nèi)都有所升高，但在良性胸腔積液中升高的程度更為顯著，而IL-35在二類(lèi)疾病中的表現(xiàn)則恰為相反，而與血清結(jié)果呈一致。綜上所述，我們推測(cè)可以通過(guò)大批量檢測(cè)二指標(biāo)在胸腔積液中的表達(dá)程度，建立合適的參考區(qū)間，檢測(cè)受試者血清中二指標(biāo)可以為良惡性胸腔積液的鑒別診斷提供一定依據(jù)。

本次實(shí)驗(yàn)依舊存在一些不足。首先，實(shí)驗(yàn)采集的標(biāo)本量較少，并不能很好地佐證實(shí)驗(yàn)結(jié)論，今后需要擴(kuò)大樣本量從而進(jìn)一步驗(yàn)證IL-23和IL-35在良惡性胸腔積液鑒別診斷中的價(jià)值，以便于更好地服務(wù)臨床。其次，實(shí)驗(yàn)分組不夠細(xì)致，僅僅研究了良、惡性胸腔積液標(biāo)本里面IL-23和IL-35的含量，然而采集的良性胸腔積液中還分為結(jié)核性和肺炎性胸腔積液。今后可以將分組更加細(xì)致化，將肺炎性和結(jié)核性胸腔積液?jiǎn)为?dú)作研究，以探討IL-23和IL-35兩種指標(biāo)在其鑒別診斷中是否也存在一定的意義。最后，本實(shí)驗(yàn)的采用的是ELISA的研究方法。今后可以采用分子實(shí)驗(yàn)的方法再次進(jìn)行測(cè)量，以提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度和特異度。

參考文獻(xiàn)

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[4] 李翔云，李薇，張澤明.結(jié)核性、惡性胸腔積液的鑒別診斷的研究進(jìn)展[J].臨床診療進(jìn)展，2018，10（11）：109-112.