喬彥杰，張保軍，劉賢俠，連科迅，谷新利

(石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆 石河子 832003)

在奶牛飼養(yǎng)過程中，大約75%的奶牛疾病在圍產(chǎn)期發(fā)生，其中子宮炎是伴隨著機(jī)體生殖激素紊亂、子宮形態(tài)改變的機(jī)體免疫紊亂病，且造成機(jī)體子宮復(fù)舊延遲和繁殖障礙[1]。生產(chǎn)中治療子宮炎常用的抗生素和激素療法，易造成耐藥病菌的傳播以及畜產(chǎn)品藥物殘留問題，對公共健康構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。所以開發(fā)安全有效，替代抗生素的新型藥物成為畜牧領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[2]。

健宮散是益母草、桃仁、川芎等中藥組成的復(fù)方散劑，其遵循“辨證論治”的原理，采用活血化瘀、補(bǔ)血補(bǔ)氣的原則，對預(yù)防治療子宮炎有明顯效果。為探討健宮散治療奶牛子宮炎的作用機(jī)理，本試驗(yàn)通過監(jiān)測灌服健宮散后子宮炎奶牛生殖激素和子宮形態(tài)學(xué)變化，旨在研究健宮散對子宮炎奶牛生殖激素及形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響，以期為中藥防治奶牛子宮炎提供技術(shù)支撐，也為臨床應(yīng)用該藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 健宮散由石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院中獸醫(yī)課題組研制，藥材購自石河子市醫(yī)藥公司；孕酮(P4)、前列腺素F2α(PGF2α)、前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒，均購自上海藍(lán)基生物科技有限公司；一次性采血管，購自三門縣民生醫(yī)藥有限公司。

1.2 主要儀器 50 s型Tringa Vet獸用便攜式B超儀，荷蘭Piemed ICAL公司產(chǎn)品；-80 ℃超低溫冰箱，美國賽默飛世爾科技公司產(chǎn)品；PowerWave XS2 BioTek型酶標(biāo)儀，美國Bio-Tek公司產(chǎn)品；Eppendorf Research型移液器，艾本德中國有限公司產(chǎn)品。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 新疆石河子地區(qū)某奶牛場18頭年齡、胎次、體況評分差異不顯著的荷斯坦奶牛。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 通過50 s型Tringa Vet獸用便攜式B超儀檢查，將奶牛分為患病組、治療組和正常組，每組各6頭。治療組平均年齡為5～6歲，患病組平均年齡為5～6歲，正常組平均年齡為4～5歲。正常組體況評分在2.8～3.8，其中2、3、5胎各2頭?；甲訉m炎奶牛12頭，6頭作為治療組，6頭作為患病組，其中2胎和3胎各3頭、4胎和5胎及6胎 各2頭，體況評分在2.9～4.5。

1.4.2 采血、投藥、B超檢查時(shí)間 治療組在每天08:00—11:00灌服1次健宮散400 g/頭，連續(xù)1個(gè) 療程(7 d)。治療組灌服健宮散前通過尾靜脈采血1次，用藥中期采血1次(灌服中藥的第3天)，灌服健宮散結(jié)束后第1、4、7、11、15天和第20天各采血1次，每次10 mL/頭，共采血8次。正常組、患病組則每天灌服1次等量的無菌生理鹽水，灌藥時(shí)間與采血時(shí)間同治療組。產(chǎn)后第7、9、14、21、27、35天和第42天跟蹤測量三組奶牛子宮頸縱徑和子宮角壁厚。

1.4.3 ELISA 檢測P4、PGF2α、PGE2含量 收集各組奶牛血液樣品，血清自然析出后分裝于1.5 mL離心管中，按照 ELISA 試劑盒說明書操作檢測血清中P4、PGF2α、PGE2的含量。

1.4.4 B超檢查操作方法 (1)保定牛和準(zhǔn)備：將奶牛驅(qū)趕至頸枷、臥床或者通道內(nèi)，奶牛后大腿保定，或在臥床以隔欄分開后腿保定。經(jīng)直腸路徑超聲檢查，帶上塑料長臂手套，涂抹石蠟油，五指并攏插入奶牛的肛門，將直腸內(nèi)的糞便清理干凈，方便檢查并減少探頭磨損。(2)子宮頸縱徑的測量方法：先找到子宮頸的位置，確定探頭掃查方向。以骨盆聯(lián)合或骨盆底為分界線，將探頭縱向放在子宮頸中部，以直腸壁內(nèi)側(cè)與子宮頸接觸點(diǎn)為測量點(diǎn)，用B超測量子宮頸縱向直徑，保存圖像，并記錄。(3)子宮角壁厚的測量方法：將探頭放置在子宮角基部進(jìn)行測量，確定進(jìn)入子宮壁與出子宮壁位置，直腸壁內(nèi)側(cè)與子宮角接觸點(diǎn)顯示較強(qiáng)回聲，出子宮壁漿膜也顯示強(qiáng)回聲，兩者之間為子宮角壁厚。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 相關(guān)數(shù)據(jù)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件中的One-Way ANOVA的運(yùn)算模塊進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan’s法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差形式表示，以P<0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 健宮散治療奶牛產(chǎn)后子宮炎對P4、PGF2α、PGE2的影響 由表1可知，用藥中治療組P4水平低于正常組、患病組(P<0.05)，其他各時(shí)間點(diǎn)三組之間P4水平差異顯著(P<0.05)。用藥前正常組PGF2α水平高于治療組、患病組(P<0.05)，用藥中、停藥后1、4、7、11、15 d和20 d治療組PGF2α水平高于正常組、患病組(P<0.05)。用藥前、用藥中、停藥后1、4、7、11 d和15 d三組之間PGE2水平差異顯著(P<0.05)，停藥后20 d治療組PGE2水平低于患病組(P<0.05)，而正常組PGE2水平與治療組、患病組差異不顯著(P>0.05)。試驗(yàn)結(jié)果表明，子宮炎奶牛用藥后促進(jìn)PGF2α分泌，抑制P4生成。

表1 健宮散治療奶牛產(chǎn)后子宮炎對P4、PGF2α、PGE2的影響Table 1 Effect of Jiangong powder on P4,PGF2α and PGE2 of dairy cows with postpartum hysteritis

健宮散治療后，P4水平在停藥后1 d達(dá)到峰值，為(10.76±0.05)ng/mL；PGF2α水平在停藥后4 d達(dá)到峰值，為(7.62±0.05)ng/mL；PGE2水平在停藥后4 d達(dá)到峰值，為(2.58±0.01)ng/mL；其中治療組P4、PGE2峰值顯著低于正常組、患病組(P<0.05)，PGF2α的峰值顯著高于正常組、患病組(P<0.05)，PGF2α、PGE2水平在同一時(shí)間點(diǎn)達(dá)到峰值。

2.2 健宮散治療奶牛產(chǎn)后子宮炎對子宮頸的影響 由表2可知，在產(chǎn)后7～42 d正常組、患病組、治療組奶牛子宮頸縱徑均呈下降趨勢，且在42 d分別恢復(fù)至2.72 cm、2.87 cm和2.67 cm。

表2 健宮散治療奶牛產(chǎn)后子宮炎對子宮頸的影響Table 2 Effect of Jiangong powder on the cervix of dairy cows with postpartum hysteritis (cm)

2.3 健宮散治療奶牛產(chǎn)后子宮炎對子宮角的影響 由表3可知，在產(chǎn)后21～42 d正常組、患病組、治療組奶牛子宮角壁厚均呈下降趨勢，且在42 d時(shí)分別恢復(fù)為3.08 cm、3.36 cm和3.14 cm。

表3 健宮散治療奶牛產(chǎn)后子宮炎對子宮角的影響Table 3 Effect of Jiangong powder on cornua uteri of dairy cows with postpartum hysteritis of cow (cm)

3 討論

3.1 健宮散治療奶牛產(chǎn)后子宮炎對P4、PGF2α、PGE2的影響 研究表明，P4可抑制子宮收縮、促進(jìn)子宮內(nèi)膜的上皮組織及肌層的增生和分化。當(dāng)其分泌增多，子宮免疫防御機(jī)能下降，易發(fā)生感染[3]。同時(shí)P4還可以刺激前列腺素合成酶的活動(dòng)，增加前列腺素的釋放量[4]。前列腺素不僅可以調(diào)控發(fā)情周期，而且是子宮炎癥反應(yīng)中關(guān)鍵的免疫調(diào)節(jié)因子。高水平的PGF2α促進(jìn)子宮收縮復(fù)舊，而高水平PGE2會(huì)增加細(xì)菌感染的嚴(yán)重程度[5]。朱永剛等[6]報(bào)道，胎衣不下奶牛血清中P4水平高于正常奶牛，PGF2α含量低于正常奶牛。Melendez等[7]研究發(fā)現(xiàn)，健康奶牛在產(chǎn)后0～7 d PGF2α水平處于上升階段，子宮炎奶牛PGF2α水平高于正常牛，產(chǎn)后8～10 d子宮炎奶牛和健康奶牛PGF2α水平均下降。王建永等[8]研究發(fā)現(xiàn)，胎衣不下組奶牛胎盤組織中的PGE2的含量低于健康組奶牛。本研究表明，正常組P4水平低于患病組，PGF2α水平顯著高于患病組，與朱永剛等[6]研究結(jié)果一致；正常組PGE2水平顯著低于患病組，與王建永等[8]研究結(jié)果不一致，究其原因可能是血清中激素水平調(diào)節(jié)全身體液免疫，胎盤組織中激素是調(diào)節(jié)局部組織免疫，因此造成血清與胎盤組織中PGE2水平有一定的差異。

研究表明，益母草可以調(diào)節(jié)性激素水平，促進(jìn)性激素的分泌[9]。余青等[10]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸-川芎可降低PGF2α濃度；姚熒等[11]研究發(fā)現(xiàn)，川芎降低卵巢內(nèi)PGE2含量，提高子宮孕酮受體特異結(jié)合量；李晶晶等[12]研究發(fā)現(xiàn)，甘草能降低小鼠血清中PGE2水平；王麗琴等[13]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸注射液可以提高P4含量。本研究表明，治療組停藥后PGF2α水平顯著高于正常組和患病組，P4、PGE2水平顯著低于正常組和患病組，可能是健宮散中成分單味藥或藥物配伍后發(fā)揮作用，改善子宮炎奶牛血清中激素失衡狀態(tài)。

3.2 健宮散治療奶牛產(chǎn)后子宮炎對子宮形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響 應(yīng)用B超對三組奶牛子宮進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)后7～42 d正常組、患病組與治療組子宮頸縱徑、子宮角壁厚均呈下降趨勢。胡路鋒[14]研究發(fā)現(xiàn)，初產(chǎn)、經(jīng)產(chǎn)子宮炎奶牛子宮頸縱徑大于正常奶牛。Heppelmann等[15]在產(chǎn)后第8～65天 對子宮炎、胎衣不下奶牛進(jìn)行B超檢查，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)后11 d子宮炎奶牛子宮角壁厚顯著大于健康奶牛，且產(chǎn)后健康奶牛子宮角壁恢復(fù)更快。這說明子宮炎嚴(yán)重影響奶牛子宮形態(tài)的恢復(fù)。研究表明，補(bǔ)氣藥可以增加化瘀作用，促進(jìn)炎癥消散并提高機(jī)體免疫力；活血化瘀藥可加快血液循環(huán)，促進(jìn)組織修復(fù)再生[16]。有研究報(bào)道，益母草水提物對未孕大鼠正常子宮具有興奮作用，對痙攣?zhàn)訉m具有舒張作用[17]。王華等[18]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸注射液在離體子宮內(nèi)表現(xiàn)出抑制作用，但是在體內(nèi)子宮表現(xiàn)興奮作用。鐘克炎等[19]研究發(fā)現(xiàn)，大劑量川芎提取液可抑制大鼠在體子宮平滑肌收縮。本試驗(yàn)中治療組子宮頸縱徑、子宮角壁厚恢復(fù)更快?？赡芘c健宮散中含有益母草、川芎等成分有關(guān)，通過藥物互相作用使子宮興奮，促進(jìn)收縮與舒張，利于子宮組織的修復(fù)和子宮內(nèi)細(xì)菌的排出，從而達(dá)到治療效果。