王艷朱博王玲張美玲康文光侯東霞王曉華冀小平*

1內(nèi)蒙古自治區(qū)婦幼保健院遺傳優(yōu)生科（呼和浩特010060）

2呼和浩特國(guó)際旅行衛(wèi)生保健中心（呼和浩特010010）

遺傳性耳聾是人類最常見的感覺神經(jīng)系統(tǒng)缺陷，分為非綜合型和綜合型，其中非綜合型約占70%左右[1]。GJB2是最常見的非綜合征型耳聾致病基因，呈隱性遺傳。該基因突變可引起先天性重度、極重度感音神經(jīng)性耳聾。前庭水管擴(kuò)大（Enlarged Vestibular Aqueduct，EVA）是一種常染色體隱性病，主要表現(xiàn)為前庭水管擴(kuò)大伴感音性神經(jīng)性或混合性耳聾[2]。占遺傳性聽力損傷的10%[3]。我國(guó)92.1%的EVA患者存在SLC26A4基因突變[4]，聽力損傷有較大個(gè)體差異，有遲發(fā)性和進(jìn)行性的特點(diǎn)。

我國(guó)較為常見的耳聾相關(guān)基因及突變熱點(diǎn)包括GJB2（c.235delC、c.299_300delAT、c.176_191del16、c.35delG），SLC26A4(2168A>G、IVST-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、1975G>C、2027T>A、IVS15+5G>A)，線粒體12SrRNA(1494C＞T、1555A＞G)和GJB3(538C>T)[5]。其中，一項(xiàng)薈萃研究顯示GJB2的四個(gè)突變熱點(diǎn)在我國(guó)的等位基因頻率分別為11.90%、2.22%、0.65%和 0.27%[6]。本文通過cPAS對(duì)內(nèi)蒙古呼和浩特市73例耳聾先證者及其直系親屬進(jìn)行24個(gè)耳聾基因的208個(gè)位點(diǎn)檢測(cè)，分析本地區(qū)耳聾患者的基因突變情況。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

遵循知情同意的原則，收集2019年9月至12月來(lái)自內(nèi)蒙古自治區(qū)婦幼保健院耳鼻喉科、遺傳優(yōu)生科以及內(nèi)蒙古自治區(qū)殘疾人康復(fù)服務(wù)中心的73例NSHL患者及其直系親屬（125例）的聽力及基因檢測(cè)資料。其中，直系親屬有6例為NSHL。198例受檢者中漢族170例，蒙族23例，滿族5例。除3例未知外，發(fā)病年齡為1天到30歲不等。其中55例為出生30日內(nèi)發(fā)病。受檢者均進(jìn)行純音測(cè)聽、聲阻抗、聽覺腦干誘發(fā)電位及高分辨率顳骨CT檢查，聽力損失以Waleed B文章為分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[7]。受檢者不含綜合征型耳聾、智力、身體發(fā)育異常等。本研究已通過本院倫理委員會(huì)審查（倫理審批號(hào)：[2018]倫函審第[011]號(hào)）。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集

用含EDTA的采集管對(duì)198例受檢者的外周血進(jìn)行采集后，充分顛倒混勻，放入4℃冰箱暫存，長(zhǎng)期保存置于-20℃。

1.2.2 突變檢測(cè)

采用cPAS（委托深圳華大臨床檢驗(yàn)中心進(jìn)行檢測(cè)）：對(duì)24個(gè)耳聾基因（GJB3、USH2A、ESPN、OTOF、PAX3、MITF、ILDR1、MARVELD2、ADGRV1、DFNA5、SLC26A4、TMC1、PCDH15、CDH23、USH1C、LRTOMT、MYO7A、TECTA、GJB2、OTOA、MYO15A、TMPRSS3、SOX10、MT-RNR1）的208個(gè)位點(diǎn)分析。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 受檢者耳聾基因檢測(cè)結(jié)果

198例中耳聾基因突變檢出率為39.39%（78/198）；其 中GJB2突 變 率 為 31.31%(62/198)；SLC26A4突變率為9.09%(18/198)。有2例（7和25號(hào)家庭成員）同時(shí)攜帶GJB2和SLC26A4突變。79例聽力損傷者中，26例可通過基因突變解釋，由GJB2突變導(dǎo)致的為25.31%（20/79）；由SLC26A4突變導(dǎo)致的為7.59%（6/79）（見表1、2）。

表1 不同受檢人群的基因變異頻率Table 1 The analysis of gene variants’frequencies of different gene testing populations

表2 耳聾家族中的致病基因與位點(diǎn)分布Table 2 The pathogenic genetic variants in positive families

上接表2

上接表2

2.2 耳聾者耳聾基因各位點(diǎn)突變頻率在不同民族中分析

79例聽力損傷者為漢族66人、蒙族11人和滿族2人。因滿族未檢出耳聾基因突變，所以僅討論漢蒙兩族。GJB2有顯著民族差異的是c.235delC和c.257C>G。漢族中，GJB2頻率最高的突變?yōu)閏.235delC(19.4%)，高于蒙古族中的5%。對(duì)于SLC26A4c.919-2A>G漢族中頻率（6%）大于蒙古族（5%）。有顯著差異的突變?yōu)槊晒抛濯?dú)有的c.2168A>G（見表3～6）。

表3 GJB2基因突變位點(diǎn)在耳聾患者中的分布Table 3 GJB2 Genetic variants and their frequencies in deaf patients

表4 SLC26A4基因突變位點(diǎn)在耳聾患者中的分布Table 4 SLC26A4 Genetic variants and their frequencies in deaf patients

表5 漢族與蒙古族GJB2基因突變位點(diǎn)的比較Table 5 PathogenicGJB2variants in Han and Mongolian groups

表6 漢族與蒙古族SLC26A4基因突變位點(diǎn)的比較Table 6 Pathogenic SLC26A4 variants in Han and Mongolian groups

2.3 GJB2基因c.109G＞A突變?cè)贜SHL家系中的分析

有三組NSHL家系（表2）需特別分析：4號(hào)家系中，聽力輕度損傷的先證者為GJB2c.109G>A的純合突變，遺傳自聽力正常的父母；12號(hào)家系中，先證者為GJB2上的c.235delC純合突變，父親為聽力正常的攜帶者，自述聽力正常的母親為c.235delC與c.109G>A的復(fù)合雜合。我們考慮其是否只表達(dá)了c.109G>A的突變（聽力輕度損傷，并未察覺）。20號(hào)家系中，雙側(cè)重-極重度感音神經(jīng)性耳聾的先證者為GJB2的復(fù)合雜合，輕度損傷父親也為GJB2的復(fù)合雜合。發(fā)現(xiàn)父親基因型中也出現(xiàn)GJB2的c.109G>A突變。綜上所述，我們有理由考慮c.109G>A對(duì)應(yīng)的聽力損失通常為輕至中度的個(gè)體中檢出。

2.4 SLC26A4基因突變與前庭導(dǎo)水管的對(duì)應(yīng)關(guān)系

檢出SLC26A4基因突變的先證者及有耳聾表型的家系成員均經(jīng)臨床耳軸位CT骨掃描放大及冠狀面重建檢查。其中，6人檢出前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大。SLC26A4c.919-2A>G純合的2人（表2家系23和25先證者）和復(fù)合雜合（c.919-2A>G/c.1707+5G>A和c.919-2A>G/c.665G>T）的2人（表2家系26和28先證者）表現(xiàn)出大前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大伴聽力損傷。另2位檢出前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大的患者基因檢測(cè)為陰性。此外，還有來(lái)自家系24和27的SLC26A4為復(fù)合雜合的2位先證者（c.919-2A>G/c.2168A>G和c.919-2A>G/c.1547dupC）表現(xiàn)出雙耳聽力損傷，CT正常。家系29（表2）的患者僅表現(xiàn)出雙耳重度感音神經(jīng)性耳聾，它的基因型為SLC26A4基因上c.919-2A>G雜合。在耳聾表型人群中，SLC26A4突變的檢出率為8.86%（7/79）。一例GJB2突變致聾患者也攜帶SLC26A4突變。

3 討論

與人群規(guī)模相似的國(guó)內(nèi)研究相比[8]，本研究中包含更多檢測(cè)位點(diǎn)的基因診斷手段表現(xiàn)出了更高的檢出率。我國(guó)常見耳聾基因GJB2和SLC26A4的熱點(diǎn)突變?cè)诓煌貐^(qū)有人群差異。比如在東北地區(qū)兩基因?qū)?yīng)的主要突變分別為c.235delC和c.919A>G[9]。在粵西，GJB2基因主要的突變位點(diǎn)c.109G>A和c.235delC，而SLC26A4常見的突變位點(diǎn)為c.919-2A>G[10]。本文豐富了內(nèi)蒙地區(qū)的耳聾基因型信息。

在受檢者中，由GJB2突變引起耳聾的比例為25.31%（20/79）高于已報(bào)道的14.9%[11]。本文中GJB2的檢出率在先證者、家系中除先證者和整個(gè)家系這三組分類中都在30%-40%之間，其中的

c.235delC。文獻(xiàn)報(bào)道中中國(guó)人群該突變頻率為11.9%[6]，低于在漢族的19.4%，高于蒙古族的頻率5%。此外，該突變位點(diǎn)在漢蒙兩族中存在顯著差異。在中國(guó)人群對(duì)GJB2突變頻譜的研究中，c.235delC是不同人群中共有的突變[9]。之前蒙古族的研究中，18個(gè)個(gè)體中檢出的三種最常見的GJB2突變?yōu)閏.235delC，c.299_c.300delAT和c.176_c.191del16[9]。在我們的研究中，雖然c.235delC在蒙古族中的頻率沒有顯著高于其它突變，但是僅c.235delC在本研究的10名蒙古族患者中檢出。

GJB2上的c.109 G>A是一個(gè)致病性有爭(zhēng)議的位點(diǎn)。已有文獻(xiàn)中，該突變?cè)跐h族患者人群中的基因頻率顯著高于對(duì)照組[9]。這是一個(gè)支持致病性的證據(jù)。此外，一項(xiàng)多中心研究中發(fā)現(xiàn)該突變與輕至中度聽力障礙（中位數(shù)25-40 dB）相關(guān)[14]。在本研究中，該位點(diǎn)在一個(gè)聽力損傷患者和兩個(gè)自述無(wú)聽力異常的家人中檢出。無(wú)聽力異常者可能是輕度聽力損傷而不自知的。這些支持了該位點(diǎn)對(duì)輕度聽力障礙的致病性。

以往較多的研究關(guān)注于EVA人群中SLC26A4的篩查，而不是在非綜合征型耳聾人群中。在過去亞洲EVA人群研究中，SLC26A4突變頻率在中國(guó)大陸、中國(guó)臺(tái)灣、韓國(guó)和日本分布為97.9%，87%，92%和68%[15-20]。在之前內(nèi)蒙古非綜合征型耳聾患者的基因篩查中，SLC26A4突變頻率為19.3%[21]，高于本研究的8.86%。這一方面是由于人群大小的差異，另一方面是由于之前的研究測(cè)序了SLC26A4的整個(gè)編碼區(qū)。本研究的檢測(cè)方法考慮了中國(guó)人群的高頻突變位點(diǎn)，盡量提高耳聾基因的檢出率，檢出的致病基因型可以解釋32.91%（26/79）的耳聾表型。在本文中，有兩名EVA患者沒有檢出SLC26A4上的基因突變，可能是啟動(dòng)子或者內(nèi)含子區(qū)存在突變，也可能是拷貝數(shù)變異[22]。在檢出結(jié)果中，有2例SLC26A4復(fù)合雜合突變的聽力損傷者，CT正常。這說(shuō)明SLC26A4的隱性突變可以導(dǎo)致非大前庭擴(kuò)張的聽力損傷?；颊咝鑴?dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)顳骨CT或核磁的變化以及時(shí)了解發(fā)病情況，需注意避免劇烈運(yùn)動(dòng)、噪音及發(fā)熱等情況。

本文受研究人群的限制有一定的局限性，比如在蒙古族中測(cè)出的GJB2c.257C>G突變已有在我國(guó)漢族中檢出的報(bào)道。在1852名漢族中，該突變頻率為0.51%[23]。這種民族特異性可以在未來(lái)大規(guī)模的蒙古族人群研究中進(jìn)行更深入探討。

4 總結(jié)

綜上所述，呼和浩特地區(qū)耳聾基因突變多發(fā)生于GJB2c.235delC和SLC26A4c.919-2A>G上。GJB2基因的突變位點(diǎn)c.109G>A不但可以導(dǎo)致聽力嚴(yán)重?fù)p傷，也可以導(dǎo)致聽力輕度損傷。早期進(jìn)行耳聾基因篩查可了解病因并做出相關(guān)診斷進(jìn)而提高我國(guó)人口質(zhì)量。雙側(cè)感音神經(jīng)性聾的患兒家庭及耳聾基因陽(yáng)性患兒定期進(jìn)行聽力學(xué)隨訪意義重大[24,25]。