氣相色譜氫火焰離子法測定三文魚中氨基酸的含量

2021-11-02 00:58:56師子豪祝偉霞楊冀州趙運勝

河南水產(chǎn) 2021年5期

師子豪，祝偉霞＊，魏蔚，楊冀州，趙運勝

（鄭州海關技術中心，鄭州 450003）

三文魚屬于冷水性高度洄游魚類，是鮭科魚類或鮭鱒魚類的商品名稱，是世界名貴魚類之一。三文魚鱗小刺少，肉質細嫩鮮美，在眾多的海產(chǎn)品中，以其獨特的口味、豐富的營養(yǎng)，受到越來越多人的青睞。氨基酸是三文魚體內蛋白質的基本分子，參與機體維持、蛋白質周轉、生物代謝等重要生命活動。近年來，在食品科學、環(huán)境工程、生物化學等領域有關氨基酸的分析已成為熱點問題[1]。我國是三文魚的主要進口國家，為準確評價三文魚的營養(yǎng)品質，保障進口食品的質量安全，建立三文魚中氨基酸含量的分析方法是非常重要的。

目前，氨基酸檢測的研究報道主要采用氨基酸分析儀[2]、液相色譜法[3]、離子色譜法[4]、氣相色譜-氫火焰離子化法（GC-FID）[5]、氣相色譜質譜（GCMS）[6]、液相色譜質譜（LC-MS）[7]、氣相色譜-同位素比值質譜（GC-IRMS）[8][9]等技術。為將氨基酸結構中羧基和氨基極性基團生成相應的揮發(fā)物，本文聯(lián)合采用分步衍生化進行操作，首先在酸化甲醇進行醇基甲酯化，再在堿性乙酸酐溶劑中進行氨基乙?；苌磻?，衍生物經(jīng)GC-FID進行測定。測定結果經(jīng)與國家標準GB5009.124-2016[10]進行比較，證明本方法結果準確，可用三文魚中氨基酸的含量測定。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

GC2030型氣相色譜儀-氫火焰離子化檢測器（日本島津公司）；T18型渦旋混勻器（德國IKA公司）；OA-SYS氮氣濃縮儀（美國Organomation公司）；16種氨基酸標準品，純度≥95%，均購于美國Sigma-Aldrich公司；乙酸酐（色譜純，天津富宇試劑）；甲醇、乙酸乙酯（色譜純，德國默克公司）；乙酰氯（色譜純，上海阿拉丁公司），其它均為國產(chǎn)分析純試劑。

氨基酸標準溶液制備：稱取氨基酸標準物質250mg于25mL容量瓶中，用0.1mol/L鹽酸溶液溶解并定容，配制成質量濃度為10mg/mL的單個氨基酸標準溶液。準確量取2mL的單標溶液用0.1mol/L鹽酸溶液稀釋并定容50mL，配制得到質量濃度為400mg/L的氨基酸混合標準溶液。

1.2 試驗方法

稱取10mg干基樣品，加入2mL6mol/L鹽酸溶液，渦旋混勻3min，氮氣置換上層空氣，110℃烘箱24 h水解，取出后降至室溫，加入正己烷-二氯甲烷（6:5）液液分配除脂，并于70℃氮氣流下吹干。加入甲醇-乙酰氯（6:1,V/V）0.7mL，渦旋混勻1min，70℃反應1h，取出后冷卻至室溫，氮氣吹干。再加入乙?；噭┮宜狒?三乙胺-丙酮（1:2:5,V/V/V）于70℃反應10min后，氮氣吹干。加入2mL乙酸乙酯溶解殘渣，1mL飽和氯化鈉液液分配，于4000r/min離心后取上層有機相，無水硫酸鈉除水，經(jīng)0.22 有機相膜過濾，供GC-FID檢測。

1.3 儀器工作條件

美國安捷倫VF-35ms色譜柱（30m×0.32mm，1.0μm）；進樣口溫度為300℃，檢測器溫度為305℃；氫氣流量和空氣流量分別為32mL/min和350mL/min；載氣為氦氣，載氣流量為5.06mL/min；不分流進樣；進樣量為1μL。色譜柱升溫程序：80℃保持1min，再以20℃/min的速率升至135℃，再以3℃/min的速率升至180℃，再以5℃/min的速率升至220℃，再以15℃/min的速率升至305℃并保持10min，總運行時間為42.42min。

2 結果與討論

2.1 甲基化反應條件的優(yōu)化

氨基酸結構中含有氨基和羧基極性結構，進行測定時需采用相應的衍生化技術，生成適合氣相色譜分析的揮發(fā)性物。因為氨基酸分子中的羧基與其它有機酸的羧基一樣，在酸性條件下可以與小分子醇反應生成相應的酯類物質。本文首先比較了甲醇、乙醇、異丙醇進行甲酯化的效果，結果證明采用甲醇反應產(chǎn)率高。通過對不同比例甲醇-乙酰氯（1:3、1:6、1:9，V/V）溶劑進行試驗，數(shù)據(jù)表明甲醇-乙酰氯（1:6，V/V）時，色氨酸響應最高（如圖1所示），其它19種氨基酸甲酯化產(chǎn)物≥92%。本方法最終采用甲醇-乙酰氯（1:6，V/V）進行甲酯化。