胡 菲，沈成英，申寶德，朱衛(wèi)豐，袁海龍*

·藥劑與工藝·

不同穩(wěn)定劑對(duì)槲皮素納米晶體外溶出及大鼠體內(nèi)口服藥動(dòng)學(xué)的影響

胡 菲1, 2，沈成英2，申寶德2，朱衛(wèi)豐1*，袁海龍2*

1. 江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江西 南昌 330004 2. 空軍特色醫(yī)學(xué)中心藥學(xué)部，北京 100142

制備不同穩(wěn)定劑修飾的槲皮素納米晶（quercetin nanocrystals，QT-NCs），探討穩(wěn)定劑種類對(duì)QT-NCs體外溶出和口服藥動(dòng)學(xué)的影響。分別以羥丙甲纖維素E15（HPMC-E15）、普朗尼克F127（F127）和甘草酸（glycyrrhizinic acid，GL）為穩(wěn)定劑，采用介質(zhì)研磨法分別制備3種QT-NCs，即QT-NCs/F127、QT-NCs/HPMC E15、QT-NCs/GL，并進(jìn)行形態(tài)、晶型表征，考察其體外溶出及口服藥動(dòng)學(xué)。3種穩(wěn)定劑修飾的QT-NCs的粒徑均約為200 nm，PDI約為0.20，掃描電子顯微鏡顯示QT-NCs均呈短棒狀及不規(guī)則的顆粒狀；X射線衍射結(jié)果顯示QT-NCs均以結(jié)晶態(tài)存在；體外溶出結(jié)果顯示，與槲皮素原料藥相比，3種穩(wěn)定劑修飾的QT-NCs的累積溶出度均明顯提高，且30 min內(nèi)累積溶出率QT-NCs/F127 （74.90%）＞QT-NCs/GL（59.30%）＞QT-NCs/HPMC E15（53.65%）；藥動(dòng)學(xué)結(jié)果顯示，與槲皮素原料藥相比，3種穩(wěn)定劑修飾的QT-NCs口服生物利用度均顯著提高，且AUC0～呈如下順序：QT-NCs/E15（78.09±6.05）mg·h/L＞QT-NCs/GL （61.72±7.59）mg·h/L＞QT-NCs/F127（49.94±9.30）mg·h/L。納米晶能夠顯著改善槲皮素的體外溶出及口服生物利用度，穩(wěn)定劑種類對(duì)QT-NCs的體外溶出和口服藥動(dòng)學(xué)有顯著影響。

納米晶；穩(wěn)定劑；槲皮素；體外溶出；藥動(dòng)學(xué)；羥丙甲纖維素；普朗尼克；甘草酸

NCs被認(rèn)為是由少量穩(wěn)定劑（表面活性劑和/或聚合物）穩(wěn)定的純藥物結(jié)晶納米粒，平均粒徑小于1000 nm，通常在200～500 nm[6]。盡管NCs處方中穩(wěn)定劑的用量較少，但是其在維持NCs的穩(wěn)定性中發(fā)揮重要作用。穩(wěn)定劑可吸附在納米粒表面通過靜電排斥和/或空間位阻作用防止納米粒的聚集與團(tuán)聚，從而維持NCs的穩(wěn)定[7-8]。在NCs的制備中，穩(wěn)定劑的選擇通常是基于NCs的粒徑大小及物理穩(wěn)定性，通常以獲得粒徑小、分布均一且能夠維持相對(duì)較長時(shí)間的納米粒徑的NCs為準(zhǔn)[8]。

然而，NCs處方中的一些穩(wěn)定劑不僅能夠維持納米晶的穩(wěn)定，還會(huì)影響藥物的吸收和分布[9-10]。例如，普朗尼克與維生素E聚乙二醇琥珀酸酯可以通過抑制P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）活性而促進(jìn)藥物的吸收[8]，羥丙甲纖維素較好的腸黏膜黏附作用則可以延長藥物在胃腸道的滯留時(shí)間而增加藥物的吸收的[11]。此外，不同穩(wěn)定劑會(huì)影響藥物的溶解及NCs的分散能力而影響難溶性藥物NCs的溶出[12]，進(jìn)而影響藥物吸收。因此，探索穩(wěn)定劑種類對(duì)難溶性藥物NCs體內(nèi)外行為的影響，研究其影響規(guī)律及機(jī)制，對(duì)于NCs的研究與開發(fā)具有重要意義。本研究以槲皮素（quercetin，QT）為模型藥物，采用介質(zhì)研磨法分別制備羥丙甲纖維素E15（HPMC-E15）、普朗尼克F127（F127）和甘草酸（glycyrrhizinic acid，GL）3種穩(wěn)定劑穩(wěn)定的QT-NCs，即QT-NCs/HPMC E15、QT-NCs/F127、QT-NCs/GL，通過工藝優(yōu)化獲得相同粒徑的QT-NCs，并進(jìn)行理化性質(zhì)表征，考察其體外溶出及在大鼠體內(nèi)的口服藥動(dòng)學(xué)，初步探討不同穩(wěn)定劑對(duì)QT-NCs體外溶出及口服藥動(dòng)學(xué)的影響。

1 儀器與材料

LC-20AD型高效液相色譜儀，日本島津公司；Winner 801型納米激光粒度儀，濟(jì)南微納顆粒儀器股份有限公司；DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器，北京恒豐長偉科技有限公司；ZRS-8G型智能溶出試驗(yàn)儀，天津市天大天發(fā)科技有限公司；BT- 125D型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；D8 ADVANCEX-射線衍射儀，德國Bruker公司；Lab-1A-50型凍干機(jī)，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；JSM-6510型掃描電子顯微鏡（SEM），日本電子公司；TGL-16G型型臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；VORTEX-5型渦旋混合儀，其林貝爾儀器公司。

槲皮素原料藥，批號(hào)CY160517，陜西慈緣生物技術(shù)公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥95%；槲皮素對(duì)照品，批號(hào)16111201，成都普菲德生物技術(shù)公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%；甘草酸，批號(hào)190421，北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥95.0%；山柰酚對(duì)照品，批號(hào)17092102，成都普菲德生物技術(shù)公司，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%；F127購自北京鳳禮精求商貿(mào)有限責(zé)任公司；HPMC-E15購自安徽山河藥用輔料有限公司；磷酸，天津福晨試劑廠；色譜甲醇，F(xiàn)isher Chemical公司。

SD大鼠，雄性，體質(zhì)量為（200±20）g，SPF級(jí)，由北京斯貝福生物技術(shù)有限公司提供。動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（京）2018-0010。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理經(jīng)空軍特色醫(yī)學(xué)中心批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)：空特（科研）第2021- 75-PJ01。

2 方法與結(jié)果

2.1 QT-NCs的制備

采用介質(zhì)研磨法制備QT-NCs[13-14]。稱取槲皮素原料藥40 mg及穩(wěn)定劑8 mg，置于10 mL西林瓶中，加入4 mL蒸餾水，加入攪拌子及適量直徑為0.4～0.6 mm的氧化鋯珠子，將西林瓶置于磁力攪拌器上，在一定的轉(zhuǎn)速下攪拌研磨數(shù)小時(shí)，取出，濾過去除氧化鋯珠子，即得QT-NCs混懸液。

【英國《國際核工程》網(wǎng)站2018年9月12日?qǐng)?bào)道】 英國核時(shí)代公司(NuGen)近日宣布即將裁員60%以上。該公司是日本東芝公司(Toshiba)的全資子公司，原計(jì)劃在穆爾賽德建設(shè)3臺(tái)AP1000機(jī)組，但未來的工作重點(diǎn)將是支持東芝出售穆爾賽德項(xiàng)目。

2.2 粒徑分析

取QT-NCs混懸液適量，加蒸餾水稀釋100倍，采用納米激光粒度儀測(cè)定平均粒徑及多分散指數(shù)（polydispersity index，PDI），平行測(cè)定3次，取其平均值。

2.3 工藝優(yōu)化

固定槲皮素的用量為40 mg；分別以HPMC E15、F127、甘草酸為穩(wěn)定劑，固定其用量為8 mg，通過單因素實(shí)驗(yàn)考察研磨時(shí)間、研磨轉(zhuǎn)速以及氧化鋯珠子的用量對(duì)QT-NCs平均粒徑和PDI的影響，結(jié)果見表1～3。

表1結(jié)果顯示，研磨轉(zhuǎn)速由500 r/min增至2000 r/min時(shí)，QT-NCs/HPMC E15的平均粒徑和PDI均逐步降低，但是繼續(xù)增大轉(zhuǎn)速未能進(jìn)一步降低粒徑，故確定研磨速度為2000 r/min；平均粒徑和PDI均隨著研磨時(shí)間的延長而降低，12 h時(shí)粒徑降至200 nm，因槲皮素經(jīng)長時(shí)間研磨易氧化降解，故選擇研磨時(shí)間12 h；研磨介質(zhì)從4 mL增加至5 mL對(duì)粒徑無顯著影響，但能降低PDI，但進(jìn)一步增加其用量，不能繼續(xù)降低PDI，故選擇氧化鋯珠子用量為5 mL。因此，QT-NCs/HPMC E15的制備工藝參數(shù)為研磨轉(zhuǎn)速2000 r/min、研磨時(shí)間12 h、氧化鋯珠子用量為5 mL。

表1 研磨轉(zhuǎn)速、時(shí)間及氧化鋯珠子用量對(duì)QT-NCs/HPMC E15的平均粒徑和PDI的影響(, n = 3)

與工藝11比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01process 11

表2 研磨轉(zhuǎn)速、時(shí)間及氧化鋯珠子用量對(duì)QT-NCs/F127的平均粒徑和PDI的影響(, n = 3)

與工藝3比較：**＜0.01，表3同

**< 0.01process 3, same as Table 3

表3 研磨轉(zhuǎn)速、時(shí)間及氧化鋯珠子用量對(duì)QT-NCs/GL的平均粒徑和PDI的影響(, n = 3)

為了得到與QT-NCs/HPMC E15相同粒徑的QT-NCs/F127和QT-NCs/GL，對(duì)兩者的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，結(jié)果見表2、3。結(jié)果顯示，QT-NCs/F127和QT-NCs/GL的粒徑和PDI均隨著研磨轉(zhuǎn)速的增加而降低，當(dāng)轉(zhuǎn)速為1500 r/min時(shí)，兩者的粒徑均已達(dá)到200 nm，且PDI接近0.20，故而不再繼續(xù)優(yōu)化工藝，因此，QT-NCs/F127和QT-NCs/GL的制備工藝參數(shù)相同，均為研磨轉(zhuǎn)速1500 r/min、研磨時(shí)間2 h、氧化鋯珠子用量為4 mL。

2.4 工藝確定及驗(yàn)證

按照“2.3”項(xiàng)下優(yōu)化的工藝制備3批QT-NCs，并測(cè)定其平均粒徑及PDI，結(jié)果見表4，顯示QT- NCs/F127、QT-NCs/GL和QT-NCs/HPMC E15平均粒徑均為200 nm，PDI約為0.20。

2.5 形態(tài)分析

取QT-NCs/F127、QT-NCs/GL和QT-NCs/HPMC E15適量，適當(dāng)稀釋后，滴于錫箔紙上，室溫下自然干燥，槲皮素直接粘于導(dǎo)電膠上，噴金處理后，于SEM下觀察其形態(tài)，結(jié)果見圖1。圖1-A顯示槲皮素呈大小不均勻的棒狀結(jié)構(gòu)，粒徑為5～20 μm；圖1-B～D顯示3種QT-NCs均呈短棒狀及不規(guī)則的顆粒狀，粒徑均為100～300 nm。

表4 QT-NCs的平均粒徑和PDI (, n = 3)

圖1 槲皮素原料藥 (A)、QT-NCs/HPMC E15 (B)、QT-NCs/ F127 (C)和QT-NCs/GL (D) 的SEM圖

2.6 X射線衍射（XRD）分析

取QT-NCs/F127、QT-NCs/GL和QT-NCs/HPMC E15分別置于?20 ℃冰箱凍存12 h后放入凍干機(jī)12 h，取出，即得其凍干粉。分別將上述凍干粉和槲皮素原料藥進(jìn)行XRD分析，工作條件：Cu靶，管壓40 kV，管電流25 mA，掃描速率2°/min，掃描范圍（2）3°～60°，結(jié)果見圖2。槲皮素在13°及27°處有明顯的衍射峰，QT-NCs/F127、QT-NCs/GL和QT-NCs/HPMC E15在此處也有特征衍射峰，但衍射峰形有所減小，這可能是穩(wěn)定劑的加入及研磨過程共同作用的結(jié)果[15-16]。

圖2 槲皮素原料藥 (A)、QT-NCs/GL (B)、QT-NCs/F127 (C)和QT-NCs/HPMC E15 (D)的XRD圖

2.7 體外溶出考察

分別稱取槲皮素原料藥和QT-NCs凍干粉（均含槲皮素3 mg），以250 mL含0.1%聚山梨酯80的磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）為溶出介質(zhì)[17]，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度為（37.0±0.5）℃，分別于投藥后1、3、5、10、20、30、60 min取樣1 mL，同時(shí)補(bǔ)充等溫等體積的溶出介質(zhì)，樣品溶液過0.22 μm微孔濾膜后，按以下的色譜條件[18]進(jìn)樣分析：色譜柱為InterSustain C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（59∶41），檢測(cè)波長375 nm，體積流量1.0 mL/min，柱溫30 ℃；進(jìn)樣量20 μL。

方法學(xué)考察結(jié)果顯示，槲皮素納米晶中的其他成分對(duì)槲皮素的測(cè)定無干擾，表明其專屬性良好；精密稱定槲皮素對(duì)照品2.5 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得質(zhì)量濃度為0.10 mg/mL的槲皮素對(duì)照品儲(chǔ)備液，取其槲皮素對(duì)照品儲(chǔ)備液，加甲醇依次稀釋制得質(zhì)量濃度分別為0.50、1.00、2.00、4.00、5.00、10.00、20.00 μg/mL的系列對(duì)照品溶液，按以上色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，得回歸方程＝60 492－5 940.8（2＝0.999 8，為槲皮素質(zhì)量濃度，為峰面積），表明槲皮素在0.50～20.00 μg/mL線性關(guān)系良好；儀器的精密度、樣品的穩(wěn)定性及方法重復(fù)性良好，RSD均小于2%；加樣回收率在97.23%～102.71%，RSD為1.94%；說明該方法可行。

按照上述色譜條件分析溶出樣品，計(jì)算累積溶出度并繪制累積溶出率曲線，結(jié)果見圖3。30 min時(shí)，槲皮素原料藥的累積溶出率為31.22%，而QT- NCs/F127、QT-NCs/ GL、QT-NCs/HPMC E15凍干粉的累積溶出率分別為74.90%、59.30%、53.65%，3種QT-NCs的累積溶出率均顯著優(yōu)于槲皮素原料藥，且呈現(xiàn)如下順序：QT-NCs/F127＞QT-NCs/GL＞QT-NCs/HPMC E15。

圖3 QT-NCs/HPMC E15、QT-NCs/F127、QT-NCs/GL和槲皮素原料藥的體外溶出曲線(, n = 3)

2.8 大鼠體內(nèi)口服藥動(dòng)學(xué)研究

2.8.1 色譜條件 色譜柱為InterSustain C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（55∶45）；體積流量1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長375 nm；進(jìn)樣量20 μL。

2.8.2 血漿樣品的處理[6,18]取大鼠血漿樣品200 μL，置1.5 mL離心管中，依次加入50 μL 22.60 μg/mL的山柰酚內(nèi)標(biāo)物溶液，25%鹽酸200 μL，渦旋90 s混勻，90 ℃水浴中反應(yīng)15 min，冷卻后加無水乙醇350 μL，渦旋90 s混勻，8000 r/min離心10 min，取上清液20 μL，按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。

2.8.3 對(duì)照品及內(nèi)標(biāo)的制備 取0.10 mg/mL槲皮素對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加甲醇稀釋制得質(zhì)量濃度40.00 μg/mL的槲皮素對(duì)照品溶液，備用。另取山柰酚對(duì)照品適量，精密稱定，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得質(zhì)量濃度為226.00 μg/mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，取適量，用甲醇稀釋為質(zhì)量濃度為22.60 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液，備用。

2.8.4 專屬性考察 將大鼠空白血漿、空白血漿加適量槲皮素對(duì)照品、大鼠給藥后血漿樣品，參照“2.8.2”項(xiàng)下方法處理（空白血漿內(nèi)標(biāo)溶液以同體積甲醇替代），按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件分析，記錄色譜圖。結(jié)果見圖4，空白血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)槲皮素的測(cè)定無干擾，表明方法專屬性良好。

2.8.5 線性關(guān)系考察 取200 μL空白血漿，精密加入不同質(zhì)量濃度的槲皮素對(duì)照品溶液適量，配制成質(zhì)量濃度為0.25、1.25、2.50、5.00、10.00、12.50 μg/mL的血漿對(duì)照品系列溶液，按“2.8.2”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以槲皮素質(zhì)量濃度（）為橫坐標(biāo)、槲皮素的峰面積與內(nèi)標(biāo)山奈酚的峰面積比值（）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為＝0.139 9＋0.016 8，2＝0.999 3。結(jié)果表明槲皮素在0.25～12.50 μg/mL線性關(guān)系良好。

2.8.6 精密度試驗(yàn) 配制1.25、5.00、12.50 μg/mL的低、中、高質(zhì)量濃度的血漿樣品，按“2.8.2”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，平行測(cè)定3次，計(jì)算日內(nèi)精密度，連續(xù)測(cè)定3 d，計(jì)算日間精密度，結(jié)果表明日內(nèi)精密度RSD分別為3.35%、1.22%、0.57%；日間精密度RSD分別為2.59%、0.40%、0.38%；結(jié)果表明精密度良好。

圖4 空白血漿(A)、空白血漿＋槲皮素對(duì)照品(B)、含藥血漿(C)的專屬性考察HPLC圖

2.8.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 配制1.25、5.00、12.50 μg/mL的低、中、高質(zhì)量濃度的血漿樣品，按“2.8.2”項(xiàng)下方法處理后，分別于室溫放置0、2、4、8、12、24 h，再按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算槲皮素濃度，結(jié)果顯示槲皮素質(zhì)量濃度的RSD分別為1.02%、1.48%、1.94%，表明血漿樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8.8 提取回收率試驗(yàn) 配制含1.25、5.00、12.50 μg/mL的低、中、高質(zhì)量濃度的血漿樣品，每個(gè)質(zhì)量濃度平行制備3份，按“2.8.2”項(xiàng)下方法處理后，按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件分析。取與上述3種質(zhì)量濃度相同的槲皮素對(duì)照品溶液，按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件分析，以槲皮素對(duì)照品溶液的峰面積為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算槲皮素在相應(yīng)質(zhì)量濃度的血漿樣品中的提取回收率。結(jié)果表明低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度的血漿樣品中槲皮素的平均提取回收率分別為96.24%、96.17%、97.15%，RSD分別為3.28%、1.04%、0.56%，符合要求。

2.8.9 藥動(dòng)學(xué)研究 取雄性SD大鼠24只，分為4組：QT-NCs/F127組、QT-NCs/E15組、QT-NCs/GL組和槲皮素原料藥組，每組6只，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h。大鼠分別ig QT-NCs/F127、QT-NCs/E15、QT-NCs/GL混懸液或槲皮素原料藥混懸液，劑量100 mg/kg，然后分別于給藥后0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24 h眼眶取血0.5 mL，置于1.5 mL肝素鈉浸潤過的離心管內(nèi)，5000 r/min離心10 min分離血漿，按照“2.8.2”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.8.1”項(xiàng)下色譜條件分析，計(jì)算槲皮素的血藥濃度，繪制藥-時(shí)曲線，結(jié)果見圖5；采用DAS 2.0軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，結(jié)果見表5。

由圖5可知，大鼠口服QT-NCs/F127、QT-NCs/ E15和QT-NCs/GL混懸液后，槲皮素血藥濃度均顯著高于槲皮素原料藥組。由表5可知，與槲皮素原料藥組比較，QT-NCs/F127、QT-NCs/GL和QT-NCs/ HPMC E15 3組的AUC0～t和max均顯著增加（＜0.01）；3組QT-NCs的AUC0～t呈現(xiàn)如下順序QT- NCs/HPMC E15＞QT-NCs/GL＞QT-NCs/F127，而max則呈相反順序。此外，QT-NCs/HPMC E15的MRT0～t、max以及1/2z均顯著高于QT-NCs/F127 （＜0.05、0.01）。

圖5 QT-NCs/HPMC E15、QT-NCs/F127、QT-NCs/GL和槲皮素原料藥的藥-時(shí)曲線(, n = 6)

表5 QT-NCs/HPMC E15、QT-NCs/F127、QT-NCs/GL和槲皮素原料藥的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(, n = 6)

與槲皮素原料藥組比較：**＜0.01；與QT-NCs/HPMC E15組比較：#＜0.05##＜0.01

**< 0.01raw quercetin group;#< 0.05##< 0.01QT-NCs/HPMC E15 group

3 討論

課題組前期已經(jīng)研究了粒徑對(duì)QT-NCs體外溶出及口服吸收的影響[18-19]。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討穩(wěn)定劑對(duì)QT-NCs體外溶出及口服吸收的影響。根據(jù)不同穩(wěn)定劑具有的生物活性[8]，預(yù)實(shí)驗(yàn)考察了SDS、PVP K30、F127、HPMC E15及甘草酸等多種穩(wěn)定劑對(duì)QT-NCs平均粒徑及PDI的影響，結(jié)果顯示只有F127、HPMC E15和甘草酸可以制備得到相對(duì)穩(wěn)定且粒徑均一QT-NCs。此外，為了排除粒徑、形態(tài)、晶型等因素對(duì)研究結(jié)果的影響，本研究以粒徑及PDI為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用相同的介質(zhì)研磨法制備QT-NCs/F127、QT-NCs/HPMC E15、QT-NCs/GL，并通過單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化工藝，以獲得相同粒徑的QT-NCs，并通過SEM及XRD確認(rèn)其形態(tài)及晶型的相似性。

體外溶出結(jié)果顯示，QT-NCs/HPMC E15、QT-NCs/F127和QT-NCs/GL凍干粉均顯著改善了QT的累積溶出度；這主要是因?yàn)樗幬锪降娘@著減小可以增加其比表面積及表觀溶解度，同時(shí)降低其擴(kuò)散層厚度，從而有利于藥物溶出[6]。QT-NCs/ HPMC E15、QT-NCs/F127和QT-NCs/GL 3者累積溶出度存在差異，呈現(xiàn)如下順序：QT-NCs/F127＞QT-NCs/GL＞QT-NCs/HPMC E15，這主要是因?yàn)榉€(wěn)定劑增溶能力及維持QT-NCs凍干粉再分散能力的不同導(dǎo)致。QT-NCs溶出度的測(cè)定使用的是其凍干粉，而在QT-NCs的凍干過程沒有額外添加凍干保護(hù)劑，主要依靠穩(wěn)定劑的保護(hù)作用；由于穩(wěn)定劑對(duì)QT-NCs凍干保護(hù)作用不同，導(dǎo)致其凍干粉的再分散性不同，溶出存在差異[20]。此外，不同穩(wěn)定劑對(duì)藥物的增溶能力的差異也是導(dǎo)致QT-NCs體外溶出的不同原因。

藥動(dòng)學(xué)結(jié)果顯示，QT-NCs/HPMC E15、QT- NCs/F127和QT-NCs/GL的口服生物利用度明顯優(yōu)于槲皮素原料藥混懸液，槲皮素納米化后生物利用度的提高可以歸因于其溶出度的改善、納米粒的腸道黏附及整體腸吸收[18-19]。QT-NCs/HPMC E15、QT-NCs/F127和QT-NCs/GL 3者的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)存在顯著差異，表明穩(wěn)定劑種類可能會(huì)影響藥物的口服吸收及體內(nèi)駐留，這與所選穩(wěn)定劑對(duì)外排轉(zhuǎn)運(yùn)體活性及細(xì)胞滲透性等的影響有關(guān)[8,21]；HPMC E15較好黏膜黏附能力[11]，可以增加QT-NCs在小腸壁的黏附，延長滯留時(shí)間，從而顯著增加QT-NCs的小腸吸收；F127及甘草酸代謝產(chǎn)物甘草次酸均具有P-gp抑制作用[8,22]，且甘草酸還可以增強(qiáng)細(xì)胞膜的滲透性[22]，3種穩(wěn)定劑對(duì)外排轉(zhuǎn)運(yùn)體活性及細(xì)胞滲透性作用的強(qiáng)弱可能是其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)存在差異的主要原因。此外，QT-NCs/HPMC E15、QT-NCs/F127和QT-NCs/GL的AUC0～t呈現(xiàn)出與體外溶出度相反的順序：QT-NCs/HPMC E15＞QT-NCs/GL＞QT- NCs/F127，這主要是因?yàn)槿艹龆葴y(cè)試使用的是凍干粉，由于未加凍干保護(hù)劑，QT-NCs凍干后粒徑已經(jīng)不一致；且溶出度主要受QT-NCs凍干粉的粒徑、3種穩(wěn)定劑的增溶能力及及其維持QT-NCs凍干粉再分散能力的影響。而藥動(dòng)學(xué)使用的是粒徑一致QT-NCs混懸液，其吸收差異受藥物溶出和穩(wěn)定劑活性的雙重影響，因此3種QT-NCs的溶出和AUC0～t表現(xiàn)出不同的順序。

綜上，納米晶可以顯著改善難溶性天然產(chǎn)物槲皮素體外溶出和口服生物利用度。穩(wěn)定劑種類可以顯著影響槲皮素的體外溶出行為與口服吸收及體內(nèi)駐留。然而，本研究僅探索了3種穩(wěn)定劑的對(duì)一種模型藥物納米晶的體外溶出及口服藥動(dòng)學(xué)的影響。未來可以研究更多穩(wěn)定劑對(duì)不同難溶性藥物納米晶體內(nèi)外行為的影響，以探索穩(wěn)定劑種類對(duì)難溶性藥物納米晶體內(nèi)外行為影響的規(guī)律。此外，還可通過藥物與穩(wěn)定劑的相互作用及穩(wěn)定劑對(duì)外排轉(zhuǎn)運(yùn)體活性及細(xì)胞膜滲透性等的影響研究，探索穩(wěn)定劑種類對(duì)難溶性藥物納米晶內(nèi)外行為的影響機(jī)制，以更好的推動(dòng)納米晶制劑的設(shè)計(jì)與開發(fā)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effect of different stabilizers ondissolution and oral pharmacokinetics of quercetin nanocrystals in rats

HU Fei1, 2, SHEN Cheng-ying2, SHEN Bao-de2, ZHU Wei-feng1, YUAN Hai-long2

1. College of Pharmacy, Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330004, China 2. Department of Pharmacy, Air Force Medical Center, PLA, Beijing 100142, China

To prepare quercetin nanocrystals (QT-NCs) modified by different stabilizers and explore the effects of different stabilizers ondissolution and oral pharmacokinetics of QT-NCs.QT-NCs stabilized by three types of stabilizers including hydroxypropyl methyl cellulose E15 (HPMC E15), pluronic F127 (F127), and glycyrrhizin acid (GL) were respectively prepared by wet media milling method, namely QT-NCs/HPMC E15, QT-NCs/F127, and QT-NCs/GL, and then characterized by morphology and crystal state. Their dissolutionand oral pharmacokinetics were also investigated.The particle size of QT-NCs modified by three types of stabilizers were about 200 nm with PDI was about 0.20. Scanning electron microscopy showed that QT-NCs were all short rods and irregular particles, while X-ray diffraction results showed that QT-NCs existed in crystalline state. Thedissolution results showed that the cumulative dissolution of QT-NCs modified by three types of stabilizers were significantly improved as compared to QT, and the cumulative dissolution rate within 30 min was in an order of QT-NCs/F127 (74.90%) > QT-NCs/GL (59.30%) > QT-NCs/HPMC E15 (53.65%). The pharmacokinetic results showed that, compared with quercetin, the oral bioavailability of QT-NCs modified with three types of stabilizers were significantly enhanced, and their AUC0—twas in the following order: QT-NCs/E15 (78.09 ± 6.05) mg?h/L > QT-NCs/GL (61.72 ± 7.59) mg?h/L > QT-NCs/ F127 (49.94 ± 9.30) mg?h/L.NCs can significantly improve thedissolution and oral bioavailability of poorly soluble drugs, and the stabilizer’s types significantly affect thedissolution and oral pharmacokinetics of NCs.

nanocrystals; stabilizers; quercetin;dissolution; pharmacokinetics;hypromellose; pluronic; glycyrrhizic acid

R283.6

A

0253 - 2670(2021)21 - 6485 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.21.005

2021-06-04

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81803741）；國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81873092）

胡 菲（1997—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幮滦徒o藥系統(tǒng)研究。Tel: 17779140130 E-mail: 1256719791@qq.com

朱衛(wèi)豐，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幗?jīng)皮給藥新劑型與新技術(shù)研究。Tel: (0791)87118614 E-mail: zwf0322@126.com

袁海龍，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幮滦徒o藥系統(tǒng)研究。Tel: (010)66928505 E-mail: yhlpharm@126.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]