賈冰 喬世巖

新生兒溶血病（HDN）在臨床較為常見，常由母嬰血型不合而導致的分娩或妊娠階段母親IgG 抗體進入胎兒體內，進而破壞胎兒正常紅細胞結構，導致其出現(xiàn)免疫性反應而造成的溶血[1，2]。一般情況下，HDN 患兒血型多為A 型或B 型，且母親血型為O 型，患兒體內存在母親抗體，輸血時無法依照常規(guī)方式同型輸血，避免HDN 患兒溶血癥狀加重[3，4]。因此，輸血前須對HDN 患兒進行溶血三項和紅細胞不規(guī)則抗體的篩查，保證新生兒輸血安全。微柱凝膠檢測法（MGCT）是近年來臨床中應用較廣的檢測技術，但其在HDN 患兒輸血前的應用鮮有報道[5]。因而對我院收治的ABO 血型系統(tǒng)與血型不規(guī)則抗體引起的新生兒溶血?。ˋBO-HDN）患兒作為研究對象，分析MGCT 在檢測直接抗球蛋白、紅細胞不規(guī)則抗體中的應用價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2016年1月～2020年2月我院收治的200 例ABO-HDN 患兒作為研究對象，其中男107 例、女93 例，年齡1～5.5d，體質量2.50～3.58kg。依次采用兩種不同檢驗方法對相關指標進行檢測，采用試管法檢驗資料設為對照組，采用MGCT 法檢驗資料設為觀察組。該研究經醫(yī)院倫理委員會審批通過（編號：201601002）。

1.2 入組及排除標準

1.2.1 入組標準 ①無家族心臟病史；②無藥物過敏史；③無其他血液科疾?。虎芑純耗赣H血型為O 型；⑤患兒監(jiān)護人知情同意并簽字。

1.2.2 排除標準 ①存在原發(fā)性免疫缺陷性疾??；②存在肝腎心等器官異常疾病；③患兒監(jiān)護人要求退出該研究。

1.3 方法

1.3.1 樣本準備 用EDTA 抗凝2ml 離心分離血清，使用生理鹽水對抗凝全血標本進行洗滌，后分別配置成0.8%、3%～5%紅細胞懸液，剩余1ml 紅細胞配成壓積紅細胞。

1.3.2 直接抗人球蛋白試驗 觀察組采用抗人球蛋白卡（長春博訊），加入0.8%患兒紅細胞懸液50μl，置入離心機離心1min 觀察結果。對照組向標記試管內加入3%～5%紅細胞懸液1 滴，再加入1 滴特異性抗人球蛋白血清，混勻、離心，最后觀察結果。

1.3.3 游離抗體試驗 對抗人球蛋白卡進行標記，向各孔中加入0.8%ABO 標準紅細胞懸液50μl，加入新生兒血清50μl，后孵育15min，并離心處理觀察離心結果。對照組取試管并標注，向其中加入新生兒血清2 滴，加入3%～5%紅細胞懸液1 滴，后37℃水浴60min。然后加入廣譜抗IgG 抗人球蛋白血清1 滴，最后離心處理觀察結果，若出現(xiàn)凝集則判定抗體檢測陽性。

1.3.4 紅細胞不規(guī)則抗體檢測 觀察組分離血漿，并在Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ孔中加入血漿50μl，然后對應加入篩查譜細胞50μl，37℃水浴15min 后離心取出，依照譜紅細胞反應格局判定結果，紅細胞凝集或出現(xiàn)溶血則判定為陽性；若紅細胞完全沉降于凝膠管底部，則判定為陰性。

1.3.5 放散液中抗體檢測 采用酸放散法制備放散液，然后采用釋放實驗檢測其中抗體。取大試管向其中加入1ml 新生兒壓積紅細胞及生理鹽水，56℃水浴7min，后離心5min，分離上清放散液備用。觀察組對抗人球蛋白卡標記，加入0.8%紅細胞懸液及放散液各50μl，后孵育處理15min，再離心處理10min，若O 孔出現(xiàn)陽性則表明釋放ABO 外抗體，另取抗人球蛋白卡，加入抗體篩選細胞后加入50μl放散液對不規(guī)則抗體篩選。對照組取試管加入3%～5%紅細胞懸液，置入37℃水浴60min，然后使用生理鹽水洗滌3 次，最后加入1 滴廣譜抗IgG 抗人球蛋白血清，離心觀察結果。

1.4 統(tǒng)計學方法本研究采用SPSS 19.0 軟件進行分析，采用均數(shù)±標準差及百分率表示計量資料和計數(shù)資料，行t檢驗及卡方檢驗分析組間數(shù)據(jù)差異，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不規(guī)則抗體檢測結果觀察組不規(guī)則抗體陽性檢出率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=5.296，P<0.05），見表1。

表1 不規(guī)則抗體檢測結果（n）

2.2 直接抗球蛋白檢測結果觀察組直接抗球蛋白陽性檢出率為97.00%（194/200）高于對照組的66.50%（133/200），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=31.176，P=0.000）。

2.3 游離抗體檢測結果觀察組游離抗體檢測結果陽性率為93.50%（187/200）高于對照組的48.50%（97/200），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=49.174，P=0.000）。

2.4 釋放實驗抗體檢測結果觀察組抗體放散檢測陽性率94.00%（188/200）高于對照組的43.50%（87/200），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=59.351，P=0.000）。

3 討論

HDN 是臨床中較為常見的疾病，該病是由母嬰血型不合而導致的母親體內產生血型抗體，其抗體與胎兒血型抗原不匹配，可通過胎盤進入胎兒體內導致免疫性溶血的出現(xiàn)[6]。ABO-HDN 的臨床發(fā)病率居高不下，有研究結果顯示導致ABO-HDN 的主要原因是母嬰血型不合[7]。一般情況下，當母體內的血型IgG 抗體通過胎盤屏障進入胎兒血液，可導致胎兒紅細胞破壞，繼發(fā)高膽紅素血癥、溶血、貧血[8]，這是其主要發(fā)病機制。輸血是現(xiàn)階段臨床治療HDN 的主要方法，為患兒實施輸血前應加強檢驗工作，但臨床樣本數(shù)較多，且可能出現(xiàn)檢驗不合理的情況，因而導致校驗準確率低，出現(xiàn)誤診及漏診[9，10]。一般情況下，在對HDN 患兒進行輸血治療時依照常規(guī)方式操作干預，在對患兒進行輸血干預前可對應性檢測母體內抗體水平，避免出現(xiàn)溶血反應[11]。在對HDN 患兒進行輸血干預前采取合理科學的血液檢測方案對患兒及母體血液進行評估，具有十分重要的意義[12，13]。MGCT 是臨床應用較為廣泛的血液檢測方法，具有簡單、便捷的特點，且與傳統(tǒng)檢驗計數(shù)相比，可減少紅細胞洗滌等步驟，檢測結果的準確度較高，臨床應用價值較高[14，15]。

本研究采用MGCT 對ABO-HDN 患兒溶血三項、紅細胞不規(guī)則抗體進行檢測，這對ABO-HDN患兒具有重要價值。本研究觀察組直接抗球蛋白陽性檢出率為97.00%高于對照組的66.50%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；觀察組游離抗體檢測結果陽性率為93.50%高于對照組的48.50%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；表明采用MGCT 對ABO-HDN患兒輸血前進行檢測可有效提高直接抗球蛋白及游離抗體檢測陽性率。此外，觀察組患兒檢測的不規(guī)則抗體及抗體放散檢出率明顯高于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。不規(guī)則抗體也能導致患兒出現(xiàn)免疫溶血反應、嚴重輸血反應，且抗體以IgG為主，不規(guī)則抗體抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、抗-D 均屬于IgG 抗體，其屬于溫抗體類型，長度約24nm，當發(fā)生妊娠或輸血時，可刺激機體免疫產生相關抗體，并使紅細胞發(fā)生致敏反應。輸血過程產生的IgG 效價與發(fā)生輸血反應的嚴重程度直接相關，而且IgG 抗體經常誘發(fā)遲發(fā)性溶血性輸血反應。

綜上所述，采用MGCT 對ABO-HDN 患兒溶血三項、紅細胞不規(guī)則抗體進行檢測，具有檢出率高的優(yōu)點。受臨床樣本數(shù)較少的限制，更深入的研究有待后續(xù)進行。