郝 兆,王艷紅,德 吉,郭小芳

西藏大學(xué)理學(xué)院, 拉薩 850000

湖泊是陸地水圈的重要組成部分,也是地表各圈層彼此相互作用的節(jié)點(diǎn),在調(diào)節(jié)區(qū)域氣候變化、維系區(qū)域生態(tài)平衡以及促進(jìn)區(qū)域經(jīng)濟(jì)發(fā)展等方面發(fā)揮著重要作用[1]。我國(guó)幅員遼闊,湖泊數(shù)量多、類型全、分布廣,全國(guó)面積大于1.0 km2的湖泊2759個(gè),總面積91019.6 km2,被認(rèn)為是世界上湖泊生態(tài)類型最為豐富的國(guó)家之一[1-2]。微生物群落作為水生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分,是驅(qū)動(dòng)湖泊等水體地球化學(xué)循環(huán)和生態(tài)系統(tǒng)運(yùn)行的關(guān)鍵[3]。大量研究表明,微生物群落不僅是生態(tài)系統(tǒng)的功能因子,其群落結(jié)構(gòu)及多樣性還會(huì)對(duì)環(huán)境變化做出迅速響應(yīng),可以作為衡量湖泊生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的重要指標(biāo)[4-7]。由于水生生態(tài)系統(tǒng)中99%以上的微生物尚未被培養(yǎng)出,這就導(dǎo)致絕大多數(shù)的微生物還未被人們所認(rèn)識(shí)[8]。高通量測(cè)序技術(shù)因其不依賴微生物的純培養(yǎng),可以對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)做出更加準(zhǔn)確的描述[9]。目前,高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)的研究方法已經(jīng)比較成熟,國(guó)內(nèi)外利用高通量測(cè)序技術(shù)探討湖庫(kù)微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性的研究陸續(xù)開(kāi)展,多數(shù)研究表明湖泊微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性主要受環(huán)境因素影響,如溫度、溶解氧、pH、電導(dǎo)率以及湖泊營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)等[10-17]。但已有研究大多針對(duì)湖泊細(xì)菌群落,對(duì)真菌群落研究相對(duì)較少。

青藏高原平均海拔在4000 m以上,是全球海拔最高、面積最大的陸地生態(tài)系統(tǒng),素有“世界屋脊”、“亞洲水塔”之稱[18]。青藏高原湖泊資源豐富,面積在1.0 km2以上的湖泊1091個(gè),合計(jì)總面積44993.3 km2,分別占全國(guó)湖泊總數(shù)量和總面積的39.5%和49.5%[2]。獨(dú)特的地理單元及氣候條件使得高原湖泊孕育著豐富的微生物資源[19]。羊卓雍錯(cuò)流域位于西藏南部,流域東西向長(zhǎng)144 km,南北向?qū)?00 km,流域面積6100 km2,流域內(nèi)分布著數(shù)個(gè)自然湖泊,常年的自然演變以及人類活動(dòng)使得各湖泊間水體理化因子存在較大差異,是研究高原湖泊水體微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性的理想場(chǎng)所[20-21]。長(zhǎng)期以來(lái),由于地理位置的限制,對(duì)羊卓雍錯(cuò)流域生物資源的研究大多集中于鳥(niǎo)類及植物方面[22-26],對(duì)微生物的研究相對(duì)較少,僅見(jiàn)于湖岸放線菌生防潛力和多樣性研究以及部分湖區(qū)沉積物中細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)垂直分布研究[27-28]。開(kāi)展羊卓雍錯(cuò)水體真菌群落結(jié)構(gòu)及多樣性研究能夠?yàn)檠蜃坑哄e(cuò)環(huán)境保護(hù)以及青藏高原微生物多樣性研究提供理論依據(jù),并為羊卓雍錯(cuò)水體真菌資源的開(kāi)發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)域及水樣采集

羊卓雍錯(cuò)位于青藏高原南部,西藏自治區(qū)山南地區(qū)浪卡子縣境內(nèi),是雅魯藏布江南岸和喜馬拉雅山北麓最大的封閉性內(nèi)陸咸水湖,與納木錯(cuò)、瑪旁雍錯(cuò)并稱為西藏三大圣湖[29]。羊卓雍錯(cuò)屬高原堰塞湖,湖泊形狀很不規(guī)則,湖岸曲折蜿蜒,多年的自然演化使得其主湖區(qū)附近獨(dú)立出空母錯(cuò)、沉錯(cuò)以及巴糾錯(cuò)3個(gè)小湖。目前,主湖區(qū)西側(cè)經(jīng)河道與空母錯(cuò)相連,空母錯(cuò)東側(cè)經(jīng)河道與沉錯(cuò)相連[29]?？漳稿e(cuò)主要由冰川融水補(bǔ)給,水位較高,羊卓雍錯(cuò)、沉錯(cuò)以及巴糾錯(cuò)主要以降水補(bǔ)給為主,冰川融水補(bǔ)給相對(duì)較少[21]。羊卓雍錯(cuò)湖面海拔為4440 m,湖水平均面積為643.98 km2,平均周長(zhǎng)為709.41 km,水深一般為30—40 m,最深可達(dá)59 m,湖水儲(chǔ)量約為160×108m3[30-31]。羊卓雍錯(cuò)地處喜馬拉雅山北坡雨影區(qū),屬藏南山地灌叢草原半干旱氣候,流域年均溫2.9 ℃,年均降水363.4 mm,5—9月降水量占全年降水量的90%以上[21,32]。

圖1 羊卓雍錯(cuò)流域水體采集樣點(diǎn)分布Fig.1 Distribution of sampling sites in Yamzhog Yumco Lake

表1 羊卓雍錯(cuò)水體采集樣點(diǎn)概況Table 1 General situation of sampling sites in Yamzhog Yumco Lake

1.2 理化性質(zhì)測(cè)定

1.3 DNA的提取和高通量測(cè)序

將冷凍保存的樣品送往北京諾禾致源科技股份有限公司。DNA的提取采用CTAB法[33],利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的純度和濃度。采用帶Barcode的真菌ITS1區(qū)引物：ITS2- 2043R(5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC- 3′)、ITS5- 1737F(5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG- 3′)以及高效高保真酶進(jìn)行PCR。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物使用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),根據(jù)PCR產(chǎn)物濃度進(jìn)行等量混樣,充分混勻后使用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),目標(biāo)條帶使用Qiagen公司的膠回收試劑盒回收產(chǎn)物。使用TruSeqTMDNA PCR-Free Sample Preparation Kit進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建,構(gòu)建好的文庫(kù)經(jīng)過(guò)Qubit和Q-PCR定量,文庫(kù)合格后使用NovaSeq 6000進(jìn)行上機(jī)測(cè)序。

1.4 數(shù)據(jù)分析

根據(jù)Barcode序列和引物序列從高通量數(shù)據(jù)中拆分出各樣本數(shù)據(jù),截去Barcode和引物序列后使用FLASH V1.2.7軟件對(duì)序列進(jìn)行拼接。拼接得到的原始Tags數(shù)據(jù)(Raw Tags)使用 Qiime V1.9.1軟件進(jìn)行過(guò)濾。使用Uparse V7.0.1001軟件對(duì)過(guò)濾后的數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類,以97%的一致性將序列聚類成為可操作分類單元(OTU,operational taxonomic units),使用 Qiime V1.9.1軟件中的Blast方法結(jié)合Unit V7.2數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行物種注釋分析,最后以樣本中最小數(shù)據(jù)量為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行均一化處理。

基于均一化處理后的OTU數(shù)據(jù),使用 Qiime V1.9.1軟件進(jìn)行α-多樣性的計(jì)算。相關(guān)性分析以及差異性分析采用SPSS 20.0軟件的Pearson相關(guān)性系數(shù)法和單因素方差分析(ANOVA),多重比較分析使用Duncan檢驗(yàn)法,完全連接聚合聚類、非度量多維尺度分析以及ANOSIM檢驗(yàn)使用R 4.0.1軟件進(jìn)行,冗余分析使用CANOCO 5軟件進(jìn)行,繪圖使用R 4.0.1軟件以及Origin 2019軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 羊卓雍錯(cuò)水體理化性質(zhì)

圖2 羊卓雍錯(cuò)各樣點(diǎn)水體理化因子Fig.2 Aquatic environmental factors of different sites in Yamzhog Yumco Lake

各區(qū)域理化因子差異性分析顯示(圖3),就水體pH值而言,羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)和羊卓雍錯(cuò)湖心區(qū)顯著高于空母錯(cuò)沿岸區(qū)和沉錯(cuò)沿岸區(qū)；就EC、TDS以及鹽度而言,羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)及羊卓雍錯(cuò)湖心區(qū)均顯著高于沉錯(cuò)沿岸區(qū),沉錯(cuò)沿岸區(qū)均顯著高于空母錯(cuò)沿岸區(qū)；就TP而言,空母錯(cuò)沿岸區(qū)及沉錯(cuò)沿岸區(qū)顯著高于羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)；其他理化因子在各區(qū)域間則沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。

圖3 羊卓雍錯(cuò)各區(qū)域水體理化因子差異性分析Fig.3 Aquatic environmental factors of different regions in Yamzhog Yumco LakeCY: 羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū) Coastal area of Yamzhog Yumco Lake; CK: 空母錯(cuò)沿岸區(qū) Coastal area of Kongmo Co Lake; CC:沉錯(cuò)沿岸區(qū) Coastal area of Chen Co Lake; YC: 羊卓雍錯(cuò)湖心區(qū) Yamzhog Yumco Lake center; 不同字母代表不同區(qū)域間在P<0.05水平上差異顯著

2.2 羊卓雍錯(cuò)水體浮游真菌多樣性特征

由表2可知,從羊卓雍錯(cuò)各樣點(diǎn)水體中共檢測(cè)到4649個(gè)OTU,其中4號(hào)樣點(diǎn)OTU數(shù)量較多,而9號(hào)樣點(diǎn)較少。各樣本Coverage指數(shù)均在99%以上,Coverage指數(shù)與各樣點(diǎn)稀疏曲線(圖4)均表明,本次研究的測(cè)序深度已達(dá)到較高水平,能夠代表樣本中微生物的真實(shí)情況。分析豐富度指數(shù)和多樣性指數(shù)可以發(fā)現(xiàn),Ace指數(shù)與Chao 1指數(shù)擁有相似的變化趨勢(shì),均表明7號(hào)、5號(hào)、4號(hào)樣點(diǎn)水體真菌豐富度較高而9號(hào)樣點(diǎn)較低。Shannon指數(shù)顯示,4號(hào)與7號(hào)樣點(diǎn)水體真菌多樣性最高,9號(hào)樣點(diǎn)多樣性則最低。Simpson指數(shù)表明水體真菌多樣性最高的為7號(hào)和4號(hào)樣點(diǎn),水體真菌多樣性最低的為8號(hào)樣點(diǎn)。各區(qū)域差異性分析顯示,羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)(CY)OTU數(shù)量顯著高于羊卓雍錯(cuò)湖心區(qū)(YC)(P<0.05),其他指數(shù)在不同區(qū)域間的差異則不顯著(P>0.05)。

圖4 羊卓雍錯(cuò)水體真菌在97%水平上的稀疏曲線Fig.4 Rarefaction curves of aquatic fungal samples in Yamzhog Yumco Lake at cutoff level of 97%OTU: 可操作分類單元 Operational taxonomic units

表2 羊卓雍錯(cuò)水體真菌α-多樣性指數(shù)Table 2 The α-diversity indexes of aquatic fungal in Yamzhog Yumco Lake

2.3 羊卓雍錯(cuò)水體真菌群落結(jié)構(gòu)組成

對(duì)各OTU代表序列進(jìn)行物種注釋,對(duì)門水平及屬水平下的物種進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),由于當(dāng)前數(shù)據(jù)庫(kù)的局限性,本實(shí)驗(yàn)中真菌群落較多OTU屬未知類群,相似結(jié)果在其他研究中也有出現(xiàn)[11,16,34]。1—10號(hào)樣點(diǎn)門水平下未知類群所占的比例分別為32.1%、77.3%、51.5%、46.6%、86.5%、81.2%、45.1%、30.3%、94.4%、97.3%,屬水平下未知類群所占的比例分別為52.2%、83.7%、79.7%、78.1%、96.4%、98.0%、66.8%、41.4%、97.1%、98.6%。為更直觀體現(xiàn)各樣本相對(duì)豐度較高的門類與屬類及其比例,選取門水平下除未知類群外的物種以及屬水平下除未知類群外相對(duì)豐度排名前10的物種的相對(duì)豐度生成柱狀堆積圖,結(jié)果如圖5所示。

羊卓雍錯(cuò)各樣點(diǎn)水體已注釋真菌分屬于子囊菌門(Ascomycota)、被孢霉門(Mortierellomycota)、擔(dān)子菌門(Basidiomycota)、壺菌門(Chytridiomycota)、毛霉菌門(Mucoromycota)、羅茲菌門(Rozellomycota)、球囊菌門(Glomeromycota)和捕蟲霉亞門(Zoopagomycota)。由圖5可知羊卓雍錯(cuò)水體已注釋真菌相對(duì)豐度最高的門類為子囊菌門(Ascomycota),在各樣點(diǎn)相對(duì)豐度占比分別為12.8%、26.6%、72.6%、16.9%、47.2%、80.1%、54.4%、90.3%、87.1%、63.0%；其次為被孢霉門(Mortierellomycota),在各樣點(diǎn)相對(duì)豐度占比分別為52.4%、13.7%、5.3%、33.1%、2.1%、0.9%、0.3%、0.1%、2.5%、1.8%；擔(dān)子菌門(Basidiomycota)相對(duì)豐度也較高,在各樣點(diǎn)相對(duì)豐度占比分別為7.0%、51.1%、4.1%、12.2%、32.9%、15.3%、32.4%、5.4%、4.0%、21.5%。由真菌屬水平柱狀堆積圖可以看出(圖5),Alternaria相對(duì)豐度最高,集中表現(xiàn)在5號(hào)、8號(hào)以及9號(hào)樣點(diǎn),其值均在78%以上。其次為Mortierella,集中表現(xiàn)在1號(hào)和4號(hào)樣點(diǎn),其值分別為74.5%和80.6%。2號(hào)、3號(hào)、6號(hào)、7號(hào)樣點(diǎn)中相對(duì)豐度較高的屬分別為Dioszegia、Xalocoa、Russula、Cyberlindnera,其值分別為65.0%、40.3%、42.0%以及55.2%。10號(hào)樣點(diǎn)真菌屬水平分布則較為均勻,Alternaria、Cyberlindnera以及Helicoma均具有較高的相對(duì)豐度。

圖5 各樣點(diǎn)水體真菌在門水平及屬水平物種分布柱狀堆積圖Fig.5 The relative percent contribution of aquatic fungal community at the phyla level and genus level for the different sitesZoopagomycota: 捕蟲霉亞門; Rozellomycota: 羅茲菌門; Mucoromycota: 毛霉菌門; Mortierellomycota: 被孢霉門; Glomeromycota: 球囊菌門; Chytridiomycota: 壺菌門; Basidiomycota: 擔(dān)子菌門; Ascomycota: 子囊菌門; Trapelia: 褐邊衣屬; Helicoma: 蝸孢屬; Russula: 紅菇屬; Dioszegia: 未命名; Trametes: 栓菌屬; Xalocoa: 未命名; Bifiguratus: 未命名; Cyberlindnera: 塞伯林德納氏酵母屬; Mortierella: 被孢霉屬; Alternaria: 鏈格孢屬

使用Venn圖來(lái)展示各樣點(diǎn)及各區(qū)域共有和特有OTU數(shù)量,結(jié)果如圖6所示,雖然各湖區(qū)間有水道連接,但共有OTU數(shù)量?jī)H為36。各區(qū)域Venn圖顯示,羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)(CY)OTU數(shù)最多,為961；其次為沉錯(cuò)沿岸區(qū)(CC),為667；空母錯(cuò)沿岸區(qū)(CK)OTU數(shù)也較多,為610；羊卓雍錯(cuò)湖心區(qū)OTU數(shù)則最少,為480。各區(qū)域共有OTU數(shù)為197,分別占羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)(CY)OTU數(shù)的20.5%,空母錯(cuò)沿岸區(qū)(CK)OTU數(shù)的32.3%,沉錯(cuò)沿岸區(qū)(CC)OTU數(shù)的29.5%,羊卓雍錯(cuò)湖心區(qū)(YC)OTU數(shù)的41.0%。各區(qū)域間共有OTU數(shù)顯示,羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)(CY)與沉錯(cuò)沿岸區(qū)(CC)共有OTU比例最高,占兩區(qū)域OTU數(shù)的46.0%；其次為空母錯(cuò)沿岸區(qū)(CK)與沉錯(cuò)沿岸區(qū)(CC),占兩區(qū)域OTU數(shù)的45.4%；空母錯(cuò)沿岸區(qū)(CK)與羊卓雍錯(cuò)湖心區(qū)(YC)共有OTU比例則最低,為32.0%。

圖6 各樣點(diǎn)及各區(qū)域水體真菌OTU水平Venn圖Fig.6 Venn diagram of aquatic fungal OTU levels in different sites and different regions

采用基于OTU水平Bray-Curtis距離的非度量多維尺度(NMDS,non-metric multidimensional scaling)分析以及采樣點(diǎn)完全連接聚合聚類(completelinkage agglomerative clustering)得到不同湖區(qū)水體真核微生物群落結(jié)構(gòu)組成(圖7)。非度量多維尺度分析結(jié)果顯示,不同湖區(qū)中的真核微生物群落分別聚為一類,ANOSIM檢驗(yàn)組間差異顯示,組間差異顯著大于組內(nèi)差異(R=0.772,P=0.001),說(shuō)明分組合理,4個(gè)湖區(qū)真核微生物群落結(jié)構(gòu)存在一定的差異。相比其他湖區(qū)所屬樣點(diǎn),9號(hào)及10號(hào)樣點(diǎn)雖同屬羊卓雍錯(cuò)湖心區(qū)(YC),但真核微生物群落結(jié)構(gòu)存在一定差異。完全連接聚合聚類結(jié)果顯示,位于空母錯(cuò)和沉錯(cuò)連接處兩側(cè)的5號(hào)及7號(hào)樣點(diǎn)真核微生物群落結(jié)構(gòu)具有較高的相似性,而距兩湖區(qū)連接處較遠(yuǎn)的6號(hào)及8號(hào)樣點(diǎn)具有較高的相似性。

圖7 基于Bray-Curtis 距離的非度量多維尺度(NMDS) 分析和采樣點(diǎn)聚類Fig.7 Nonmetric multidimensional scaling (NMDS) and Cluster analysis plots using Bray-Curtis dissimilarity distance

2.4 羊卓雍錯(cuò)水體真菌多樣性與水體理化因子的相關(guān)性分析

圖8 羊卓雍錯(cuò)水體真菌α-多樣性指數(shù)及水體理化因子Pearson相關(guān)性系數(shù)Fig.8 Pearson correlation coefficient between aquatic fungal α-diversity indexes and environmental factors in Yamzhog Yumco Lake*表示在P<0.05水平上顯著; **表示在P<0.01水平上顯著

圖9 羊卓雍錯(cuò)水體真菌與理化因子RDA分析排序圖 Fig.9 RDA ordination diagram of aquatic fungal associated with environmental factors in Yamzhog Yumco Lake

3 討論

真菌在水生生態(tài)系統(tǒng)中起著重要作用。文獻(xiàn)顯示,真菌在其生命周期中大量利用周圍難以被其他生物利用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),并通過(guò)孢子及菌絲體進(jìn)入水生生態(tài)系統(tǒng)食物鏈,其生命活動(dòng)極大促進(jìn)了水生生態(tài)系統(tǒng)物質(zhì)循環(huán),其群落結(jié)構(gòu)及多樣性也在一定程度上反映了湖泊水體的質(zhì)量狀況[35-36]。本研究的四個(gè)區(qū)域間雖有水體連接,但地理位置、補(bǔ)水方式以及人為活動(dòng)方式的不同使得其水體理化性質(zhì)存在較大差異。自2005年以來(lái),羊卓雍錯(cuò)湖面蒸發(fā)加劇,湖面劇烈萎縮,湖水濃縮,致使羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)及羊卓雍錯(cuò)湖心區(qū)pH、EC、TDS以及鹽度均顯著高于空母錯(cuò)沿岸區(qū)以及沉錯(cuò)沿岸區(qū)[21]。由于空母錯(cuò)主要由冰川融水補(bǔ)給,水面高度較羊卓雍錯(cuò)和沉錯(cuò)高,其湖水在豐水期補(bǔ)充羊卓雍錯(cuò)以及沉錯(cuò)[21],水體中溶解性物質(zhì)隨水流流出,造成空母錯(cuò)沿岸區(qū)EC、TDS以及鹽度顯著低于其他3個(gè)區(qū)域。就TP而言,羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)顯著低于空母錯(cuò)沿岸區(qū)及沉錯(cuò)沿岸區(qū),這可能是由于羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)分布有全世界海拔最高的抽水蓄能電站,抽取雅魯藏布江河水以及下放羊卓雍錯(cuò)湖水的運(yùn)作機(jī)制一定程度上稀釋了羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)的TP含量。

經(jīng)Unite數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)后,被注釋的真菌門包括：子囊菌門、被孢霉門、擔(dān)子菌門、壺菌門、毛霉菌門、羅茲菌門、球囊菌門和捕蟲霉亞門,其中子囊菌門、被孢霉門以及擔(dān)子菌門是羊卓雍錯(cuò)各樣點(diǎn)水體真菌的主要門類,子囊菌門以及擔(dān)子菌門在各樣點(diǎn)均有較多分布,其也是水體中常見(jiàn)的2個(gè)真菌門類[37],被孢霉門則主要分布于羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)(1—4號(hào)樣點(diǎn))。被孢霉門多被發(fā)現(xiàn)于土壤中,是土壤真菌的常見(jiàn)門類[38]。鑒于羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)為羊卓雍錯(cuò)主要旅游區(qū)域且1號(hào)及4號(hào)樣點(diǎn)位于當(dāng)?shù)鼐用裰饕a(chǎn)活動(dòng)場(chǎng)所附近,大量的人為活動(dòng)增加了土壤微生物群落與沿岸水體微生物群落交流的機(jī)會(huì),這可能是被孢霉門在羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)水體中大量分布的主要原因。就被注釋的真菌屬而言,羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)4個(gè)樣點(diǎn)中,1號(hào)及4號(hào)樣點(diǎn)主要以Mortierella為主,而2號(hào)及3號(hào)樣點(diǎn)則分別以Dioszegia和Xalocoa為主,Mortierella相對(duì)豐度較低,這可能是由于羊卓雍錯(cuò)水電站以及羊卓雍錯(cuò)觀景臺(tái)的設(shè)置一定程度上減少了土壤微生物群落與水體微生物群落的交流所造成的。Dioszegia為耐冷酵母,在冰凍圈廣泛分布[39],但在本研究中僅在2號(hào)樣點(diǎn)有大量分布,在其他樣點(diǎn)則很少出現(xiàn)。2號(hào)樣點(diǎn)位于羊卓雍錯(cuò)蓄能電站,推測(cè)Dioszegia是隨雅魯藏布江河水輸入至羊卓雍錯(cuò)。相較于羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)的其他樣點(diǎn),3號(hào)樣點(diǎn)Xalocoa、Bifiguratus以及Helicoma相對(duì)豐度均較高,這可能是由于Mortierella相對(duì)豐度的降低為其他屬微生物騰出生存空間所致。分析位于空母錯(cuò)的兩個(gè)樣點(diǎn)發(fā)現(xiàn),5號(hào)及6號(hào)樣點(diǎn)屬水平組成較為相似,但5號(hào)樣點(diǎn)Alternaria相對(duì)豐度為78.6%,占據(jù)絕對(duì)優(yōu)勢(shì),6號(hào)樣點(diǎn)水體真菌屬水平分布則較為均勻。這可能是由于5號(hào)樣點(diǎn)除TP外的各項(xiàng)營(yíng)養(yǎng)元素均顯著高于6號(hào)樣點(diǎn)所致。從位于沉錯(cuò)的兩個(gè)樣點(diǎn)可以看出,7號(hào)及8號(hào)樣點(diǎn)屬水平組成差異較大,其中8號(hào)樣點(diǎn)Alternaria相對(duì)豐度可以達(dá)到92.5%,鄭保海等[40]研究發(fā)現(xiàn),Alternaria豐度與水體溫度呈極顯著正相關(guān),推測(cè)8號(hào)樣點(diǎn)較高的水體溫度使得Alternaria大量富集,限制了其他屬微生物的生長(zhǎng),進(jìn)而造成了這兩個(gè)樣點(diǎn)間水體真菌屬水平的組成差異。 9號(hào)與10號(hào)樣點(diǎn)同屬羊卓雍錯(cuò)湖心區(qū),其中10號(hào)樣點(diǎn)位于雍布朵寺旁,為信教群眾采集圣水處,靠近湖心小島的地理位置加之頻繁的采集圣水活動(dòng)是導(dǎo)致10號(hào)樣點(diǎn)屬水平真菌組成區(qū)別于9號(hào)樣點(diǎn)而接近沿岸區(qū)各樣點(diǎn)的可能原因。就各樣點(diǎn)真菌被注釋情況而言,5號(hào)、6號(hào)、9號(hào)及10號(hào)樣點(diǎn)在門水平和屬水平存在大量未知類群?？漳稿e(cuò)主要由冰川融水補(bǔ)給,入湖河流對(duì)周邊環(huán)境微生物資源存在富集作用,這可能是5號(hào)及6號(hào)樣點(diǎn)存在大量未知真菌類群的原因。相較于沿岸區(qū),湖心區(qū)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量及水體溫度較低,更加惡劣的生存環(huán)境是9號(hào)及10號(hào)樣點(diǎn)真核微生物多為未知類群的可能原因。

各區(qū)域間水體真菌群落結(jié)構(gòu)差異明顯,NMDS分析結(jié)果可以將各區(qū)域明顯區(qū)分開(kāi),但相較于分屬于其他區(qū)域的樣點(diǎn),分屬于羊卓雍錯(cuò)湖心區(qū)的9號(hào)及10號(hào)樣點(diǎn)間水體真菌群落結(jié)構(gòu)差異較大,同樣的結(jié)果在完全連接聚合聚類分析中也有所體現(xiàn),這進(jìn)一步說(shuō)明了地理位置及人為活動(dòng)對(duì)水體真菌群落結(jié)構(gòu)具有較大影響。由于不同統(tǒng)計(jì)分析方法側(cè)重不同,不同于NMDS分析所展現(xiàn)出的結(jié)果,完全連接聚合聚類分析顯示,5號(hào)與7號(hào)樣點(diǎn)間水體真菌群落結(jié)構(gòu)具有較大的相似性,6號(hào)與8號(hào)樣點(diǎn)間水體真菌群落結(jié)構(gòu)具有較大的相似性。觀察5號(hào)與7號(hào)樣點(diǎn)地理位置可知,5號(hào)與7號(hào)樣點(diǎn)分別位于連接空母錯(cuò)與沉錯(cuò)的河道兩端,樣點(diǎn)間水體真菌群落更大的交流頻率是造成這種現(xiàn)象的可能原因。在完全連接聚合聚類分析中,羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)的4個(gè)樣點(diǎn)展現(xiàn)出不同程度的相似性,位于當(dāng)?shù)鼐用裰饕a(chǎn)勞動(dòng)場(chǎng)所附近的1號(hào)與4號(hào)樣點(diǎn)水體真菌群落結(jié)構(gòu)具有較高的相似性,位于羊卓雍錯(cuò)蓄能電站的2號(hào)樣點(diǎn)與1號(hào)及4號(hào)樣點(diǎn)間水生真菌群落結(jié)構(gòu)則相似性較低。趙君等[41]研究發(fā)現(xiàn),土地利用方式對(duì)袁河流域浮游細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)有顯著影響,本研究結(jié)果一定程度上說(shuō)明了人為干擾方式的不同對(duì)羊卓雍錯(cuò)沿岸區(qū)水體真菌群落結(jié)構(gòu)的影響也不盡相同。

4 結(jié)論