秦紫藝　陳雙雙　王華娣　鄧衍明

摘要：繡球?qū)僦参锸菆@林和家庭園藝中重要的觀賞植物，具有較高的生態(tài)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，開發(fā)應(yīng)用前景廣闊。開展繡球?qū)僦参锓庇夹g(shù)研究對(duì)其資源開發(fā)、保護(hù)與應(yīng)用具有重要意義。與傳統(tǒng)扦插、壓條、分株等育苗技術(shù)相比，組織培養(yǎng)技術(shù)能夠滿足種苗周年、批量生產(chǎn)的要求，可有力地促進(jìn)繡球?qū)僦参锏漠a(chǎn)業(yè)化開發(fā)與利用。對(duì)國內(nèi)外繡球?qū)僦参锏慕M織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了綜述，包括外植體材料的選擇、外植體的消毒方法、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的影響、培養(yǎng)條件等，旨在通過總結(jié)前人經(jīng)驗(yàn)和方法，為建立更多繡球?qū)賰?yōu)良植物資源的高效再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系提供參考。

關(guān)鍵詞：繡球?qū)?組織培養(yǎng);再生;研究進(jìn)展

中圖分類號(hào)： S685.990.4+3文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2021）19-0045-06

繡球?qū)伲℉ydrangea）又名八仙花屬[1]，為虎耳草科落葉灌木或小喬木。中國是繡球?qū)僦参锏馁Y源分布中心和起源中心之一，具有豐富的種質(zhì)資源，共有46種10變種[2]。繡球?qū)僦参镞m應(yīng)性強(qiáng)，具有耐寒、耐陰、抗性強(qiáng)和病蟲害少等優(yōu)點(diǎn)，種植范圍和適應(yīng)區(qū)域較廣[3]。繡球?qū)僦参锘ㄐ投鄻?，花期較長(zhǎng)，花色豐富，包含了白色系、紅色系、藍(lán)色系等，被廣泛應(yīng)用于園林景觀及盆花、鮮切花等產(chǎn)業(yè)[4]。繡球?qū)僦参镆蜉嗥缓Ｉ椒印⒗C球酚等物質(zhì)而可作為抗瘧疾、降血糖、治療心悸煩躁的入藥良材[5]。此外，很多繡球品種的花色可隨土壤酸堿度的變化而變化，當(dāng)土壤為強(qiáng)酸性時(shí)，花色呈藍(lán)色，而當(dāng)土壤為堿性時(shí)，花色為紅色，使其可以作為土壤酸堿度的指示植物[6]。總之，繡球?qū)僦参锞哂休^高的觀賞、經(jīng)濟(jì)、藥用及生態(tài)價(jià)值，產(chǎn)業(yè)化開發(fā)前景十分廣闊。

繡球?qū)僦参锏幕ǘ酁椴辉谢?，較難獲得種子，故關(guān)于繡球有性繁殖的報(bào)道較少。目前，繡球?qū)僦参飩鹘y(tǒng)繁殖方式主要是無性繁殖，包括扦插、分株、壓條等[7]。但無性繁殖方式因其繁殖系數(shù)低、速度慢、易受季節(jié)限制無法進(jìn)行周年繁殖等缺點(diǎn)而不能大規(guī)模生產(chǎn)種苗。植物組織培養(yǎng)技術(shù)可以在保持母本優(yōu)良性狀的前提下實(shí)現(xiàn)周年、快速繁殖從而獲得大量種苗，有效彌補(bǔ)傳統(tǒng)無性繁殖方式的不足。此外，組培的環(huán)境條件可控，獲得的組培苗在植物基因工程、分子育種等領(lǐng)域也具有重要作用。因此，本綜述綜合了國內(nèi)外相關(guān)研究文獻(xiàn)，對(duì)繡球?qū)僦参锝M織培養(yǎng)的現(xiàn)狀進(jìn)行了歸納和分析，并對(duì)下一步研究方向進(jìn)行了建議，旨在為今后更多繡球?qū)賰?yōu)良植物資源的組織培養(yǎng)和高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立提供參考。

1無菌苗的獲得

1.1外植體材料的選擇

外植體的選擇是植物組織培養(yǎng)的第一步，也是非常重要的一環(huán)，不同的外植體類型對(duì)植物組織培養(yǎng)的影響差異甚大。繡球?qū)僦参锝M織培養(yǎng)中常用的外植體材料有莖尖、莖段、葉片等。有學(xué)者用八仙花葉片、莖段和莖尖為外植體，探究組織培養(yǎng)中的污染率和死亡率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利用葉片污染率較低，但是難以形成愈傷組織，而利用莖尖污染率和死亡率都較低，分別為21.4%、18.5%[8-9]。王紅梅等比較了側(cè)芽、基部側(cè)芽、頂芽和帶頂芽的側(cè)芽后，發(fā)現(xiàn)基部側(cè)芽的萌發(fā)率最高[10]。同時(shí)，以葉柄為外植體的研究發(fā)現(xiàn)，中部葉柄愈傷組織誘導(dǎo)率比上部葉柄高[11]。此外，也有很多學(xué)者以葉片作為外植體，通過愈傷組織誘導(dǎo)建立高效的再生體系[12-14]。研究發(fā)現(xiàn)，由于生理狀態(tài)和年齡的不同，即使同一植株上的同一種器官，其誘導(dǎo)分化情況也不同，通常外植體越幼嫩、分生能力越強(qiáng)[15]。雖然繡球?qū)僦参锝Y(jié)實(shí)率低，但也有以種子和花粉為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)的研究。陳爽等以種子為外植體雖獲得了無菌苗，但僅限于“蠟蓮繡球”“莼蘭繡球”等較易獲得種子的品種[16]。周靜偉以花藥（花粉發(fā)育處于單核靠邊期）為外植體，其愈傷組織誘導(dǎo)率僅有36.7%[17]。由此可見，繡球?qū)僦参锝M織培養(yǎng)宜以葉片、莖尖和帶腋芽莖段作為外植體，污染率低、誘導(dǎo)率高。

1.2外植體消毒

外植體消毒常用試劑有75%乙醇、氯化汞（HgCl2）和次氯酸鈉溶液。乙醇因其穿透力強(qiáng)，可以使菌體蛋白變性，還可以排除外植體表面的空氣有利于其他消毒劑的進(jìn)入，被廣泛用于外植體消毒的第一步[18]。但乙醇消毒時(shí)間長(zhǎng)易導(dǎo)致外植體死亡、時(shí)間短不能徹底消毒，因此要結(jié)合其他消毒劑共同處理外植體。不同的消毒劑處理不同的時(shí)間，外植體的污染率及存活率也不同。

對(duì)于莖尖、莖段的消毒，馮潤(rùn)東等[8]和邢合龍等[9]的研究中利用70%乙醇浸泡30～45 s，再用01%HgCl2對(duì)繡球花莖段和莖尖消毒 7 min，外植體污染率最低。也有學(xué)者在70%乙醇消毒30 s后用0.1%HgCl2溶液分別滅菌8、10 min，同樣可以達(dá)到較好的消毒滅菌效果[19-20]。因此，利用70%乙醇和0.1% HgCl2溶液結(jié)合使用時(shí)，HgCl2滅菌時(shí)間一般可控制在7～10 min。HgCl2消毒易引起外植體的褐化，如王紅梅等對(duì)圓錐繡球“北極熊”的莖段用HgCl2消毒4 min，外植體褐化率較低，但由于外植體表面密被表皮毛，會(huì)消毒不徹底導(dǎo)致外植體的污染率比較高，而用HgCl2不間斷消毒 8 min，污染率降低，但是褐化率會(huì)增加，故選擇采用（4+4）min的HgCl2二次滅菌法，即用HgCl2分2次進(jìn)行消毒，首次消毒4 min后，無菌水沖洗并用濾紙吸干外植體表面的水分再進(jìn)行第2次消毒[10]。對(duì)于繡球?qū)僦参锘ㄋ幒头N子，利用HgCl2溶液可以得到較好的消毒效果[16-17]。

由于HgCl2溶液毒性較大，使用不當(dāng)會(huì)對(duì)繡球外植體造成損傷，因此，也有研究采用多種消毒試劑結(jié)合的方法進(jìn)行滅菌。如對(duì)“Preziosa”的莖段利用0.1% HgCl2滅菌7 min后，再用飽和漂白粉上清液消毒8 min[21]，以及對(duì)“紅寶石”的莖段利用01%HgCl2滅菌3 min后，再利用2%次氯酸鈉（NaClO）滅菌6 min[22]，都可以獲得污染率較低的無菌外植體。Raffoni等利用2.5% NaClO溶液和0.2%～0.4% HgCl2溶液對(duì)“Snow Queen”的莖段消毒可以達(dá)到100%滅菌率，但考慮到HgCl2廢液不環(huán)保，認(rèn)為選用5% NaClO溶液浸泡15 min進(jìn)行消毒是最佳方案[23]。Liu等也認(rèn)為應(yīng)避免使用HgCl2溶液，用活性氯濃度為1%的次氯酸鈉并添加Tween 20潤(rùn)濕劑浸泡“Hyd1”莖段可以取得較好的消毒效果[24]。Tween 20是一種非離子型表面活性劑，在消毒劑中添加Tween 20可以增強(qiáng)消毒效果[25]。這些研究表明，除HgCl2溶液外，次氯酸鈉溶液是使用最廣泛的消毒劑。總之，對(duì)繡球?qū)僦参锿庵搀w的消毒，要結(jié)合不同類型的外植體選擇合適的消毒試劑和消毒時(shí)間以達(dá)到理想的消毒效果。

2基本培養(yǎng)基的選擇

對(duì)于植物組織培養(yǎng)來說，培養(yǎng)基的成分對(duì)外植體的生長(zhǎng)發(fā)育具有直接的影響。近年來，國內(nèi)大部分研究者都采用MS培養(yǎng)基（Murashige and Skoog medium）作為繡球?qū)僦参锏幕九囵B(yǎng)基[20，21，26]。MS培養(yǎng)基最初被用于煙草的愈傷組織培養(yǎng)，后來逐漸被廣泛用于其他植物的組織培養(yǎng)[27]，但并不是所有植物都適用于MS培養(yǎng)基。王海娥比較了MS、1/2 MS、1/4 MS基本培養(yǎng)基在啟動(dòng)培養(yǎng)和增殖培養(yǎng)階段的培養(yǎng)效果，發(fā)現(xiàn)對(duì)于朗姆系繡球不同品種最適宜的基本培養(yǎng)基并不一樣：“繡球”以1/2 MS為宜，“柏林”和“蝴蝶戲珠”以1/4 MS為宜，而“藍(lán)星”則以MS為宜[26]。陳爽比較了MS培養(yǎng)基和WPM培養(yǎng)基（woody plant medium）對(duì)“莼蘭繡球”和“蠟蓮繡球”增殖的影響，發(fā)現(xiàn)MS培養(yǎng)基更適合這2個(gè)品種繡球的增殖，分析認(rèn)為可能是由于MS培養(yǎng)基中豐富的無機(jī)鹽和氮源對(duì)促進(jìn)生長(zhǎng)有利[16]。李楊麗研究發(fā)現(xiàn)，MS培養(yǎng)基并不適合其研究的繡球品種“Hyd1”，而B5（Gamborgs B-5 medium）和WPM作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，可促進(jìn)增殖芽的伸長(zhǎng);采用B5培養(yǎng)基時(shí)，外植體生根率較高[28]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，與MS和WPM相比，B5培養(yǎng)基的銨鹽濃度較低，可促進(jìn)“Hyd1”葉片外植體的不定芽形成[24，29]。但在蔣夢(mèng)煙的研究中，1/2 MS、MS、B5這3種基本培養(yǎng)基對(duì)繡球品種“藍(lán)尼康”的愈傷組織誘導(dǎo)并無明顯差異[30]。比較MS、B5、WPM培養(yǎng)基的成分，可以發(fā)現(xiàn)幾種培養(yǎng)基中的NH+4、NO-3、SO2-4的含量有明顯差異，MS培養(yǎng)基和B5培養(yǎng)基中NH+4、NO-3含量較高，而WPM培養(yǎng)基中SO2-4含量較高[31]。因此，基本培養(yǎng)基的選擇不僅受外植體的基因型影響，不同培養(yǎng)基中大量元素的差異也是需要考慮的重要因素。

3植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的影響

除了基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分外，培養(yǎng)基中添加的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類和配比對(duì)于外植體的生長(zhǎng)、增殖和分化也都具有不同的影響[32]。

3.1直接再生途徑

直接再生途徑又叫不定芽誘導(dǎo)途徑，是指外植體直接誘導(dǎo)分化產(chǎn)生器官的途徑。截至目前，該途徑已廣泛用于繡球?qū)僦参镆垣@得再生植株（表1）。繡球?qū)僦参锊欢ㄑ空T導(dǎo)途徑多以6-BA（6-芐氨基嘌呤）和NAA（α-萘乙酸）或IBA（3-吲哚丁酸）為外源植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。在Liu等的研究中，當(dāng)6-BA/IBA值從1.0/0.05提高到3.5/0.05時(shí)，不定芽再生頻率相應(yīng)增加;而在2.25/0、2.25/005、2.25/0.1和2.25/0.2范圍內(nèi)變化時(shí)，器官發(fā)生頻率呈拋物線形變化[24]。殷麗青在改良MS培養(yǎng)基[MS+Ca（NO3）2 556 mg/L]中添加不同比例 6-BA 和NAA處理繡球“Preziosa”發(fā)現(xiàn)，過高的 6-BA 會(huì)抑制芽的發(fā)生，而過高的NAA會(huì)出現(xiàn)芽細(xì)弱、基部產(chǎn)生愈傷組織等現(xiàn)象。這些結(jié)果表明，細(xì)胞分裂素/生長(zhǎng)素的值與不定芽再生頻率密切相關(guān)。但也有學(xué)者認(rèn)為生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的有無、種類、濃度及配比對(duì)器官發(fā)生影響不顯著，但對(duì)新稍伸長(zhǎng)影響較大[22]。此外，培養(yǎng)基中添加GA3（赤霉素A3）也可以提高芽的誘導(dǎo)率、促進(jìn)芽的伸長(zhǎng)[19]。

3.2間接再生途徑

間接再生途徑又被稱為愈傷組織誘導(dǎo)途徑，是先使外植體脫分化成愈傷組織、愈傷組織再分化成器官并最終形成完整植株的過程。近年來，國內(nèi)外關(guān)于繡球?qū)僦参锿ㄟ^愈傷組織誘導(dǎo)途徑進(jìn)行組織培養(yǎng)的報(bào)道已有不少（表2）。在該途徑中，最主要的影響因素是外源激素的類型和濃度。誘導(dǎo)愈傷常用的外源激素有6-BA、NAA、2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸）、KT（6-糠基氨基嘌呤）、CPPU[N-（2-氯-4-吡啶基）-N′-苯基脲]等;在細(xì)胞分裂素中，6-BA的使用率較高，通常以1.5～2.5 mg/L 為宜[11，14，35]。楊寶明等認(rèn)為，在相同濃度的6-BA條件下，配合2，4-D和NAA均能誘導(dǎo)出愈傷組織，且2，4-D的誘導(dǎo)效果要比NAA好;但是2，4-D濃度過高則會(huì)造成愈傷組織結(jié)構(gòu)松散而不易分化成不定芽[11]。CPPU是一種人工合成的細(xì)胞分裂素，其活性高且價(jià)格低廉，被廣泛應(yīng)用于植物組織培養(yǎng)中[36]。孫曉波等發(fā)現(xiàn)，大花繡球“無盡夏”葉片在CPPU+IBA（或NAA）激素組合培養(yǎng)基上的愈傷誘導(dǎo)率高達(dá)95%[20]。通常情況下，選擇較高濃度的細(xì)胞分裂素和較低濃度的生長(zhǎng)素，有利于愈傷組織的分化[25]。

3.3增殖培養(yǎng)

增殖培養(yǎng)又叫繼代培養(yǎng)，是組織培養(yǎng)中實(shí)現(xiàn)快速繁殖的重要步驟。細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素是增殖培養(yǎng)中常用的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合。雷亞靈等認(rèn)為，適合芽增殖的培養(yǎng)基為MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA，增殖系數(shù)為9. 2[22]。有的研究在增殖培養(yǎng)基中添加赤霉素，如王海娥發(fā)現(xiàn)以1/4 MS+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L CA3為增殖培養(yǎng)基時(shí)，增殖系數(shù)可達(dá)14.32[26]。李楊麗等以B5+1.5 mg/L 6-BA+0.6 mg/L CA3為增殖培養(yǎng)基時(shí)，增殖系數(shù)最高，但只有3.7[28]。除6-BA外，KT（細(xì)胞分裂素）也被用于增殖培養(yǎng)，如用MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.5 mg/L IBA培養(yǎng)“都山繡球”，增殖率可達(dá)2.85倍[14]。也有研究發(fā)現(xiàn)，增殖培養(yǎng)基（MS+0.5 mg/L 6-BA+0.04 mg/L NAA）中添加腺嘌呤可促進(jìn)增殖，提高增殖系數(shù)[19]。雖然增殖培養(yǎng)基以細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素組合作為外源激素的研究居多，但也有報(bào)道認(rèn)為增殖培養(yǎng)基中添加任意濃度的6-BA都可以得到較高的不定芽增殖率和鮮質(zhì)量，而且不定芽長(zhǎng)度與細(xì)胞分裂素濃度無關(guān)[24-25]。根據(jù)以上研究可見，繡球?qū)僦参镌鲋撑囵B(yǎng)使用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類較多，但常用的只有6-BA、NAA、IBA等。

3.4生根培養(yǎng)

繡球?qū)僦参锷鄬?duì)容易，組織培養(yǎng)中較常用的方法是瓶?jī)?nèi)生根。生根培養(yǎng)一般選擇大量元素減半的培養(yǎng)基，這是因?yàn)樵谏^程中，植物對(duì)大量元素的需求已明顯降低[37]。不同類型不同濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)繡球生根誘導(dǎo)的效果存在差異。龔偉等在1/2 MS培養(yǎng)基上添加0.1 mg/L的NAA，繡球生根率達(dá)82.5%[38]，添加0.2 mg/L或 0.3 mg/L IBA時(shí)，生根率也較高[9，35]。也有研究表明，NAA和IBA配合使用比單獨(dú)使用效果好，如利用1/2 MS+0.25 mg/L NAA+0.25 mg/L IBA為生根培養(yǎng)基時(shí)，圓錐繡球生根率可達(dá)95%，且生根快、根數(shù)多[11]。趙盈盈等認(rèn)為最適宜繡球品種“Adria”的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+蛭石 ∶珍珠巖（1 ∶1），即使不添加激素，生根率也可達(dá)100%，且根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯[13]。Liu等在含有珍珠巖的1/2 B5培養(yǎng)基上添加0.5 mg/L NAA，繡球“Hyd1”的生根數(shù)達(dá)每株7.1條，遠(yuǎn)高于在瓊脂中培養(yǎng)的生根數(shù)[24]。分析認(rèn)為，不僅是因?yàn)檎渲閹r基質(zhì)相對(duì)于瓊脂更透氣，而且瓊脂中的不定芽只在培養(yǎng)基以外的莖段處生細(xì)小的根，這些根不接觸培養(yǎng)基，無法吸收營養(yǎng)，導(dǎo)致不定芽生長(zhǎng)緩慢[39]。也有文獻(xiàn)報(bào)道在生根培養(yǎng)基中添加3 g/L活性炭可以促進(jìn)生根，生根率達(dá)100%[19]。活性炭可為組培苗提供生根暗環(huán)境，吸附植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等有利于生根的物質(zhì)[40]，但活性炭的濃度不宜過高，否則將會(huì)抑制生根[41]。除了瓶?jī)?nèi)生根方法外，還有瓶外生根法。龔偉等將組培苗轉(zhuǎn)移到經(jīng)過福爾馬林消毒的基質(zhì)（珍珠巖 ∶蛭石=1 ∶1）中，在濕度大于85%的條件下培養(yǎng)，生根率可達(dá)100%[38]。

4煉苗移栽

組培苗葉綠素含量少，光合自養(yǎng)能力弱，根毛細(xì)軟，適應(yīng)能力較差，需要經(jīng)過馴化煉苗逐漸改變生長(zhǎng)條件以提高其對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力[42]。影響繡球?qū)僦参锝M培苗移栽成活率的重要因素有組培苗的質(zhì)量、空氣濕度、移栽基質(zhì)等[22]。在移栽之前，需將誘導(dǎo)獲得的生根苗在室溫散射光下培養(yǎng) 3 d，再打開封口膜于溫室大棚預(yù)煉苗3 d，并于移栽時(shí)洗去根部培養(yǎng)基[33]。氣溫低時(shí)，煉苗時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng);氣溫高時(shí)因培養(yǎng)基易污染，需縮短煉苗時(shí)間[43]。另外，繡球?qū)僦参锝M培苗通常在高濕、恒溫、弱光條件下培養(yǎng)，若移出培養(yǎng)基后水分不足，將直接導(dǎo)致幼苗失水死亡，所以除了每天向植株葉面噴霧外，初期還應(yīng)用薄膜覆蓋保濕一段時(shí)間[22]。

移栽時(shí)，應(yīng)選擇根系發(fā)達(dá)、莖稈粗壯、葉片深綠和木質(zhì)化程度較高的組培苗[14]。有研究表明，繡球“藍(lán)尼康”已生根的健壯苗移栽成活率可達(dá)到92%，且根系生長(zhǎng)快、根數(shù)量多，而無根苗的移栽成活率僅為14%，很難成活[30]。繡球?qū)僦参锝M培苗移栽的基質(zhì)通常用泥炭土、珍珠巖、蛭石、腐殖土等，移栽所用基質(zhì)應(yīng)先高溫滅菌再使用。Thomas等為了使櫟葉繡球離體生根的植物適應(yīng)溫室條件，將櫟葉繡球組培苗移栽到泥炭土 ∶蛭石 ∶珍珠巖=3 ∶1 ∶1的基質(zhì)中，然后覆蓋塑料薄膜，放回培養(yǎng)室4周后，再轉(zhuǎn)移到溫室中[44]。也有研究表明，將繡球組培苗移栽到珍珠巖 ∶蛭石=1 ∶1的基質(zhì)中，成活率為896%[38];移栽到蛭石 ∶腐殖土=1 ∶2的基質(zhì)中，成活率達(dá)92%[14];栽入珍珠巖 ∶腐殖土=1 ∶2的培養(yǎng)缽中，成活率達(dá)90%以上[33]。但Preece等認(rèn)為組培苗的移栽成活率與移栽基質(zhì)比例無關(guān)，只要移栽到泥炭+蛭石+珍珠巖的培養(yǎng)基質(zhì)中，其適應(yīng)能力都很好且生長(zhǎng)旺盛[45]。此外，爐灰渣也是一種優(yōu)良的移栽基質(zhì)，有學(xué)者比較用于移栽繡球的爐灰渣和珍珠巖 ∶蛭石=1 ∶1的基質(zhì)，發(fā)現(xiàn)爐灰渣的移栽成活率達(dá)97.5%，且組培苗長(zhǎng)勢(shì)良好[46]。爐灰渣取材方便，透氣性好，不僅是組培苗移栽的優(yōu)良基質(zhì)，也是其他育苗方式的優(yōu)良基質(zhì)[47]。

5培養(yǎng)條件

除了上述因素外，組織培養(yǎng)所處的溫度、濕度、光照等培養(yǎng)條件也是保證整個(gè)培養(yǎng)過程順利進(jìn)行的重要因素[48]。組培瓶?jī)?nèi)的濕度一般能達(dá)飽和狀態(tài)，通常不予考慮[49]。在已有的繡球組織培養(yǎng)研究中，培養(yǎng)溫度基本保持在（25 ± 2） ℃[13，17，50]。光照條件對(duì)于繡球?qū)僦参锏牟欢ㄑ空T導(dǎo)、愈傷組織的誘導(dǎo)和分化都有著顯著的影響。Liu等將“Hyd1”外植體經(jīng)暗培養(yǎng)之后，再置于光—暗周期14 h—10 h下孵育，冷白光照射，光照度為3 300 lx，芽誘導(dǎo)率高達(dá)100%[24]。周靜偉等將“玫紅媽媽”的花藥接種到培養(yǎng)基后，先在弱光條件下培養(yǎng)30 d，待誘導(dǎo)出愈傷組織后轉(zhuǎn)入光照1 800～2 500 lx下培養(yǎng)，每天光照培養(yǎng)12 h，愈傷誘導(dǎo)率為37.6%[17]。還有學(xué)者將“Hyd1”葉片置于紅光和藍(lán)光下，發(fā)現(xiàn)不定芽被提前誘導(dǎo)產(chǎn)生，且不定芽較白光下生長(zhǎng)更健壯[51]。由此可見，繡球?qū)僦参锝M織培養(yǎng)中光照度、光—暗周期及光質(zhì)等都發(fā)揮著重要作用。因此，在繡球組織培養(yǎng)過程中，應(yīng)研究并優(yōu)化培養(yǎng)所需的溫度、光照等培養(yǎng)條件。

6展望

繡球?qū)僦参锏慕M織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)于優(yōu)質(zhì)種苗生產(chǎn)、新品種選育、遺傳轉(zhuǎn)化和種質(zhì)資源保護(hù)利用等都具有重要意義。目前，國內(nèi)外研究人員圍繞大花繡球“無盡夏”、圓錐繡球“北極熊”等開展了大量的組織培養(yǎng)相關(guān)研究，取得了較大的進(jìn)展。但是，在此過程中還有一些問題需要進(jìn)一步深入研究：（1）部分基因型建立無菌體系困難，污染率高;（2）增殖培養(yǎng)過程中玻璃化和褐化嚴(yán)重，影響增殖芽生長(zhǎng)和分化，甚至導(dǎo)致死亡;（3）外植體類型較單一，以莖段為主，其他器官高效再生體系尚不成熟;（4）不定芽分化率仍較低等。此外，目前的繡球組織培養(yǎng)研究主要集中在無菌體系、再生體系的建立，而關(guān)于繡球?qū)僦参镞z傳轉(zhuǎn)化體系、原生質(zhì)體培養(yǎng)與再生等方面的研究報(bào)道較少。因此，未來針對(duì)繡球?qū)僦参锝M織培養(yǎng)方面的研究應(yīng)重點(diǎn)聚焦于高效再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立，為培育優(yōu)良新品種、開展基礎(chǔ)研究等奠定理論和技術(shù)基礎(chǔ)。

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基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（編號(hào)：31901359）;蘇州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)：SNG201923）。

作者簡(jiǎn)介：秦紫藝（1998―），女，內(nèi)蒙古鄂爾多斯人，碩士研究生，主要從事觀賞園藝學(xué)研究。E-mail：qinziyi0213@163.com。

通信作者：鄧衍明，博士，研究員，主要從事觀賞園藝學(xué)研究。E-mail：nksdym@163.com。