郁蕉竹，林洋，張宏宏，王韻，劉鵬

【摘要】 本文分別采用鹽酸沉淀前處理方法和亞鐵氰化鉀沉淀前處理方法提取乳粉中的?；撬幔⒉捎玫せ酋Ｂ戎把苌咝б合嗌V法對(duì)乳粉中的?；撬岷窟M(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明采用亞鐵氰化鉀沉淀法所得的譜圖存在的雜質(zhì)峰對(duì)?；撬嶙V峰產(chǎn)生干擾，造成?；撬嶙V峰出現(xiàn)肩峰影響測(cè)試結(jié)果。而采用鹽酸沉淀法所得液相色譜譜圖出現(xiàn)的雜質(zhì)峰對(duì)牛磺酸譜峰不造成干擾。

【關(guān)鍵詞】 ?；撬?前處理方法;液相色譜法;肩峰

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2021.06.029

Optimization of Pretreatment Conditions for HPLC Determination of Taurine in Milk Powder

YU Jiao-zhu1，LIN Yang1，ZHANG Hong-hong1，WANG Yun1，LIU Peng2*

（1.Shenyang Food and Drug Inspection Institute，Shenyang 110036，China;2.Shenyang Jianzhu University，Shenyang 110036，China）

Abstract： Taurine in milk powder was extracted with hydrochloric acid or potassium ferrocyanide. The content of taurine was determined by high performance liquid chromatography（HPLC）with dansulfonyl chloride as pre-column derivatization. The shoulder peak may affect the test results when using potassium ferrocyanide as the precipitation. While the impurity peaks make no differences in the spectrogram when using hydrochloric acid as the precipitation.

Key words： taurine;pretreatment method;HPLC;shoulder peak

牛磺酸（2-氨基乙磺酸）是一種非蛋白類氨基酸，它在人體內(nèi)主要以游離氨基酸形式存在，具有一定的抗腫瘤活性，對(duì)提高嬰幼兒機(jī)體免疫力和抗病能力有十分重要的作用[1-2]。目前國(guó)內(nèi)外測(cè)定?；撬岷康姆椒ㄓ懈咝б合嗌V法、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、氨基酸自動(dòng)分析法、薄層層析法等[3-6]。高效液相色譜法具有樣品處理簡(jiǎn)單、方法精確度高和靈敏度高等特點(diǎn)，因此在?；撬岷繙y(cè)定中應(yīng)用最為廣泛。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.169—2016即規(guī)定了兩種液相色譜法：第一法為OPA柱后衍生法，第二法為丹磺酰氯柱前衍生法[7]。由于第一法使用的色譜柱價(jià)格昂貴，且需要使用柱后衍生裝置，對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求較高，所以大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用標(biāo)準(zhǔn)中的第二法。

筆者在用高效液相色譜法測(cè)定乳粉中的?；撬岷繒r(shí)，發(fā)現(xiàn)采用亞鐵氰化鉀沉淀的方法處理樣品時(shí)，色譜圖上往往出現(xiàn)干擾峰，容易對(duì)測(cè)定結(jié)果帶來一定影響。干擾峰嚴(yán)重時(shí)，還需進(jìn)一步調(diào)整色譜條件提高譜峰分離度進(jìn)行定量，因而嚴(yán)重影響工作效率。

本文采用鹽酸沉淀法對(duì)乳粉進(jìn)行前處理，采用丹磺酰氯柱前衍生高效液相色譜法對(duì)乳粉中?；撬岬暮窟M(jìn)行測(cè)定，并將測(cè)試結(jié)果和亞鐵氰化鉀沉淀法進(jìn)行對(duì)比，分析造成兩種提取方式測(cè)試結(jié)果差異的原因。采用兩種提取方法分別測(cè)試了三種乳粉樣品中的?；撬岷浚瑢?duì)比了兩種方法的重現(xiàn)性。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)原理

?；撬嵩谧贤夤庀聸]有特征吸收，先利用衍生劑丹磺酰氯和?；撬酦-端氨基作用，得到在紫外光下具有特征吸收的?；撬嵫苌?。再用配有紫外檢測(cè)器的高效液相色譜對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定。

1.2 牛磺酸提取

1.2.1 亞鐵氰化鉀沉淀前處理方法

稱取5 g（精確至0.01 g）樣品，加入40～50 ℃溫水30 mL，超聲溶解。放冷至室溫，加入沉淀劑150 g/L亞鐵氰化鉀水溶液，300 g/L乙酸鋅水溶液各1 mL，用水定容至100 mL，混勻。8000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，取上清備用。

1.2.2 鹽酸沉淀前處理方法

稱取5 g（精確至0.01 g）樣品于100 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液60 mL，充分搖勻，超聲溶解。用2.0 mol/L乙酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH至3.9，用水定容至刻度，搖勻過濾，取上清液備用。

1.3 ?；撬嵫苌?/p>

準(zhǔn)確吸取1.00 mL上清液，加入1.00 mL碳酸鈉緩沖液（pH9.5），1.00 mL丹磺酰氯-乙腈溶液（1.5 mg/mL），充分混合，室溫避光衍生反應(yīng)2 h，加入0.10 mL鹽酸甲胺溶液（20 g/L），渦旋混合以終止反應(yīng)，避光靜置至沉淀完全。取上清液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，取濾液待上機(jī)。

1.4 液相色譜儀器條件

色譜柱：C18反相色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙酸鈉緩沖液（10 mmol/L）+乙腈=70+30（體積比）;檢測(cè)波長(zhǎng)：二極管陣列檢測(cè)器，254 nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法對(duì)?；撬釡y(cè)試譜圖的影響

分別采用酸沉淀前處理方法和亞鐵氰化鉀沉淀前處理方法測(cè)定乳粉中的?；撬幔鄳?yīng)譜圖如圖1～圖4所示。圖1為牛磺酸標(biāo)準(zhǔn)譜液相色譜圖，圖2、圖3分別為采用鹽酸沉淀前處理方法和亞鐵氰化鉀沉淀前處理方法測(cè)定的液相色譜圖及局部放大圖，圖4為圖3中?；撬嶙V峰和雜質(zhì)峰對(duì)應(yīng)的吸收光譜圖。從圖3可以看出，采用亞鐵氰化鉀沉淀前處理方法處理乳粉，?；撬岬囊合嘧V圖中存在明顯的雜質(zhì)峰。對(duì)照?qǐng)D4可以看出，雜質(zhì)峰與?；撬嶙V峰具有相似的吸收光譜。對(duì)比圖2、圖3局部放大圖，可以看出采用亞鐵氰化鉀沉淀法處理的乳粉，牛磺酸譜峰峰形較差，雜質(zhì)峰與?；撬嶙V峰產(chǎn)生包裹，造成?；撬嶙V峰出現(xiàn)肩峰，在積分定量時(shí)容易造成干擾從而影響測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確度。而采用鹽酸沉淀法處理的乳粉，譜圖中雖然存在雜質(zhì)峰，但是雜質(zhì)峰和?；撬嶙V峰具有較高的分離度，牛磺酸譜峰峰形對(duì)稱規(guī)整，無肩峰，雜質(zhì)峰不會(huì)對(duì)?；撬岬姆e分定量產(chǎn)生干擾，因此測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確度更高。從圖3譜圖推斷，造成肩峰的原因是亞鐵氰化鉀沉淀法對(duì)乳粉中的一些氨基酸和蛋白質(zhì)沉淀不完全，導(dǎo)致這些氨基酸也參與衍生反應(yīng)，并在液相色譜測(cè)試中被檢出，而鹽酸沉淀法對(duì)其他氨基酸和蛋白質(zhì)的去除效果更好，因而在譜圖中雜質(zhì)峰對(duì)?；撬嶙V峰不產(chǎn)生干擾。

2.2 前處理方法對(duì)?；撬岷康挠绊?/p>

分別采用鹽酸沉淀法和亞鐵氰化鉀沉淀法對(duì)三種乳粉樣品進(jìn)行前處理，采用丹磺酰氯柱前衍生液相色譜法進(jìn)行?；撬岷繙y(cè)定，供試品編號(hào)為1#～6#，三組樣品六次測(cè)定的結(jié)果如表1所示。從表格中可以看出，采用兩種前處理方法得到三組乳粉樣品的?；撬釡y(cè)試均值（單位mg/100g）分別為35.46，41.10，48.49和36.28，40.25，47.38，精密度分別為2.29%，3.14%，3.01%和4.52%，5.08%，4.11%。采用兩種前處理方法測(cè)得的?；撬岷肯嘟?，均能滿足測(cè)試要求。此外，采用鹽酸沉淀法進(jìn)行前處理得到的測(cè)試結(jié)果具有較小的精密度，說明鹽酸沉淀法具有更好的數(shù)據(jù)再現(xiàn)性。

3 結(jié)論

本文分別采用鹽酸沉淀法和亞鐵氰化鉀沉淀法兩種前處理方法提取乳粉中的牛磺酸，采用高效液相色譜法測(cè)定?；撬岷?。測(cè)試結(jié)果表明：相同條件下，采用鹽酸沉淀法得到的液相色譜圖?；撬嶙V峰峰形較好，無肩峰，色譜圖上其他雜質(zhì)譜峰對(duì)測(cè)試結(jié)果不產(chǎn)生干擾。而采用亞鐵氰化鉀沉淀方法得到的液相色譜圖牛磺酸譜峰出現(xiàn)肩峰，進(jìn)而影響測(cè)試結(jié)果。采用兩種前處理方法得到三組乳粉樣品的?；撬釡y(cè)試均值分別為35.46 mg/100 g、41.10 mg/100 g、48.49 mg/100 g和36.28 mg/100 g、40.25 mg/100 g、47.38 mg/100 g，精密度分別為2.29%、3.14%、3.01%和4.52%、5.08%、4.11%。兩種前處理方法均能滿足測(cè)試要求，鹽酸沉淀法具有更好的數(shù)據(jù)重現(xiàn)性。

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【作者簡(jiǎn)介】

郁蕉竹，女，1989年出生，工程師，碩士，研究方向?yàn)槭称窓z驗(yàn)檢測(cè)。

通訊作者：劉鵬，男，liupeng6955@126.com。