許 彥，劉 露，曹 劍，覃貴勇

（重慶三峽職業(yè)學院，重慶 404155）

黨參[Codonopsispilosula (Franch.)Nannf.]是《中華人民共和國藥典》收錄的草藥，為桔梗植物的根。具有健脾益肺、養(yǎng)血生津的功效[1]。重慶市種植的主要品種是川黨參，已有近百年的栽培歷史，主要種植區(qū)域在奉節(jié)、巫溪、巫山等地。隨著人們保健意識的提高，黨參保健用量比藥用量大。黨參種植面積不斷擴大，同時病原菌不斷積累，黨參病害已成為制約重慶黨參產(chǎn)量和品質(zhì)進一步提升的重要因素[2-4]。

根腐病是重慶黨參生產(chǎn)的主要病害之一，主要癥狀是主根腐爛，后期產(chǎn)生灰白色霉狀物，對黨參產(chǎn)量造成嚴重影響。病菌主要以菌絲體潛伏在種子、土壤或帶病植株體內(nèi)組織，也可以分生孢子黏附在種子表面越冬。帶病種子、土壤中的病菌、帶病菌的黨參幼苗為其病源體[5]。

采集于重慶市奉節(jié)縣黨參種植基地的發(fā)病川黨參（Codonopsis tangshen Oliv.），經(jīng)前期試驗研究，分離純化出幾種腐皮鐮刀菌菌種，經(jīng)回接都有致病力。本試驗采用生長速率法研究苯醚甲環(huán)唑等6種藥劑及其不同濃度對（X7）小種的抑制效果，意在篩選出效果好的藥劑及濃度，為生產(chǎn)提供指導。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株 樣品采集于重慶市奉節(jié)縣黨參種植基地，于重慶三峽職業(yè)學院分離獲得菌株，編號X7。

1.1.2 供試藥劑 此次試驗選取市面上常見的、可用于防治根腐病的6種殺菌劑。10%苯醚甲環(huán)唑:水分散粒劑，東莞市瑞德豐生物科技有限公司生產(chǎn)；30%噁霉靈:水劑，東莞市瑞德豐生物科技有限公司生產(chǎn)；70%甲基硫菌靈:可濕性粉劑，海利爾藥業(yè)集團股份有限公司生產(chǎn)；50%咯菌腈:可濕性粉劑，先正達投資有限公司生產(chǎn)；80%福美雙:水分散粒劑，比利時特胺有限公司；86%十三嗎啉:油劑，浙江世佳科技股份有限公司。

1.1.3 培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（下文簡稱:PDA培養(yǎng)基）。

1.2 試驗方法

1.2.1 PDA培養(yǎng)基制備 馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 000 ml，在120℃條件下滅菌20 min。

1.2.2 病原菌活化 在超凈工作臺中用打孔器從已純化的培養(yǎng)皿中挑取直徑為5 mm的菌餅，放在PDA培養(yǎng)基中央，用封口膜將其封好，在溫度為28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，待用。

1.2.3 含毒培養(yǎng)基制備 將供試殺菌劑按照表1對應的質(zhì)量濃度配置成不同濃度含毒培養(yǎng)基，以無殺菌劑加入的PDA平板為對照。各培養(yǎng)皿加入20 ml培養(yǎng)基，每個殺菌劑濃度5次重復。

表1 各供試殺菌劑含毒培養(yǎng)基質(zhì)量濃度

1.2.4 接種菌餅并測量菌餅直徑 接種:使用直徑為5 mm的打孔器在菌落樣本邊緣處打下菌餅，將菌餅移入對應培養(yǎng)基中心位置，使用封口膜密封培養(yǎng)皿邊緣使之隔絕污染物，用標簽作相對應標記，將平板放置于28℃恒溫條件下培養(yǎng)5 d。測量:恒溫培養(yǎng)24 h、72 h、120 h后，分別取出培養(yǎng)皿測量菌落直徑，每個菌落十字交叉測2次直徑。記錄好每次的數(shù)據(jù)。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理

1.2.5 .1抑制率。測量后按照如下公式，計算殺菌劑的生長抑制率[6]。

1.2.5 .2回歸方程及相關(guān)系數(shù)。以殺菌劑質(zhì)量濃度的對數(shù)值為x，抑制率機率值為y，使用Excel進行回歸分析，確定毒力回歸方程y=ax+b、相關(guān)系數(shù)及EC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 6種藥劑對病原菌（X7）的抑制效果

從表2可以看出，6種藥劑對X7均有抑制作用，且抑制率隨著濃度的增加而增加。濃度均為0.5 g/L時，70%的甲基硫菌靈抑制效果最好，50%咯菌腈的抑制效果最差。

表2 不同濃度殺菌劑對病原菌（X7）的抑制率

2.2 毒力回歸方程

利用藥劑的濃度對數(shù)值x與藥劑抑菌率幾率值y的直線相關(guān)關(guān)系，求出供試藥劑的毒力回歸方程，并計算出相關(guān)系數(shù)和EC50，詳見表3。幾種藥劑對黨參根腐病病原菌（X7）都有不錯的抑制作用，其中70%的甲基硫菌靈和86%的十三嗎啉效果最優(yōu)，EC50分別為0.000 224 g/L和0.083 g/L；80%福美雙、30%噁霉靈、10%苯醚甲環(huán)唑次之；50%咯菌腈的EC50最大，為2.18 g/L。

表3 不同殺菌劑對病原菌（X7）的毒力回歸方程

3 結(jié)論

黨參作為一種藥食同源的植物，具有很高的經(jīng)濟價值，根腐病的發(fā)生對其產(chǎn)量、品質(zhì)及種植面積產(chǎn)生了巨大影響。因此，篩選行之有效的防治藥劑對黨參栽培具有重要意義。

試驗結(jié)果表明:防治黨參根腐病的最佳藥劑是70%甲基硫菌靈和86%十三嗎啉。本試驗受試驗條件、時間等因素的限制，試驗結(jié)果存在一定局限性，應進一步進行田間試驗，驗證試驗結(jié)果，篩選出防治效果好、防治成本低的藥劑。