黃林鳳

福建省龍巖市農(nóng)業(yè)學(xué)校，福建龍巖364000

大腸桿菌病是獸醫(yī)臨床上常見(jiàn)的傳染病，該病的發(fā)生沒(méi)有明顯的季節(jié)性和地域性，不同種類(lèi)的養(yǎng)殖場(chǎng)一年四季均有發(fā)病。隨著養(yǎng)殖集約化程度越來(lái)越高，該病的發(fā)生越來(lái)越嚴(yán)重，加之蛋雞產(chǎn)蛋期抗生素的禁用和飼料無(wú)抗政策的出臺(tái)，臨床上大腸桿菌的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。臨床上盲目使用抗生素和盲目加大使用劑量，導(dǎo)致大腸桿菌耐藥性越來(lái)越強(qiáng)，臨床治療難度越來(lái)越大。臨床依托藥敏試驗(yàn)可以準(zhǔn)確選擇高敏感的藥物對(duì)大腸桿菌病進(jìn)行有效治療，大大提高了臨床治愈率。

1 流行癥狀

2020年10月至2020年12月，筆者在臨床診療中共計(jì)剖檢大腸桿菌病例12例，共同的典型癥狀均為零星死亡，病死雞爪干癟，脫水明顯，肛門(mén)處羽毛臟亂。剖檢癥狀包心包肝，腹膜炎，氣囊炎。均為典型的敗血型大腸桿菌。

2 治療效果

對(duì)上述病例筆者均進(jìn)行無(wú)菌采集病死雞肝臟、心臟等病料。通過(guò)實(shí)驗(yàn)室藥敏試驗(yàn)，選擇敏感藥物進(jìn)行投喂治療。通過(guò)3～5 d 的藥物治療，均已經(jīng)全部治愈。

3 大腸桿菌藥敏試驗(yàn)的操作方法

3.1 培養(yǎng)基的選擇

臨床上大腸桿菌的藥敏試驗(yàn)一般選擇普通瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基，大多數(shù)化學(xué)試劑商店均可以買(mǎi)到。買(mǎi)到成品培養(yǎng)基原料，首先要對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行清洗、消毒、干燥。然后按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，稱(chēng)取適量的原料，按要求加熱，融化后倒入培養(yǎng)皿中，冷卻后備用。麥康凱培養(yǎng)基是大腸桿菌的鑒別培養(yǎng)基，大腸桿菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)為紅色菌落，其他菌在此培養(yǎng)基上無(wú)此現(xiàn)象。

3.2 藥敏片的準(zhǔn)備

準(zhǔn)備或購(gòu)買(mǎi)實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)用的定性濾紙，濾紙的量不能太少，盡量準(zhǔn)備一次夠用半年，將準(zhǔn)備好的定性濾紙用專(zhuān)用的打孔工具，打成圓形小紙片，直徑為6 mm。打完孔后仔細(xì)挑選，篩選出形狀不規(guī)則的紙片丟棄，保留形狀規(guī)則的圓形紙片。將挑選好的圓形濾紙片裝入事先準(zhǔn)備好的清潔干燥的小玻璃空瓶中，瓶口用牛皮紙包扎封好。將裝有紙片的玻璃瓶放入高壓鍋中，121.3 kPa 高壓20 min 消毒，高壓消毒后取出放入37 ℃溫箱或烘箱中烘干，使其完全干燥，備用。

選取需要試驗(yàn)篩選的商品藥，品種越多越好，品種越多臨床可選性越大。選好需要使用的藥品后，按照說(shuō)明書(shū)的治療量配置藥液，也可略高于說(shuō)明使用量進(jìn)行配置。藥液中的藥物要充分混勻，不能有沉淀。此稀釋液即為用于做藥敏試驗(yàn)的藥液。

用無(wú)菌鑷子將之前消毒烘干后的小圓紙片分別放入每個(gè)無(wú)菌的小玻璃瓶中，每個(gè)小玻璃瓶中加入一種藥液，藥液要將小圓紙片全部浸入其中。將小玻璃瓶用橡膠塞封好，轉(zhuǎn)動(dòng)玻璃瓶，使小紙片在瓶?jī)?nèi)充分翻轉(zhuǎn)，完全浸透藥液。翻動(dòng)時(shí)注意動(dòng)作幅度，使紙片不能被搗爛。在每個(gè)小玻璃瓶上用防水粘貼標(biāo)明藥物成分、商品名稱(chēng)及配置時(shí)間。取出浸透藥液的小圓紙片，然后放入37 ℃恒溫箱內(nèi)烘干24 h，干燥后裝瓶密封備用，如條件允許可以真空干燥，效果更佳。保存時(shí)防止受潮，應(yīng)置干燥陰涼處存放，有效期最長(zhǎng)6個(gè)月。

3.3 細(xì)菌的培養(yǎng)

無(wú)菌采集病死雞肝臟，將組織剪放在酒精燈火焰上消毒后，剪取小部分病料，將切面輕輕涂于培養(yǎng)基上，均勻涂滿(mǎn)后置于培養(yǎng)箱，37 ℃培養(yǎng)24 h。

培養(yǎng)24 h 后，培養(yǎng)基上長(zhǎng)滿(mǎn)不規(guī)則小菌落，在無(wú)菌操作臺(tái)中，將接種環(huán)放在酒精燈火焰上進(jìn)行消毒，挑取培養(yǎng)基上的菌落，挑取量不能太多也不能太少，手持接種環(huán)以劃線(xiàn)的方式涂在普通瓊脂培養(yǎng)基上。

在無(wú)菌操作臺(tái)中，將鑷子放在酒精燈火焰上進(jìn)行消毒片刻，鑷子冷卻后夾取藥敏片，輕輕貼在培養(yǎng)基上，放上后用鑷子輕輕壓實(shí)，使藥敏片與培養(yǎng)基貼合緊密。藥敏片的位置要適中，每個(gè)培養(yǎng)基中放7個(gè)左右，擺放呈梅花形。在培養(yǎng)皿背面標(biāo)號(hào)，每個(gè)藥敏片都要相應(yīng)編號(hào)，對(duì)應(yīng)標(biāo)號(hào)記錄藥品名稱(chēng)。將放完藥敏片的培養(yǎng)基置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，取出觀(guān)察，記錄相應(yīng)數(shù)據(jù)。

3.4 結(jié)果觀(guān)察

24 h 后，取出培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿倒置后，觀(guān)察藥敏片周?chē)囊志h(huán)大小，抑菌圈越大，說(shuō)明藥物對(duì)該大腸桿菌的抑菌效果越好，抑菌圈越小，說(shuō)明藥物抑菌效果越差。如果藥敏片周?chē)鷽](méi)有抑菌圈，則說(shuō)明該菌對(duì)此藥具有耐藥性。

3.5 結(jié)果判定

藥敏試驗(yàn)的結(jié)果判定，一般應(yīng)按抑菌圈的大小來(lái)作為判定藥物抑菌效果高低的標(biāo)準(zhǔn)。抑菌圈直徑20 mm 以上為極敏，15～20 mm 為高敏，10～14 mm為中敏，10 mm以下為低敏，沒(méi)有抑菌環(huán)為耐藥。

4 討 論

近年來(lái)，藥敏試驗(yàn)在臨床上被廣泛應(yīng)用，很好地指導(dǎo)了臨床用藥，減少了細(xì)菌的耐藥情況，為養(yǎng)殖業(yè)減少不必要的經(jīng)濟(jì)損失，為食品安全保駕護(hù)航。藥敏試驗(yàn)給臨床帶來(lái)便利的同時(shí)，也存在一些問(wèn)題：一是藥敏試驗(yàn)需要一定的條件，如恒溫培養(yǎng)箱、無(wú)菌操作臺(tái)等，所以一些小型診療機(jī)構(gòu)和小型養(yǎng)殖場(chǎng)無(wú)法開(kāi)展。二是藥敏試驗(yàn)屬于體外抑菌試驗(yàn)，所以試驗(yàn)結(jié)果受藥物的吸收率、給藥途徑等因素影響，臨床治療效果不能達(dá)到100%。三是試驗(yàn)中藥液的配制濃度不同，所以和臨床實(shí)際效果存在誤差。臨床中還有可能出現(xiàn)藥敏結(jié)果無(wú)高敏的情況，一般可以選擇2 種中敏或低敏感藥物聯(lián)合配伍使用，也會(huì)達(dá)到理想的治療效果，聯(lián)合用藥一般應(yīng)充分考慮是否有配伍禁忌。