潘 劍，韋 煜，葉定偉，朱 耀

(復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院泌尿外科，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院腫瘤學(xué)系，上海 200032)

在過去的60多年中，雄激素剝奪療法(androgen-deprivation therapy，ADT)一直是前列腺癌最有效和應(yīng)用最廣泛的全身治療方法[1]。ADT療效與其剝奪腫瘤雄激素的能力有關(guān)，因此雄激素代謝通路的相關(guān)基因是影響療效的潛在因素。

CYP19A1編碼的芳香化酶能將雄烯二酮和睪酮分別催化為雌酮和雌二醇[2]。CYP19A1基因多態(tài)性與男性的性激素水平(包括血清睪酮)相關(guān)[3-4]。一些研究報(bào)道了CYP19A1基因多態(tài)性與ADT療效[2,4-6]和前列腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的相關(guān)性[7-8]。ROSS等[6]證實(shí)CYP19A1 (rs1870050)位點(diǎn)的多態(tài)性可以預(yù)測(cè)作為ADT療效的預(yù)后標(biāo)志物[9]。然而，有研究報(bào)道CYP19A1 (rs1870050)基因位點(diǎn)的變異對(duì)高加索人和亞洲人的預(yù)后有著相反的影響[2]，這引發(fā)了其對(duì)不同人種預(yù)后具體影響的爭(zhēng)議。此外，TSUCHIYA等[5]發(fā)現(xiàn)若CYP19A1基因中四核苷酸重復(fù)數(shù)目的增加與轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者的總生存期(overall survival，OS)降低相關(guān)(41個(gè)月vs.61個(gè)月)。這提示CYP19A1基因多態(tài)性可能與患者的轉(zhuǎn)移狀態(tài)相關(guān)。

以往的研究并沒有報(bào)道不同人種CYP19A1基因多態(tài)性的變異頻率，為闡明CYP19A1基因多態(tài)性對(duì)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的具體影響以及人種因素對(duì)基因變異頻率的影響，本研究分析了臨床病理指標(biāo)與CYP19A1基因多態(tài)性的相關(guān)性，還有中國(guó)前列腺癌患者與其他人種中基因變異頻率的差異。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象選取2014至2019年在復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院確診的182例前列腺癌患者為研究對(duì)象，所有患者均經(jīng)病理活檢確診為前列腺腺泡腺癌，排除病理組織呈現(xiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌分化或者具有其他非腺癌特征者。根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)(American Joint Committee on Cancer，AJCC)TNM分期法確定患者臨床分期，同時(shí)收集確診年齡、確診時(shí)前列腺特異抗原(prostate specific antigen，PSA)、轉(zhuǎn)移負(fù)荷(根據(jù)CHAARTED試驗(yàn)的定義，將高轉(zhuǎn)移負(fù)荷定義為存在內(nèi)臟轉(zhuǎn)移，或骨轉(zhuǎn)移灶≥4個(gè)且存在至少一個(gè)骨盆或脊柱之外的轉(zhuǎn)移灶)、Gleason評(píng)分等臨床資料。入組前患者均已被告知研究風(fēng)險(xiǎn)，并均已簽署風(fēng)險(xiǎn)告知書與知情同意書，本研究已獲得本院倫理道德委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 基因測(cè)序按標(biāo)準(zhǔn)操作流程，采用試劑盒從患者身上采集血液并提取DNA，使用瓊脂糖凝膠電泳法檢驗(yàn)DNA的質(zhì)量。采用酶標(biāo)儀檢測(cè)DNA的濃度和純度，定量標(biāo)化至5 ng/μL，于4 ℃下分裝備用，并采用TaqMan探針法進(jìn)行基因分型，探針與引物均來源于ABI公司。試驗(yàn)擴(kuò)增的條件為：使DNA在98 ℃的溫度下進(jìn)行變性，持續(xù)15 s；退火步驟在52 ℃下進(jìn)行，持續(xù)20 s；擴(kuò)增持續(xù)20 s，在68 ℃下進(jìn)行，所有過程共38個(gè)循環(huán)。將攜帶變異等位基因(AC或CC)的患者歸為變異組，將不攜帶變異等位基因(AA)的患者歸為正常組。

1.3 文獻(xiàn)的納入計(jì)算機(jī)分別檢索中文數(shù)據(jù)庫和英文數(shù)據(jù)庫，包括Embase、WanFang Data、CBM、Ovid Medline、PubMed、CNKI、EMbase、Web of Science，檢索基于各個(gè)人種發(fā)表的涉及CYP19A1(rs1870050)基因的研究，檢索時(shí)間設(shè)置為2000年1月至2021年2月。在檢索過程中，英文數(shù)據(jù)庫和中文數(shù)據(jù)庫的檢索均采用自由詞與主題詞相結(jié)合的形式，中文檢索詞包含CYP19A1、rs1870050、基因多態(tài)性、前列腺癌/腫瘤等；英文檢索詞包含CYP19A1、rs1870050、polymorphism、prostate neoplasm/carcinoma/cancer等。排除標(biāo)準(zhǔn)：無各基因型的具體數(shù)量；涉及的數(shù)據(jù)并非首次報(bào)道；基因頻率的描述對(duì)象不是人類。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)評(píng)估整體樣本的群體代表性。分類變量、Gleason評(píng)分、轉(zhuǎn)移負(fù)荷、臨床病理分期、基因型用χ2檢驗(yàn)或者Fisher確切檢驗(yàn)法，數(shù)值變量(確診時(shí)年齡)采用非配對(duì)的t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有統(tǒng)計(jì)分析采使用R studio完成。

2 結(jié) 果

2.1 患者的一般資料正常組的平均確診年齡為(65.3±7.6)歲，變異組的為(65.8±8.1)歲；正常組82例，變異組100例，變異頻率54.9%(100/182)。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，CYP19A1 (rs1870050)基因型與患者的轉(zhuǎn)移負(fù)荷相關(guān)，攜帶變異等位基因的患者中高轉(zhuǎn)移負(fù)荷患者占比多(P=0.03)轉(zhuǎn)移負(fù)荷可以預(yù)測(cè)患者的基因型類型；而CYP19A1 (rs1870050)基因型與確診時(shí)年齡、Gleason評(píng)分、M1狀態(tài)、確診時(shí)PSA無關(guān)(表1)。

表1 研究對(duì)象的臨床信息 [例(%)]

2.2 文獻(xiàn)對(duì)比結(jié)果經(jīng)逐層篩選，最終納入英文文獻(xiàn)2篇，1篇的研究對(duì)象為高加索人[6]，另1篇的研究對(duì)象為日本人[19]，納入總樣本量為600例；無中文文獻(xiàn)符合入選要求。關(guān)于納入研究的基本特征，高加索人中變異組的占比為13.1%(68/520)，日本人中變異組的占比為35%(28/80)(表2)。為對(duì)比東亞人群與北美人群CYP19A1 (rs1870050)基因型頻率差異，整合本中心隊(duì)列與日本隊(duì)列，經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)：基因變異頻率最高的為中國(guó)人群(54.9%)，其次為日本人和高加索人；中國(guó)和日本的變異頻率為48.9%，顯著高于高加索人的變異頻率13.1%(P<0.001)，詳見表3；中國(guó)人的變異頻率也顯著高于美國(guó)人與日本人(P<0.01，圖1)。

圖1 三國(guó)隊(duì)列中CYP19A1基因的變異頻率對(duì)比

表2 納入研究的基本特征

表3 美國(guó)和東亞CYP19A1基因的各基因型分布

3 討 論

本研究通過分析病理指標(biāo)與位點(diǎn)多樣性之間的關(guān)聯(lián)性，發(fā)現(xiàn)攜帶變異等位基因的患者在發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移后，高轉(zhuǎn)移負(fù)荷的占比顯著增高，這提示變異的等位基因可能會(huì)導(dǎo)致前列腺癌侵襲性的增強(qiáng)。同時(shí)，本研究對(duì)比了不同人種攜帶變異等位基因的頻率，發(fā)現(xiàn)亞洲人群的CYP19A1(rs1870050)基因位點(diǎn)變異頻率較北美人群高，這可能部分解釋了CYP19A1(rs1870050) 基因在不同人種內(nèi)對(duì)預(yù)測(cè)治療療效作用相反的現(xiàn)象。

理論上，對(duì)芳香化酶的抑制可增加雄激素濃度而最終削弱ADT對(duì)前列腺癌的抑制作用。有研究提示[10]，芳香化酶的低表達(dá)與經(jīng)根治性切除術(shù)患者的較差預(yù)后有關(guān)。此外，一些臨床試驗(yàn)并未報(bào)道芳香化酶抑制劑針對(duì)晚期前列腺癌和CRPC治療效果[11-13]，這與體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致[14]。在ADT期間，對(duì)雄激素的充分抑制是ADT獲得良好治療效果的關(guān)鍵[15-16]。CYP17抑制劑醋酸阿比特龍可顯著降低轉(zhuǎn)移性激素敏感性前列腺癌患者的雄激素水平，提高患者的OS[17-18]。

有報(bào)道稱CYP19A1基因的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNPs)與包括血清睪酮在內(nèi)的性激素水平相關(guān)[3-4]，但不包括對(duì)rs1870050的分析。而之后SHIOTA等[19]的研究則揭示了CYP19A1基因多態(tài)性對(duì)ADT期間血清睪酮水平和預(yù)后的影響，發(fā)現(xiàn)ADT期間不同的血清睪酮水平取決于CYP19A1(rs1870050)的遺傳變異，攜帶該變異等位基因會(huì)使得芳香化酶的活性變高，最終導(dǎo)致血清睪酮水平的降低。雖然CYP19A1基因變異(rs1870050)影響芳香化酶活性的具體機(jī)制尚不清楚，但rs1870050位于CYP19A1基因功能啟動(dòng)子附近的5-UTR區(qū)，位點(diǎn)的變異可能會(huì)影響CYP19A1基因的表達(dá)，需要進(jìn)行位點(diǎn)多態(tài)性在不同人種及ADT期間患者血清雄激素水平與ADT療效相關(guān)性的驗(yàn)證研究，以及進(jìn)一步的生物學(xué)機(jī)制研究。

一些研究也提示了CYP19A1的遺傳變異與前列腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系[2]，但結(jié)果并不一致。此外，全基因組關(guān)聯(lián)研究未能表明CYP19A1基因多態(tài)性與前列腺癌易感性之間存在顯著關(guān)聯(lián)。與血清睪酮水平的結(jié)果一致，SHIOTA等[19]的研究發(fā)現(xiàn)，攜帶CYP19A1(rs1870050)基因變異等位基因的初診轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者在接受ADT時(shí)，進(jìn)展為去勢(shì)抵抗性前列腺癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著降低。但是，之前北美的一項(xiàng)研究顯示[6]，攜帶變異等位基因的患者在ADT期間發(fā)生進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)更高。LéVESQUE等[2]則報(bào)道了中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)攜帶這一變異等位基因的601例前列腺癌患者在ADT期間的進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)較低，這與北美研究的結(jié)果相反。CYP19A1(rs1870050)基因多態(tài)性對(duì)療效的不同作用可能與SNP (rs1870050)在不同人種中的變異頻率差異有關(guān)。此外，在一項(xiàng)日本前列腺癌患者的隊(duì)列研究中，CYP19A1基因中的(TTTA)序列的重復(fù)[5]和SNP (rs4775936)位點(diǎn)多態(tài)性均被證實(shí)與OS相關(guān)[4]。

綜上，以往關(guān)于CYP19A1(rs1870050)基因的研究大多集中在其位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)于治療療效與OS的預(yù)測(cè)效果上，缺乏位點(diǎn)多態(tài)性與前列腺癌侵襲性之間的研究。而病理特征是反映癌癥侵襲性強(qiáng)弱的重要指標(biāo)。本研究對(duì)位點(diǎn)多態(tài)性與病理特征之間的相關(guān)性進(jìn)行了分析，但未進(jìn)行位點(diǎn)差異對(duì)療效影響的分析，是本研究的不足所在。