鮑 和，楊 晶，王博博，陳麗婭，劉娜娜，張 睿，王 欣，高 陽，張海龍*

(1.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥學(xué)部，西安 710004；2.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安 710061)

蚊子草Filipendulapalmata(Pall) Maxim為薔薇科蚊子草屬多年生草本植物，是鄂倫春族常用民族藥，在鄂語中又名合葉子，主要分布于我國黑龍江、吉林、內(nèi)蒙古以及朝鮮、日本及俄羅斯遠(yuǎn)東等地區(qū)[1]。蚊子草在鄂倫春族人民的傳統(tǒng)應(yīng)用中常被用于治療痛風(fēng)、風(fēng)濕、癲癇、燒傷、凍傷以及婦科止血[2]。目前針對蚊子草的化學(xué)成分的研究較少，為了更好地對其開發(fā)利用，本課題利用硅膠柱色譜法、凝膠柱色譜法及半制備高效液相色譜法等對該植物的正丁醇部位進(jìn)行化學(xué)成分研究，利用波譜技術(shù)對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，共分離鑒定出10個化合物，大多數(shù)為黃酮苷類化合物，其中有6個為首次從該植物中分離得到。本研究為深入研究該植物的藥理活性及其作用機(jī)制提供了可能，為進(jìn)一步開發(fā)利用民族藥蚊子草奠定了研究基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 AVANCE Ⅲ HD 400 型核磁共振儀 (德國布魯克公司)；Gel Master-3000 型全自動GPC凝膠凈化系統(tǒng)，PuriMaster-5000 型二元全自動制備色譜系統(tǒng)(上海科哲生化科技有限公司)；ME104 型分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；DLSB-5/20型低溫冷卻循環(huán)泵(鄭州長城科工貿(mào)易有限公司)；Cosmosil C18半制備型色譜柱 (250 mm×10.0 mm，5 μm，日本半井株式會社)；N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(東京理化器械株式會社)。

1.2試藥 蚊子草采集于黑龍江省北安市通北林業(yè)局，經(jīng)張海龍教授鑒定為蚊子草Filipendulapalmata(Pall) Maxim，憑證標(biāo)本(編號：FP20200926)現(xiàn)保存于西安交通大學(xué)藥學(xué)院。柱層析硅膠(200～300目，青島海洋化工廠)；聚丙烯酰胺凝膠(美國通用電氣醫(yī)療系統(tǒng)貿(mào)易發(fā)展有限公司)；RP-C18柱層析填料(德國Merck公司)；核磁測定用氘代甲醇及氘代DMSO(上海務(wù)勝生物科技有限公司)；甲醇、二氯甲烷均為分析純(成都科隆化學(xué)品有限公司)。

2 提取分離

2.1蚊子草正丁醇部位的制備 取蚊子草干燥地上部分(15 kg)，用甲醇室溫冷浸后加熱回流提取3次，得蚊子草甲醇提取液，減壓濃縮得到929 g浸膏。將浸膏用適量蒸餾水分散后，分別用石油醚和乙酸乙酯除去脂溶性成分后，再用正丁醇進(jìn)行萃取，正丁醇萃取液經(jīng)減壓濃縮后，得到正丁醇提取物96 g。

2.2化合物的分離 將正丁醇提取物用硅膠(200～300目，500 g)柱色譜進(jìn)行初步分離，薄層檢識合并后得到12個餾分(Bu-1～Bu-12)。取Bu-9經(jīng)ODS常壓柱色譜進(jìn)行分離，以甲醇-水(10∶90～100∶0)為流動相進(jìn)行梯度洗脫，濃縮合并后共得到10個亞流份(Bu-9-1～Bu-9-10)。其中Bu-9-5經(jīng)Sephadex LH-20以甲醇為洗脫液得到5個亞流份(Bu-9-5-1～Bu-9-5-5)，將其中的Bu-9-5-3用半制備高效液相色譜(甲醇∶水=41∶59)純化得到化合物1(20.1 mg)，Bu-9-5-5經(jīng)HPLC(甲醇∶水=31∶69)制備得到化合物10(3.0 mg)。流份Bu-9-8經(jīng)正相硅膠柱色譜(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)進(jìn)行分離，得到7個亞流份(Bu-9-8-1～Bu-9-8-7)，將Bu-9-8-4用HPLC(甲醇∶水=53∶47)分離得到化合物2(14.8 mg)和化合物7(2.0 mg)。流份Bu-9-10經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜以甲醇為流動相粗分離得到5個亞流份(Bu-9-10-1～Bu-9-10-5)，其中Bu-9-10-2亞流份再經(jīng)HPLC(甲醇∶水=61∶39)純化得到化合物3(3.3 mg)，Bu-9-10-5經(jīng)HPLC(甲醇∶水=61∶39)純化得到化合物4(5.0 mg)。Bu-9-6經(jīng)正相硅膠色譜(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)進(jìn)行分離，得到5個亞流份(Bu-9-6-1～Bu-9-6-5)，其中Bu-9-6-3經(jīng)半制備高效液相色譜(甲醇∶水=39∶61)分離得到化合物8(1.7 mg)，Bu-9-6-4經(jīng)HPLC(甲醇∶水=38∶62)分離得到化合物5(31.3 mg)，Bu-9-6-5經(jīng)HPLC(甲醇∶水=45∶55)分離得到化合物9(4.0 mg)。Bu-9-9用Sephadex LH-20 以甲醇為洗脫劑得到5個亞流份(Bu-9-9-1～Bu-9-9-5)，其中Bu-9-9-3經(jīng)正相硅膠色譜(二氯甲烷∶甲醇=20∶1)進(jìn)行除雜后再經(jīng)HPLC(甲醇∶水=44∶56)純化得到化合物6(3.0 mg)。

3 結(jié)果

3.1化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色粉末，易溶于DMSO，微溶于甲醇，分子式C16H18O9。1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ：6.66 (1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.42 (1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.26 (1H，s，H-3)，5.39 (1H，d，J=4.8 Hz，H-1′)，2.39 (3H，s，-CH3)。13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ：182.49 (C-4)，168.87 (C-7)，163.38 (C-9)，161.63 (C-5)，157.92 (C-3)，108.80 (C-6)，105.54 (C-8)，100.28 (C-10)，99.95 (C-2)，94.95 (C-1′)，77.60 (C-5′)，76.82 (C-3′)，73.54 (C-2′)，70.02 (C-4′)，61.10 (C-6′)，20.50 (CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物1為去甲丁香色原酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2黃色粉末，溶于甲醇，分子式C20H18O11。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ：12.38 (1H，s，5-OH)，7.56 (1H，d，J=8 Hz，H-6′)，7.48 (1H，s，H-2′)，6.85 (1H，d，J=8.8 Hz，H-5′)，6.41 (1H，s，H-8)，6.20 (1H，s，H-6)，5.59 (1H，s，H-1′)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ：178.58 (C-4)，164.65 (C-7)，161.67 (C-5)，157.94 (C-9)，157.16 (C-2)，148.44 (C-4′)，144.95 (C-3′)，133.50 (C-3)，121.70 (C-6′)，121.57 (C-1′)，115.44 (C-2′)，115.04 (C-5′)，108.11 (Ara-1)，104.21 (C-10)，98.49 (C-6)，93.38 (C-8)，86.61 (Ara-4)，81.91 (Ara-2)，77.29 (Ara-3)，61.14 (Ara-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物2為萹蓄苷。

化合物3黃色粉末，溶于甲醇，分子式C21H20O10。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ：7.35 (1H，d，J=1.3 Hz，H-2′)，7.29 (1H，dd，J=5.5，2.1 Hz，H-6′)，6.92 (1H，d，J=5.5 Hz，H-5′)，6.30(1H，d，J=1.3 Hz，H-8)，6.15(1H，d，J=1.3 Hz，H-6)，5.37(1H，d，J=1 Hz，H-1″)，4.29 (1H，dd，J=2.2，1 Hz，H-2″)，3.82 (dd，J=6.2，2.2 Hz，H-3″)，3.48-3.43 (1H，m，H-5″)，3.43-3.38(1H，m，H-4″)，0.97(3H，d，J=5.3 Hz，H-6″)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:178.16 (C-4)，164.20 (C-7)，160.22(C-5)，157.81 (C-2，9)，148.17 (C-4′)，145.59 (C-3′)，134.77 (C-3)，121.26 (C-1′)，120.60 (C-6′)，115.14 (C-5′，2′)，109.04 (C-10)，102.11 (C-1″)，93.51 (C-8)，98.88 (C-6)，71.79 (C-4″)，71.07(C-3″)，70.63 (C-2″，5″)，16.25(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物3為山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物4淡黃色針狀結(jié)晶，溶于甲醇，分子式C15H10O7。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:12.51 (1H，s，5-OH)，10.80 (1H，s，7-OH)，9.39 (1H，s，3-OH)，9.62 (1H，s，3′-OH)，9.33(1H，s，4′-OH)，7.68(1H，d，J=2.1 Hz，H-2′)，7.55(1H，dd，J=2.1，8.5 Hz，H-6′)，6.89(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，6.41(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.19(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:175.95 (C-4)，164.23(C-7)，161.12(C-9)，156.83(C-2)，147.36 (C-5)，146.82(C-4′)，144.82(C-3′)，131.16(C-3)，122.75(C-1′)，120.26(C-6′)，114.82(C-2′)，114.70 (C-5′)，103.10 (C-10)，97.84(C-6)，93.01(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為槲皮素。

化合物5白色針狀結(jié)晶，溶于甲醇，分子式C7H6O5。1H-NMR (400 MHz，CD3OD) δ:7.09(2H，s，H-2，6)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD) δ:169.13(C-7)，145.84(C-3)，144.98(C-5)，138.21(C-4)，120.60(C-1)，108.97(C-2，6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為沒食子酸。

化合物6黃色粉末，溶于甲醇，分子式C23H22O13。1H-NMR(400 MHz，CD3OD) δ:1.81(3H，s，COCH3)，5.05(1H，d，J=5.2 Hz，H-2′)，5.31(1H，d，J=7.7 Hz，H-1″)，6.20(1H，d，J=1.9 Hz，H-6)，6.41(1H，d，J=1.9 Hz，H-8)，6.82 (1H，d，J=8.3 Hz，H-5″)，7.51(1H，d，J=2.1 Hz，H-2″)，7.64(1H，dd，J=8.5，2.1 Hz，H-6″)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:178.09 (C-4)，171.12 (COCH3)，165.30 (C-7)，161.58(C-5)，157.51(C-2)，157.09(C-9)，148.64(C-4′)，144.45 (C-3′)，134.35 (C-3)，121.71(C-6′)，121.37(C-1′)，116.26(C-5′)，114.63 (C-2′)，104.40(C-1′)，103.95(C-1′)，98.72(C-6)，93.47(C-8)，73.48(C-3′)，73.08 (C-5′)，71.50(C-2′)，68.83(C-4′)，63.12(C-6′)，19.02(COCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物6為槲皮素3-O-(6″-乙酰基)-β-D-吡喃半乳糖苷。

化合物7黃色粉末，溶于甲醇，分子式C21H20O11。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:8.00(2H，d，J=4.8 Hz，H-2′，6′)，6.87 (2H，d，J=5.2 Hz，H-3′，6′)，6.56 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.29 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，5.18 (1H，d，J=4.4 Hz，H-1″)，3.16-3.71(6H，m，H2″-6″)。13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δ:178.04 (C-4)，164.68(C-7)，161.71(C-5)，160.26(C-4′)，157.51(C-9)，157.07(C-2)，133.92(C-3)，130.77(C-2′，6′)，121.25(C-1′)，114.74 (C-3′，5′)，104.25(C-10)，103.15(C-1″)，98.51(C-6)，93.35(C-8)，76.10(C-5″，C-3″)，73.92(C-2″)，69.60(C-4″)，65.80(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物7為山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8淡黃色油狀物，溶于甲醇，分子式C26H32O11。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.13(1H，d，J=5.2 Hz，H-5)，6.91(1H，d，J=5.6 Hz，H-2)，6.80 (1H，dd，J=5.2，5.2 Hz，H-6)，7.02 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，4.86 (1H，d，J=8.4 Hz，H-1)，4.74 (1H，d，J=4.0 Hz，H-7)，4.70 (2H，d，J=4.4 Hz，H-7)，4.23 (2H，dd，J=5.6，6.0 Hz，H-9)，3.84 (2H，m，H-9′)，3.11 (1H，m，H-8)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:149.55 (C-4)，147.72 (C-3)，146.08 (C-4)，145.92 (C-3′)，136.06(C-1)，132.35(C-1)，118.66(C-6)，118.39(C-6′)，116.59(C-5)，114.68(C-5′)，110.20(C-2)，109.56(C-2)，86.09 (C-7)，85.69(C-7)，71.32(C-9)，71.27(C-9′)，55.01(3，5-OCH3)，54.13(C-8，8′)，53.95 (3′，5′-OCH3)，101.42(C-1″)，76.80(C-5″)，76.44(C-3″)，73.50(C-2″)，69.92(C-4″)，61.10(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物8為松脂醇-4-O-吡喃葡萄糖苷。

化合物9黃色粉末，溶于甲醇，分子式C19H30O7。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:5.87(1H，s，H-4)，5.78(1H，dd，J=4.4，4.4 Hz，H-7)，5.64 (1H，dd，J=6，6.4 Hz，H-8)，4.40 (1H，dd，J=5.2，4 Hz，H-2′)，4.34 (1H，d，J=5.2 Hz，H-1′)，3.60(2H，m，H-6′)，3.20(1H，m，H-9)，3.17-3.01(3H，m，H-4′，H-5′，H-3′)，2.66(1H，d，J=6.4 Hz，H-6)，2.38(1H，s，H-2)，2.06(1H，s，H-2)，1.85(3H，s，H-10)，1.30(3H，d，J=6.4 Hz，H-13)，1.00 (6H，d，J=10.4 Hz，H-11，H-12)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:200.65 (C-3)，164.49(C-5)，136.83(C-7)，127.43(C-8)，124.72(C-4)，101.05(C-1′)，76.69(C-3)，76.59(C-9)，75.57(C-2′)，73.86(C-3′)，70.10(C-4′)，61.27(C-6′)，55.36(C-6)，47.17(C-2)，35.71(C-1)，26.64(C-12)，26.20(C-11)，22.36(C-10)，19.63(C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物9為3-氧代-α-紫羅蘭醇-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物10棕黃色油狀物，溶于水，微溶于甲醇，分子式C15H17O10。1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ:7.60 (1H，d，J=10.8 Hz，H-7′)，7.12(1H，s，H-2′)，7.01 (1H，d，J=4.4 Hz，H-6′)，6.91 (1H，d，J=2.0 Hz，H-5′)，6.36 (1H，d，J=10.0 Hz，H-8′)，4.21 (1H，dd，J=2.8，5.6 Hz，H-4)。13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ：175.78 (C-1)，147.28 (C-4′)，146.41 (C-7′)，144.39 (C-3′)，126.90 (CH，C-1′)，122.73 (CH，C-6′)，116.12 (C-5′)，115.00 (C-8′)，73.76 (C-5)，72.95 (C-2)，70.22 (C-3)，66.80 (C-4)，64.88 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物10為5-O-反式-咖啡?；咸烟侨┧?。

4 討論

民族藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥文化的一部分，在歷史上發(fā)揮了重要作用，應(yīng)得到進(jìn)一步的繼承和發(fā)揚(yáng)，尤其是作為沒有文字記載的人數(shù)較少的少數(shù)民族常用藥，如不及時加以整理、研究和發(fā)展，有失傳的危險。本課題組對民族藥，尤其是東北地區(qū)的鄂倫春族民族藥的化學(xué)成分和藥理活性開展了一系列的研究工作[13-20]，蚊子草作為鄂倫春族的民間常用藥，具有治療痛風(fēng)及風(fēng)濕的功效，還具有一定的抗炎活性。同時，因其具有特殊的香味，東北地區(qū)及俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)人們也將新鮮采集的蚊子草腌制后食用。但目前針對該植物化學(xué)成分的研究較少，尤其是對其強(qiáng)極性化學(xué)成分的研究更少。本文針對蚊子草正丁醇部位的強(qiáng)極性成分，運(yùn)用各種色譜技術(shù)尤其是高效液相色譜技術(shù)進(jìn)行研究，分離鑒定出了10個化合物，大部分為黃酮類及其苷類化合物，其中6個化合物為首次從該植物中分離得到，對該植物正丁醇部位化學(xué)成分的進(jìn)一步研究正在進(jìn)行中。本研究為進(jìn)一步開發(fā)利用我國東北地區(qū)的民族藥藥用資源提供了科學(xué)依據(jù)。