黃寶學(xué) 韋顯凱 班雪花 梁素聯(lián) 黃忠行 王金含

摘要 [目的]了解田東縣中小豬場(chǎng)不同豬群的豬瘟免疫狀況，為田東縣防控豬瘟提供科學(xué)依據(jù)。[方法]試驗(yàn)選擇田東縣10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)10個(gè)豬場(chǎng)，采集免疫21 d后的經(jīng)產(chǎn)母豬、仔豬、生長(zhǎng)育肥豬血清樣本，應(yīng)用阻斷ELISA方法對(duì)采集血清樣品進(jìn)行豬瘟免疫抗體檢測(cè)，比較相同疫苗不同胎次母豬群、相同疫苗不同免疫次數(shù)仔豬群、使用4種不同病毒含量（A組750RID、B組7 500RID、C組20 000RID、D組30 000RID）豬瘟細(xì)胞苗的生長(zhǎng)育肥豬群抗體水平。[結(jié)果]經(jīng)產(chǎn)母豬群抗體陽性率為83.61%，總離散度為45.97%，7胎及7胎以上母豬群豬瘟免疫抗體陽性率最低，為58.33%。仔豬的一免免疫抗體陽性率為52.17%，低于國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（≥70%）;二免免疫抗體陽性率為81.82%，顯著高于國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，比一免抗體陽性率提高了29.65百分點(diǎn)。4種不同病毒含量豬瘟細(xì)胞苗免疫生長(zhǎng)育肥豬在末次免疫21 d后，均產(chǎn)生較好的免疫效果，但不同病毒含量豬瘟疫苗之間存在一定差異。[結(jié)論]經(jīng)產(chǎn)母豬群抗體離散度較大，仔豬一次免疫后抗體水平低于保護(hù)值，不同病毒含量豬瘟疫苗免疫效果存在一定差異。研究結(jié)果為進(jìn)一步提高豬瘟免疫水平提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞 豬瘟;抗體;免疫效果

中圖分類號(hào) S-858.28? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A? 文章編號(hào) 0517-6611（2021）22-0122-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.22.029

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Immune Antibodies Level Monitoring of Classical Swine Fever in Small-sized and Medium-sized Pig Farms in Tiandong County

HUANG Bao-xue ?WEI Xian-kai ?BAN Xue-hua1 et al

（1. Animal Disease Prevention and Control Center in Tiandong County of Guangxi， Tiandong，Guangxi 531500;2. Guangxi Animal Disease Prevention and Control Center， Nanning，Guangxi? 530001）

Abstract [Objective] To understand the immunization status of classical swine fever（CSF） in different pig herds of small-sized and medium-sized pig farms in Tiandong County， and provide scientific basis for the prevention and control of CSF in Tiandong County. [Method]In the experiment， 10 pig farms from 10 towns of Tiandong County were selected to collect serum samples from postpartum sows， piglets， and finishing pigs on the 21st day after immunization. The blocking ELISA method was used to detect the immune antibodies of CSF.The immune antibody levels among the different parities of postpartum sow herd immunized with the same vaccine， the piglet herd immunized with the same vaccine with different immunization times， the finishing pig herd with 4 different virus content（750RID in group A， 7 500RID in group B， and 20 000RID in group C，? 30 000RID in group D） were compared. [Result] The positive rate of antibodies in the postpartum sow herd was 83.61%， and the total dispersion was 45.97%. The antibodies positive rate of CSF in sows with the parity of no less than 7 was the lowest（58.33%）.? The antibodies positive rate of the piglets first immunization was 52.17%， which was lower than the national standard（≥70%）. The antibodies positive rate of the second immunization was 81.82%， which was significantly higher than the national standard， and increased 29.65 percent points than the antibodies positive rate of the first immunization. After the finishing pigs were immunized with four different RID CSF cell vaccines 21 days after the last immunization， better immune effect was obtained， but the immune effect had certain differences among different RID vaccines. [Conclusion] The antibody dispersion of the postpartum sow herd was larger， and the antibody level of the piglets after the first immunization was lower than the protection value.The immunization effect had certain differences among different RID CSF vaccines. The research results provided? the basis for further improving the immune level of CSF.

Key words Classical swine fever;Antibody;Immune effect

豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種高度接觸性傳染病，它仍然是影響當(dāng)前養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一[1]，一旦發(fā)生豬瘟將給豬場(chǎng)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。在當(dāng)前及未來的很長(zhǎng)一段時(shí)間里，依靠疫苗免疫接種仍然是我國豬瘟防控采取的主要策略[3]，其免疫效果直接影響防控成效[4]。因此，做好疫苗免疫效果評(píng)估，保持豬群處于較高的群體免疫抗體水平是防止豬瘟發(fā)生的重要手段。筆者對(duì)田東縣10個(gè)中小豬場(chǎng)進(jìn)行豬瘟免疫抗體水平檢測(cè)，結(jié)合檢測(cè)結(jié)果以及對(duì)各豬場(chǎng)豬瘟免疫信息的調(diào)查結(jié)果，初步了解了10個(gè)中小豬場(chǎng)各個(gè)免疫豬群的抗體水平，比較不同胎次母豬群、不同免疫次數(shù)仔豬群、使用不同病毒含量豬瘟細(xì)胞苗生長(zhǎng)育肥豬群的抗體水平，總結(jié)提高豬瘟免疫效果的方法，旨在為田東縣豬瘟防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 采樣方法與樣品來源

選擇田東縣10個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)共10個(gè)豬場(chǎng)采樣，每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)1個(gè)豬場(chǎng)，共457份血清樣品。10個(gè)豬場(chǎng)共使用4種不同病毒含量的豬瘟細(xì)胞苗，設(shè)為A組（豬場(chǎng)A1、A2、A3、A4）、B組（豬場(chǎng)B1、B2）、C組（豬場(chǎng)C1、C2、C3）、D組（豬場(chǎng)D1）。場(chǎng)名以英文字母開頭加阿拉伯?dāng)?shù)字命名，其中同一個(gè)英文字母代表使用同種病毒含量豬瘟細(xì)胞苗的豬場(chǎng)，阿拉伯?dāng)?shù)字代表豬場(chǎng)使用同種疫苗的順序號(hào)。使用WinEpi流行病學(xué)軟件，設(shè)置預(yù)期群抗體陽性率90%、置信水平95%、可接受誤差8%，采用估計(jì)抗體陽性率方法[5]分別計(jì)算每個(gè)豬場(chǎng)的采樣數(shù)量。所有豬場(chǎng)按經(jīng)產(chǎn)母豬、仔豬、生長(zhǎng)育肥豬各占每個(gè)場(chǎng)全場(chǎng)采樣數(shù)量的1/3左右進(jìn)行采樣，其中仔豬群共2次采集血液，分別于一免與二免21 d后采集，每次采樣數(shù)量各占50%。經(jīng)產(chǎn)母豬群與生長(zhǎng)育肥豬群采集1次，選擇末次免疫21 d后的健康豬進(jìn)行血液采集，按照常規(guī)方法分離血清，并置于-20 ℃下保存?zhèn)溆谩＞唧w采樣情況見表1。分別對(duì)使用相同疫苗不同胎次母豬群、使用相同疫苗不同免疫次數(shù)仔豬群、生長(zhǎng)育肥豬不同病毒含量豬瘟細(xì)胞苗進(jìn)行豬瘟免疫抗體水平檢測(cè)。

1.2 免疫情況調(diào)查

采用現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查和查看各個(gè)豬場(chǎng)養(yǎng)殖檔案登記簿，重點(diǎn)查看免疫接種記錄，包括免疫接種時(shí)間、疫苗種類、疫苗病毒含量等免疫信息。

1.3 試劑

豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（批號(hào)180925），購自武漢科前生物股份有限公司。

1.4 檢測(cè)方法與結(jié)果判定

采用ELISA檢測(cè)，操作步驟及結(jié)果判定參照ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行。樣品阻斷值≤30%判為陰性，阻斷值≥40%判為陽性即抗體合格。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

使用SPSS 17.0和Excel軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬場(chǎng)免疫情況調(diào)查

10個(gè)豬場(chǎng)共使用4種不同病毒含量的豬瘟細(xì)胞苗，設(shè)為A、B、C、D組。其中，A組疫苗成品苗病毒含量為750RID;B組疫苗成品苗病毒含量為7 500RID;C組疫苗成品苗病毒含量為20 000RID;D組疫苗成品苗病毒含量為30 000RID（表2）。經(jīng)產(chǎn)母豬每年3次普免或跟胎免疫;仔豬25～35日齡首免，50～65日齡二免;生長(zhǎng)育肥豬95～110日齡加強(qiáng)免疫1次。所有豬場(chǎng)每次免疫劑量均為1頭份。

2.2 不同胎次經(jīng)產(chǎn)母豬豬瘟免疫抗體水平檢測(cè) 從10個(gè)豬場(chǎng)使用的4組疫苗中，隨機(jī)選取一組疫苗對(duì)不同胎次經(jīng)產(chǎn)母豬進(jìn)行豬瘟免疫。試驗(yàn)選取A組疫苗的A1、A2、A3、A4豬場(chǎng)進(jìn)行免疫抗體水平檢測(cè)。由表3可知，經(jīng)產(chǎn)母豬總陽性率為83.61%，7胎以上豬瘟免疫抗體陽性率最低（58.33%），3～4胎經(jīng)產(chǎn)母豬豬瘟免疫抗體陽性率最高（94.74%）。7胎及7胎以上母豬豬瘟抗體陽性率與其他胎次相比差異顯著（P<0.05），1～2胎、3～4 胎、5～6胎之間差異不顯著（P>0.05）?？傠x散度為45.97%，1～2胎離散度為46.68%，3～4胎離散度為42.41%，5～6胎離散度為43.01%，7胎及7胎以上離散度為57.92%?？贵w陽性率呈現(xiàn)“中間高兩端低”現(xiàn)象，抗體離散度與阻斷均值成反比，阻斷均值越高，離散度越低。

2.3 仔豬不同免疫次數(shù)豬瘟免疫抗體水平的比較

從10個(gè)豬場(chǎng)使用的4組疫苗中，隨機(jī)選取1組疫苗對(duì)仔豬進(jìn)行不同免疫次數(shù)豬瘟免疫。試驗(yàn)選取C組疫苗的C1、C2、C3豬場(chǎng)進(jìn)行抗體水平檢測(cè)。由表4可知，一免檢測(cè)血清樣品數(shù)23份，豬瘟免疫抗體陽性數(shù)12份，免疫抗體陽性率為52.17%，低于國家規(guī)定的要求標(biāo)準(zhǔn)（≥70%）。二免檢測(cè)血清樣品數(shù)22份，豬瘟免疫抗體陽性數(shù)18份，免疫抗體陽性率為81.82%，超過了國家規(guī)定要求標(biāo)準(zhǔn)。二免后的免疫抗體陽性率比一免后免疫抗體陽性率，提高了29.65百分點(diǎn)。

2.4 不同RID豬瘟細(xì)胞苗免疫育肥豬抗體水平分析

根據(jù)豬場(chǎng)免疫情況調(diào)查結(jié)果（表5），對(duì)使用不同病毒含量的豬瘟兔化弱毒細(xì)胞苗免疫的10個(gè)豬場(chǎng)生長(zhǎng)育肥豬群進(jìn)行豬瘟抗

體水平檢測(cè)，A、B、C、D組疫苗在末次免疫21 d后豬瘟抗體陽性率均超過農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的免疫抗體陽性率（≥70%），但不同疫苗之間存在一定差異：C組抗體陽性率和抗體阻斷值均較高，且離散度低于A、B、D組（表5）。這表明使用C組疫苗免疫后產(chǎn)生的豬瘟抗體水平最高。

3 討論

豬瘟疫苗免疫最終的目的是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生足夠的抗體來抵抗豬瘟野毒的侵襲，豬場(chǎng)的飼養(yǎng)環(huán)境、氣候條件、豬的體質(zhì)及疫苗選擇等因素均能影響豬瘟免疫抗體水平，因此定期開展豬瘟免疫效果監(jiān)測(cè)非常重要[6]。一個(gè)豬場(chǎng)不同豬群的抗體水平不同，豬場(chǎng)疫病的暴發(fā)首先從抗體水平低的豬群開始發(fā)病，然后蔓延全場(chǎng)。監(jiān)測(cè)不同免疫豬群豬瘟免疫抗體水平的變化，了解豬群對(duì)疾病的抵抗能力，分析豬場(chǎng)免疫效果，推測(cè)豬群有發(fā)生豬瘟的潛在隱患，進(jìn)而針對(duì)豬場(chǎng)免疫薄弱環(huán)節(jié)制定相應(yīng)防控措施來提高豬場(chǎng)的整體免疫水平，降低豬群流行野毒的感染率，對(duì)于早期控制疫病、保障豬場(chǎng)高效健康養(yǎng)殖具有重要意義。

經(jīng)產(chǎn)母豬是豬場(chǎng)健康發(fā)展的核心豬群。此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，不同胎次經(jīng)產(chǎn)母豬的整體豬瘟免疫抗體陽性率為83.61%，顯著高于國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（≥70%），可對(duì)豬群產(chǎn)生免疫保護(hù)，這說明廣大養(yǎng)豬場(chǎng)重視經(jīng)產(chǎn)母豬群的豬瘟免疫工作，已經(jīng)認(rèn)識(shí)到經(jīng)產(chǎn)母豬群對(duì)豬場(chǎng)擴(kuò)大生產(chǎn)性能與保持穩(wěn)定生產(chǎn)的重要性。各胎次中3～4胎母豬抗體陽性率最高，可能由于處于這個(gè)胎次的母豬已經(jīng)建立了穩(wěn)定的免疫應(yīng)答機(jī)制，在疫苗免疫時(shí)能夠迅速、有效地產(chǎn)生抗體。但必須注意的是，5胎次以上免疫抗體陽性率逐漸下降，推測(cè)生長(zhǎng)周期長(zhǎng)的母豬感染PCV-2型、PRRSV等免疫抑制病或發(fā)生豬瘟帶毒綜合征，不能產(chǎn)生足夠的抗體[7-8]。抗體水平低的經(jīng)產(chǎn)母豬在妊娠期間容易感染流行的野毒，造成母豬繁殖障礙，產(chǎn)下木乃伊胎、死胎、弱胎?；加胸i瘟帶毒綜合征的經(jīng)產(chǎn)母豬通過垂直傳播不僅會(huì)導(dǎo)致新生仔豬發(fā)病、死亡，而且會(huì)使存活仔豬成為持續(xù)感染者，可長(zhǎng)期帶毒、排毒，機(jī)體內(nèi)形成天然免疫耐受、先天性免疫麻痹，使后天免疫應(yīng)答能力很難發(fā)揮作用，幾乎不產(chǎn)生中和抗體[8]，給豬場(chǎng)帶來豬瘟發(fā)生的惡性循環(huán)。抗體離散度是評(píng)價(jià)免疫豬群抗體水平均勻度和整齊度的指標(biāo)，豬群離散度越小說明免疫效果越好，豬群整體的離散度一般要求在40%以下[9]。此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)不同胎次經(jīng)產(chǎn)母豬的離散度均超過40%，3～4胎母豬最低，為42.41%;7胎及7胎以上母豬最高，為57.92%，說明豬群個(gè)體間豬瘟抗體水平差異較大，存在發(fā)生豬瘟的重大隱患。使經(jīng)產(chǎn)母豬處于一個(gè)較高且整齊的豬瘟抗體水平是有效控制豬瘟發(fā)生的重要手段，生產(chǎn)上豬場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)高胎次母豬的豬瘟抗體水平監(jiān)測(cè)，淘汰經(jīng)多次免疫后仍不合格的豬只。同時(shí)，加大母豬更新率，淘汰生產(chǎn)性能不穩(wěn)定的高胎次母豬，以提高整個(gè)豬場(chǎng)的生產(chǎn)成績(jī)。

該研究結(jié)果表明仔豬二次免疫的抗體陽性率比一次免疫陽性率提高29.65百分點(diǎn)，與潘孝成等[10]對(duì)安徽6家豬場(chǎng)的研究結(jié)果（仔豬二次免疫抗體陽性率比一次免疫抗體陽性率提高35.2百分點(diǎn)）不一致，可能是由于豬場(chǎng)的飼養(yǎng)條件不同等因素所致。對(duì)當(dāng)前的豬場(chǎng)僅僅實(shí)施一次免疫是不夠的，只有實(shí)施二次免疫，才能使豬群獲得較高的免疫抗體水平，有效防控豬瘟疫病的發(fā)生。仔豬一免后抗體陽性率僅為52.17%，抗體水平低于保護(hù)值，存在發(fā)生豬瘟的風(fēng)險(xiǎn)。在當(dāng)前豬瘟發(fā)病日齡趨于幼齡[11]，臨床上呈現(xiàn)非典型性豬瘟并能繼發(fā)細(xì)菌病混合感染的流行形勢(shì)下，必須做好仔豬一免后出現(xiàn)免疫空白期的防控工作，除了采取加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，增強(qiáng)豬只抗病能力、建立健全的生物安全體系、實(shí)行自繁自養(yǎng)及全進(jìn)全出等措施外，還要加強(qiáng)免疫工作才能控制豬瘟的廣泛流行。王娟萍等[12]研究表明，哺乳仔豬實(shí)行哺乳前超免、21日齡時(shí)二免、60日齡三免可使免疫仔豬抗體陽性率接近90%。

當(dāng)前，豬瘟已退出國家強(qiáng)制免疫病種，豬瘟免疫由養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）自行購買疫苗實(shí)施免疫注射，目前市售豬瘟疫苗種類繁多，而選擇適合的疫苗是豬場(chǎng)成功免疫的前提。該試驗(yàn)結(jié)果表明結(jié)合豬場(chǎng)免疫信息調(diào)查結(jié)果，選擇免疫程序相同、豬群使用疫苗種類一致性、免疫器官發(fā)育趨向成熟等方面的生長(zhǎng)育肥豬群來研究不同4種RID豬瘟細(xì)胞苗的免疫效果。評(píng)估每種疫苗的免疫效果，從免疫后豬群抗體陽性率、抗體總平均值、離散度等方面綜合評(píng)價(jià)，抗體陽性率和阻斷值高，而離散度低，表明該疫苗的免疫效果最好[13]。該研究結(jié)果表明4種不同病毒含量豬瘟細(xì)胞苗在末次免疫21 d后，免疫抗體陽性率均達(dá)到國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)（≥70%），表明4種疫苗具有良好的免疫效果。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，病毒含量最高的D組免疫效果最差，C組呈現(xiàn)相對(duì)較高的抗體陽性率和抗體阻斷值，且離散度低于A、B、D組。這表明使用C組疫苗免疫后產(chǎn)生的豬瘟抗體水平最高。由此可見，疫苗誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的強(qiáng)弱與病毒含量高低不成正比。選擇一定的病毒含量能刺激機(jī)體產(chǎn)生足夠的保護(hù)性抗體即可，病毒含量過高、超過動(dòng)物機(jī)體免疫系統(tǒng)的最大承受能力后，會(huì)造成免疫抑制。病毒含量過低，則不能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生足夠抗體。該試驗(yàn)結(jié)果表明，豬瘟兔化弱毒細(xì)胞苗病毒含量為20 000RID時(shí)免疫效果較好。生產(chǎn)中豬場(chǎng)要定期對(duì)豬群進(jìn)行抗體水平檢測(cè)，參考監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)來選擇疫苗，以實(shí)現(xiàn)最佳的免疫效果和豬場(chǎng)成本效益最大化。

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