彭德粥，張真，馬振剛

（重慶市媒介昆蟲重點實驗室，重慶市動物生物學(xué)重點實驗室，重慶師范大學(xué)，重慶，401331）

蜂毒是工蜂在防御其他動物對本身或是蜂巢進攻時刺向敵害從蜇針排出的透明液體，分泌場所是毒腺和副毒腺，儲存于毒囊。天然的蜂毒具有芳香氣味、味苦，酸性。在室溫下很快干燥成黃褐色粉末，易溶于酸和水，不溶于乙醇?？梢酝ㄟ^DEAE-Sephadex A50 層析柱分離蜜蜂蜂毒得到有效成分[1]。

1 蜂毒的應(yīng)用概況

最早的蜂毒療法可以追溯到遠古時代，早期的古人類在野外狩獵時就會被野蜂蜇傷。通過對大自然的認識、學(xué)習(xí)和人類的不斷成長，人類也逐漸意識到了蜜蜂的蜂毒能夠治療諸多疾病。在明朝就有書籍《物理小識》記載了關(guān)于“毒針”的制作方法，并且有文物記載在古埃及、古羅馬、古印度和沙俄時代均有用蜂毒治療風(fēng)濕病和關(guān)節(jié)炎的實例[2]。隨著現(xiàn)代生命科學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，很多科學(xué)家對其進行了多方面的深入研究，而今蜂毒更多的應(yīng)用體現(xiàn)在醫(yī)學(xué)臨床，同時也有美妝和農(nóng)業(yè)的相關(guān)方面的應(yīng)用。

2 蜂毒的主要活性成分

2.1 磷脂酶A2 （Phospholipase A2,PLA2）

磷酸酯A2 是蜂毒的過敏原之一，是約占蜂毒總干重的8%～>12%的天然磷脂催化酶[3]。20 世紀50 年代，PLA2 被Kuchler 等第一次在意大利蜜蜂蜂毒中發(fā)現(xiàn)[3]。因其能夠在蜂毒溶血肽存在情況下讓紅細胞溶解，又稱“間接的溶血毒素”[4]。

2.2 蜂毒溶血肽（Melittin）

蜂毒溶血肽與蜂毒肽是同一種物質(zhì)，是蜂毒中主要的多肽，占蜂毒干重較多的一種活性成分，約占蜂毒干重的50%。它的分子生物學(xué)機理有兩個方面： （1） 膜裂解作用； （2）作用于蛋白[5]。1972 年Kindas-Mugge[6]等就利用提取的意大利蜜蜂毒腺總mRNA 并將其注入青蛙的卵母細胞中這一方法順利合成了蜂毒肽的前體蛋白（promelittin）。

目前蜂毒肽的分離純化主要是應(yīng)用色譜原理，過葡聚糖凝膠柱結(jié)合離子交換柱洗脫。隨著科研人員的不斷研究改進，現(xiàn)在純化過程簡單易操作且純度和產(chǎn)量也有了大幅度的提高[7]。

2.3 蜂毒明肽（Apamin）

蜂毒明肽占蜂毒干重的2%左右，是蜂毒活性成分中次要的多肽，是一種很強的神經(jīng)毒素。20 世紀末Gmachl 和Kreil 通過克隆等技術(shù)建立了西方蜜蜂工蜂毒腺的cDNA 文庫，并且得到了由46 個氨基酸殘基組成的前明肽的cDNA 序列[8]。

2.4 肥大細胞脫粒肽（Mast cell degranulating peptide，MCDP）

肥大細胞脫粒肽（又稱肽401） 是占蜂毒總干重的1%左右的重要組分。其與肥大細胞的受體結(jié)合從而促使肥大細胞活化后釋放組胺和炎性物質(zhì)。可以從cDNA 文庫中獲取MCDP原基因的cDNA 序列。

2.5 透明質(zhì)酸酶（Hyaluronidase，Hya）

透明質(zhì)酸酶無直接毒性，是蜂毒的主要過敏原之一。因其能夠協(xié)助蜂毒進入動物組織內(nèi)滲透和擴散，又被稱為蜂毒的“擴散因子”[9]。Gmachl 和Kreil 通過克隆和測定編碼基因，獲得了含有編碼Hya 完整的基因序列[8]。

除了上述的具有代表性的活性酶類和多肽物質(zhì)，蜂毒中還含有具有靜和降壓等作用的鎮(zhèn)靜肽和如多馬胺和組織胺等多種生物胺類。

3 蜂毒的應(yīng)用

3.1 蜂毒在醫(yī)藥和臨床上的應(yīng)用

蜂毒療法在古籍就有詳細的記載，用帶有蜂毒的蜜蜂蜇刺患者的皮膚從而達到治療的效果。隨著現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展，蜂毒注射液是一種典型的治療手段，它既保留了蜂毒的有效成分又降低了有害成分對身體的不良反應(yīng)[10]。

3.1.1 抗菌作用

潘凌子[11]等通過倍比稀釋法和牛津杯法表明了蜂毒溶血肽對細菌和真菌有很強的殺傷能力，并且闡明了其抑菌效果與溫度和pH值相關(guān)。蜂毒肽的N 端（主要為疏水區(qū)域）和C 端（主要為親水區(qū)域） 兩者能夠形成兩親性的α- 螺旋結(jié)構(gòu)從而破壞細菌的生物膜結(jié)構(gòu)，進而造成內(nèi)容物漏出殺死微生物。有研究表明適當降低N 端疏水區(qū)疏水氨基酸的疏水性可以提高抗菌作用同時還可降低其溶血作用[12]。

3.1.2 抗腫瘤

近年來，有研究表明蜂毒抗腫瘤的主要機制如下： （1） 增加瘤細胞放療敏感性；（2） 抑制瘤細胞血管生成； （3） 直接殺傷腫瘤細胞； （4） 誘導(dǎo)瘤細胞凋亡； （5） 增強免疫[13]。目前Melittin 已經(jīng)被證實了能夠誘導(dǎo)眾多癌細胞系的凋亡，同時它還影響著癌細胞的增殖、壞死和癌細胞的遷移、轉(zhuǎn)化以及侵害，其主要是通過阻斷金屬激酶的啟動子而抑制腫瘤細胞的侵襲。蜂毒被認為是天然免疫系統(tǒng)的激動劑，促進腫瘤微環(huán)境中免疫細胞的啟動和聚集，產(chǎn)生針對腫瘤細胞相關(guān)抗原的反應(yīng)就需要先天免疫的激活，從而驅(qū)動了Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生。近期就報道了一個患難治性的脂肪肉瘤的病人通過蜂毒的配合治療最終得到了有效控制，且在16 個月后復(fù)查未發(fā)現(xiàn)有復(fù)發(fā)現(xiàn)象[14]。

3.1.3 治療風(fēng)濕病

臨床研究表明蜂毒中的多肽活性分子能夠改變血管的通透性、減緩白細胞的遷移以及阻礙前列腺E2 的合成，臨床上常用來治療風(fēng)濕病[2]。

3.1.4 治療高血壓

蜂毒中的鎮(zhèn)靜肽具有鎮(zhèn)靜和降壓等藥理作用，同時PLA2 也具有降壓的作用。據(jù)報道PLA2 一般應(yīng)用于臨床治療癥狀性的高血壓和高血壓疾病，其主要原因在于組織胺的釋放改變了外周的阻力[15]。

3.1.5 預(yù)防人的HIV 感染

用以毒攻毒的方法可以預(yù)防HIV 病毒的感染。蜂毒顆?？衫卫蔚毓潭ㄔ贖IV 病毒的蛋白質(zhì)外殼上并釋放Melittin 在其保護性外殼上刺穿缺口，這樣就可以大大減少病毒的數(shù)量[16]。

3.1.6 緩解阿爾茨海默病

有研究人員在對小鼠的認知功能的研究中發(fā)現(xiàn)蜂毒明肽能夠顯著地提高阿爾茨海默病小鼠的認知能力。實驗中先通過給小鼠注射藥物Aβ25－35 從而構(gòu)建AD 模型小鼠，兩周之后再向AD 模型小鼠體內(nèi)注射不同劑量的蜂毒明肽，連續(xù)五天。結(jié)果表明：可能由于Aβ 表達量的減少和ImAHP 含量的降低，蜂毒明肽對Aβ25－35 構(gòu)建的患有阿爾茨海默病的小鼠具有保護作用，所以蜂毒明肽在未來可能有望用于治療人類的阿爾茨海默病[17-18]。

3.1.7 用于治療其他疾病

蜂毒除了用于上述疾病的治療外，臨床試驗表明蜂毒還可用于抗輻射和治療心血管疾病、支氣管哮喘、乙型病毒性肝炎、紅斑狼瘡、肩周炎、乳腺增生和帶狀皰疹等多種疾病，值得臨床的大力推廣應(yīng)用[19-26]。

3.2 蜂毒的美容作用

隨著許多蜂產(chǎn)品被用于美妝行業(yè)，蜂毒的美容效果也逐漸受到了人們和美妝行業(yè)開發(fā)商的重視。蜂毒的美容作用主要有以下幾個方面。

（1） 對痤瘡的療效：蜂毒可有效地改善患者面部黑頭粉刺和閉口粉刺等癥狀，主要是通過對皮膚表面的細菌進行抑制生長而實現(xiàn)的。

（2） 除皺紋作用：用蜂毒乳液涂抹于人的臉上，可以有效地改善面部皺紋面積大、數(shù)量多等問題。

（3） 防曬作用：降低由于紫外線引發(fā)的一些蛋白酶的表達，還能促進皮膚成纖維細胞的損傷修復(fù)。

（4） 美白作用：蜂毒對黑色素瘤的生成和酪氨酸活性及相關(guān)蛋白表達起抑制作用[27-28]。

3.3 蜂毒在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用

王宏亮[29]通過用不同濃度的蜂毒肽對玉米幼苗進行噴灑，發(fā)現(xiàn)了蜂毒肽不僅對玉米的病原微生物有著抑制和殺害作用，還能夠有效地提高玉米的相應(yīng)指標。如顯著提高了葉綠素、可溶性糖和蛋白的含量等，還可啟動多種防御酶的活性，增強植株的抗病能力。若將蜂毒肽基因通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)轉(zhuǎn)入到植物體內(nèi)得到轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物，此類轉(zhuǎn)基因植株不僅抗菌抗病還能夠提高一定的作物產(chǎn)量[4]。所以，對于開發(fā)并利用蜂毒肽作為生物農(nóng)藥具有較大意義。

4 展望

蜂毒作為一種應(yīng)用廣泛的生物素，一方面對多種疾病有很好的療效，但是由于蜂毒的有效成分提純的工藝還不夠完善和成熟，對其應(yīng)用研究、開發(fā)和利用還不夠深入，實際上運用于臨床和制藥的情況仍然還是占少數(shù)；另一方面由于其主要成分具有刺激性，蜂毒能給人們帶來健康的同時也帶來了不良反應(yīng)等，這些問題還有待解決。為了能夠更多更好地為臨床服務(wù)，可以在其適用范圍內(nèi)進行正確合理地開發(fā)。我國擁有非常豐富的蜜蜂資源，能夠給蜂毒的正確開發(fā)利用提供相當廣闊的前景，隨著蜂毒研究和開發(fā)的深入，相信蜂毒能夠安全有效地造福人類社會。