熊穎婕

（佛山市婦幼保健院，廣東 佛山 528000）

冷凝集素是一種能在低于37℃的條件下凝集細(xì)菌、紅細(xì)胞（red blood cell，RBC）等顆粒性抗原的抗體，其引起凝集反應(yīng)時(shí)的溫度條件通常小于30℃，當(dāng)溫度上升至37℃時(shí)相關(guān)凝集現(xiàn)象可消失[1]。本文主要是介紹1 例紅斑狼瘡患者血液標(biāo)本出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象的具體情況及相應(yīng)的處理方法。

1 病例資料

患者女，30 歲，發(fā)熱4 d（體溫最高39℃），存在畏寒、干咳、咽痛、頭暈、乏力不適等癥狀，自行服用感冒藥后癥狀無好轉(zhuǎn)，遂至我院就診。后于我院被確診為紅斑狼瘡。

2 實(shí)驗(yàn)室檢查情況

在對該患者進(jìn)行血常規(guī)檢查后，我們發(fā)現(xiàn)其RBC 計(jì)數(shù)極低，其平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（mean corpuscular hemoglobin contentration，MCHC）均明顯偏高。對其血液標(biāo)本的外觀進(jìn)行檢視發(fā)現(xiàn)，試管壁上明顯附著有斑塊樣凝集顆粒，搖動(dòng)試管即可見到顆粒出現(xiàn)（說明血液標(biāo)本出現(xiàn)了冷凝集現(xiàn)象）?？梢?，之前測得的RBC 計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確，白細(xì)胞（white blood cell，WBC）計(jì)數(shù)及分類結(jié)果也可能有誤。因此，我們根據(jù)以往的經(jīng)驗(yàn)對上述血液標(biāo)本進(jìn)行了多種預(yù)處理及重新檢測，并最終獲得了令人滿意的檢測結(jié)果。具體的處理過程及檢測方法如下：1）將血液標(biāo)本置于37℃的水浴中，約30 min 后發(fā)現(xiàn)其中的凝集顆粒略有解離，遂立即以閉蓋急檢模式進(jìn)行上機(jī)測定。但檢測結(jié)果與第1 次檢測的結(jié)果類似，肉眼檢視標(biāo)本外觀，可見血液冷凝集現(xiàn)象未消失。2）將血液標(biāo)本用37℃的溫生理鹽水稀釋4 倍后立即上機(jī)測定，然后將測得檢測結(jié)果中RBC、WBC、血紅蛋白（hemoglobin，HGB）、血小板（blood platelet，PLT）的計(jì)數(shù)結(jié)果均×4，所得測定結(jié)果仍不理想。3）采用傳統(tǒng)的顯微鏡法對血液標(biāo)本進(jìn)行檢測。將血液標(biāo)本置于37℃的水箱內(nèi)孵育30 min，用加樣器取孵育好的血液標(biāo)本10 μL，并迅速將其稀釋于2 mL 的溫生理鹽水（溫度為37℃）中。混合均勻后，滴到計(jì)數(shù)板上進(jìn)行計(jì)數(shù)[2]。在顯微鏡下仍然可見有少許聚在一起的RBC，無法準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。用力振搖幾下稀釋后的血液標(biāo)本，然后再次滴到計(jì)數(shù)板上觀察。發(fā)現(xiàn)RBC 在計(jì)數(shù)板上分布均勻，隨后采用顯微鏡計(jì)數(shù)法對RBC進(jìn)行了計(jì)數(shù)。在完成RBC 計(jì)數(shù)后，分別使用WBC 稀釋液和PLT 稀釋液對孵育后的血液標(biāo)本進(jìn)行了稀釋，并同樣采用顯微鏡計(jì)數(shù)法對其進(jìn)行了WBC 計(jì)數(shù)和PLT 計(jì)數(shù)。為了進(jìn)行WBC 分類計(jì)數(shù)，我們制作了血涂片。但在將血液標(biāo)本滴于載玻片上后，其中的RBC 立即出現(xiàn)聚集。因此，我們嘗試先將載玻片放在暖氣片上進(jìn)行預(yù)溫，然后再將血液標(biāo)本滴在載玻片上，并立即進(jìn)行推片。雖然涂片上的RBC 仍存在聚集的情況，但能夠清晰地觀察到散在的WBC（見圖1）。隨后我們采用顯微鏡計(jì)數(shù)法完成了WBC 的分類計(jì)數(shù)。

圖1 冷凝集血液標(biāo)本血涂片的瑞-姬染色圖像

3 討論

由血液標(biāo)本出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象所導(dǎo)致的血常規(guī)檢驗(yàn)無法完成的情況并不少見，相關(guān)文獻(xiàn)中多有報(bào)道，其解決方法也有多種[3]。針對本病例，我們嘗試用了3 種方法對其血液標(biāo)本進(jìn)行了處理和檢測。相關(guān)的研究指出，冷凝集現(xiàn)象可對部分血液標(biāo)本W(wǎng)BC、PLT 計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響[4-7]。在本研究中，經(jīng)顯微鏡計(jì)數(shù)法確認(rèn)，冷凝集現(xiàn)象對儀器法測得的WBC、PLT 計(jì)數(shù)未產(chǎn)生明顯的影響。有研究表明，冷凝集素效價(jià)過高可導(dǎo)致血型鑒定錯(cuò)誤和交叉配血不合[8-9]，在臨床采供血工作中應(yīng)對上述情況予以重視。冷凝集素是一種冷反應(yīng)型抗RBC 抗體，在0 ～4℃時(shí)最易與RBC 抗原相結(jié)合。正常情況下，其效價(jià)＜1:32，不會(huì)出現(xiàn)與RBC 的凝集反應(yīng)[10-11]。冷凝集素綜合征又叫冷凝集素病。此病是一種自身免疫性疾病。此病患者的主要臨床表現(xiàn)為體表皮膚溫度降低時(shí)出現(xiàn)肢體末端血管內(nèi)紅細(xì)胞凝集、皮膚微循環(huán)障礙、手足紫紺等情況。其血液標(biāo)本在20℃以下時(shí)會(huì)出現(xiàn)明顯的冷凝集現(xiàn)象。有研究指出，冷凝集素與RBC 抗原的結(jié)合是完全可逆的。將出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象的血液標(biāo)本置于37℃的水浴箱中，其RBC 凝集情況可自行消失。使用冷凝集現(xiàn)象消失后的血液標(biāo)本進(jìn)行上機(jī)測定，仍然可以獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。但血液標(biāo)本的冷凝集現(xiàn)象若非常嚴(yán)重（出現(xiàn)RBC 凝集成大團(tuán)塊現(xiàn)象），僅對其進(jìn)行水浴處理可能無法完全消除其中RBC 凝集的情況或從水浴箱中將其取出后其中的RBC 會(huì)再次迅速凝集。對于存在上述情況的血液標(biāo)本，需要采用震蕩等方法對其進(jìn)行處理。相關(guān)的研究指出，冷凝集素效價(jià)顯著增高主要見于原發(fā)性冷凝集素綜合征患者的血液標(biāo)本，其效價(jià)可高達(dá)1:1。而冷凝集素效價(jià)輕度增高常見于非特異性炎癥性疾病、間質(zhì)性肺炎、自身免疫性疾病、多發(fā)性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、傳染性單核細(xì)胞增多癥等病毒感染性疾病、肺炎支原體肺炎等疾病患者的血液標(biāo)本[12-14]。本研究中的病例后續(xù)接受了多項(xiàng)檢查。血常規(guī)檢查提示其存在重度貧血，其進(jìn)行直接、間接COOMB’S 試驗(yàn)的結(jié)果均為陽性，考慮其存在溶血性貧血。其抗核抗體定量檢測的結(jié)果＞500 AU/mL，抗雙鏈DNA 抗體檢測的結(jié)果呈陽性，補(bǔ)體C3、C4 的水平較低，尿蛋白檢測的結(jié)果呈陽性（2+），最終考慮將其病情診斷為系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫性溶血性貧血。筆者認(rèn)為，在進(jìn)行血液檢驗(yàn)的過程中，尤其是冬季室溫較低時(shí)，檢驗(yàn)人員應(yīng)注意觀察血液標(biāo)本是否出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象。一旦發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象的血液標(biāo)本，應(yīng)先對其進(jìn)行妥善的處理，然后再對其進(jìn)行檢測，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確。