●張仁敏（山東省濰坊市寒亭區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 山東 濰坊 261100）

隨著大眾生活水平的提高，無公害農(nóng)產(chǎn)品的市場(chǎng)需求不斷擴(kuò)大。蔬菜種植過程中極易發(fā)生病蟲害，不僅會(huì)造成蔬菜減產(chǎn)，還會(huì)影響蔬菜的外觀和口感，導(dǎo)致蔬菜產(chǎn)品的綜合品質(zhì)下降。大部分蔬菜農(nóng)產(chǎn)品在種植過程中都會(huì)使用農(nóng)藥來控制病蟲害。目前，我國(guó)農(nóng)藥在農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的覆蓋面已經(jīng)達(dá)到70%，隨之而來的是市場(chǎng)上的不少蔬菜產(chǎn)品存在不同程度的農(nóng)藥超標(biāo)，食品健康安全存在較大隱患。因此，研究蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)方法對(duì)提高蔬菜品質(zhì)和農(nóng)藥安全檢測(cè)效率具有重要意義。

1 蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)方法

1.1 蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)方法的特點(diǎn)

蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)方法的特點(diǎn)是時(shí)間短、效率高。從試劑配置到樣品處理，再到檢出結(jié)果，時(shí)間從幾分鐘或十幾分鐘不等，比傳統(tǒng)的農(nóng)藥殘留檢測(cè)縮短至少一半時(shí)間，檢測(cè)效率相對(duì)較高。

1.2 蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)法種類

蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)根據(jù)檢測(cè)場(chǎng)地可分為現(xiàn)場(chǎng)速測(cè)和實(shí)驗(yàn)室速測(cè)兩種。根據(jù)檢測(cè)原理可分為化學(xué)法、生物法（生物化學(xué)測(cè)定法、分子生物學(xué)法、活體生物測(cè)定法）[1]。目前我國(guó)比較成熟的農(nóng)藥殘留速測(cè)方法為農(nóng)藥速測(cè)卡法、酶片法、酶抑制率法、酶聯(lián)免疫試劑盒法等。

1.2.1 化學(xué)法化學(xué)法是最常見的蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)方法之一，它是快速測(cè)定有機(jī)磷農(nóng)藥的重要方法。常用的化學(xué)法為有機(jī)磷農(nóng)藥速測(cè)法及氣相色譜法。它的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、檢測(cè)結(jié)果精準(zhǔn)性高、測(cè)定范圍廣?？蓪?duì)大部分蔬菜農(nóng)藥殘留進(jìn)行定性、定量檢測(cè)。但缺點(diǎn)是檢測(cè)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，成本高、操作難度高，對(duì)市場(chǎng)蔬菜抽查速測(cè)并不適用。

1.2.2 生物法生物化學(xué)測(cè)定法、分子生物學(xué)法、活體生物測(cè)定法都屬于生物速測(cè)法。

1.2.2.1 生物化學(xué)測(cè)定法生物化學(xué)速測(cè)是利用膽堿酯酶抑制原理進(jìn)行蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)的方法，它是一種常規(guī)的蔬菜殘留農(nóng)藥測(cè)定法。優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)操作步驟簡(jiǎn)單、檢出結(jié)果快、成本低。缺點(diǎn)是檢測(cè)范圍有限，只能用于抑制膽堿酯酶活性的農(nóng)藥測(cè)定，靈敏度偏低，且檢測(cè)結(jié)果易受顯色劑、植物組織液等因素影響。

1.2.2.2 分子生物學(xué)法分子生物學(xué)法是借助酶的特性及免疫反應(yīng)原理實(shí)現(xiàn)農(nóng)藥速測(cè)的方法。如酶聯(lián)免疫反應(yīng)法是采用特異性的酶聯(lián)免疫試劑盒做速測(cè)的方法。其缺點(diǎn)是需要在特定的條件下實(shí)施測(cè)定，要求測(cè)定環(huán)境pH=8，溫度為37～38℃。

1.2.2.3 活體生物測(cè)定法活體生物測(cè)定法是用發(fā)光細(xì)菌或敏感性家蠅作為蔬菜農(nóng)藥速測(cè)材料進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)的方法。發(fā)光細(xì)菌在接觸到有毒、有害物質(zhì)時(shí)，細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度下降甚至不發(fā)光。熒光酶的發(fā)光程度與農(nóng)藥濃度呈線形相關(guān)。它的優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)應(yīng)用范圍廣，缺點(diǎn)是檢測(cè)結(jié)果不夠精準(zhǔn)。在判定蔬菜農(nóng)藥殘留時(shí)，還需要考慮生物本身的熒光酶敏感性，以及農(nóng)藥與熒光酶的關(guān)系。部分敏感性生物在發(fā)生農(nóng)藥中毒時(shí)的表現(xiàn)程度不一樣，因而影響著農(nóng)藥殘留判定的最終結(jié)果。

1.2.3 酶抑制率法酶抑制率法是利用農(nóng)藥對(duì)酶的抑制作用對(duì)蔬菜農(nóng)藥殘留進(jìn)行測(cè)定的方法。它的原理為酶促反應(yīng)。在發(fā)生酶促反應(yīng)后酶活性能否被抑制，以及在顯色劑作用下顯示出的溶液顏色，是判定蔬菜中是否含有農(nóng)藥殘留的標(biāo)志。以最常用的乙酰膽堿酯酶檢測(cè)蔬菜有機(jī)磷或氨基甲酯類農(nóng)藥的酶反應(yīng)為例，當(dāng)二者相遇時(shí)酶活性就會(huì)被抑制，顯示出酶活性不正常。采用乙酰膽堿酯酶進(jìn)行蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)，其抑制率與農(nóng)藥濃度呈正相關(guān)。一般情況下，酶催化乙酰膽堿水解，水解產(chǎn)物與顯色劑發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)。之后使用分光光度計(jì)在412 nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化情況，并計(jì)算出抑制率。抑制率是判定樣品中有機(jī)磷或氨基甲酯類農(nóng)藥是否殘留或超標(biāo)的關(guān)鍵[2]。

酶抑制率法是目前蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)中最常用的方法之一。酶活性是酶抑制率法檢測(cè)的關(guān)鍵因素。

在酶活性方面，抑制率偏小的原因如下：第一，專用酶保存不當(dāng)可導(dǎo)致在參加反應(yīng)之前酶活性降低，因此在反應(yīng)中難以準(zhǔn)確的結(jié)果。針對(duì)這一問題，應(yīng)做好專用酶保存管理。粉狀的酶應(yīng)在冷凍室內(nèi)完成提取液的溶解，且溶解后分裝成2～4個(gè)小瓶。暫時(shí)不用的酶液應(yīng)在0～5℃條件下貯存，需要使用時(shí)提前取出。建議冷凍貯存時(shí)間不超過4 d。當(dāng)酶液需要反復(fù)解凍時(shí)冷藏保存不宜超過2 d，否則會(huì)對(duì)酶活性造成影響。做檢測(cè)前可以對(duì)專用酶液活性進(jìn)行測(cè)定，酶液活性保持在0.3以上為佳。第二，底物與酶反應(yīng)不充分，導(dǎo)致酶抑制率偏小。針對(duì)該問題，應(yīng)做好底物的配置與保存。取25 mg底物，加3.0 mL蒸餾水溶解，搖勻后置于4℃保存，保存時(shí)間不宜超過14 d，否則會(huì)降低酶活性，導(dǎo)致酶抑制率偏小。固體底物溶解后應(yīng)冷凍保存。在檢測(cè)時(shí)，應(yīng)采用移液槍取底物后加入試管內(nèi)，然后震蕩晃動(dòng)后再作比色[3]。抑制率偏大是過度反應(yīng)或超前反應(yīng)所致。大部分酶抑制率偏大問題發(fā)生在上機(jī)比色前。針對(duì)該問題，建議嚴(yán)格控制反應(yīng)比色的時(shí)間。一般反應(yīng)時(shí)間應(yīng)控制在30 min內(nèi)，并在樣本培養(yǎng)完成后1 min內(nèi)進(jìn)行上機(jī)比色。

2 存在問題及注意事項(xiàng)

2.1 存在問題

2.1.1 假陽(yáng)性問題采用酶抑制率法進(jìn)行蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)時(shí)，部分蔬菜會(huì)有假陽(yáng)性問題的發(fā)生，如蔥、韭菜、大蒜等。該問題在有辛辣味道的蔬菜中發(fā)生率較高，進(jìn)行農(nóng)業(yè)殘留速測(cè)時(shí)應(yīng)當(dāng)注意。

2.1.2 蔬菜汁液及色素干擾問題采用酶抑制率法速測(cè)紅辣椒、番茄、紅茄、絲瓜、紫甘藍(lán)等多汁液或含天然色素的蔬菜時(shí)，應(yīng)考慮色素與汁液等因素的干擾問題。

2.2 注意事項(xiàng)

2.2.1 試劑農(nóng)藥速測(cè)試劑盒使用前應(yīng)做好檢查，檢查有無變質(zhì)、過期等問題。試劑取用應(yīng)嚴(yán)格按照相關(guān)流程及詳細(xì)的步驟操作。測(cè)試試劑必須即用即配。已經(jīng)使用過的試劑禁止倒入試劑瓶?jī)?nèi)。

2.2.2 器皿測(cè)試用的器皿應(yīng)保持干燥潔凈，禁止用粗糙物品擦拭，以免影響其透光度。長(zhǎng)時(shí)間使用后，透明度降低的玻璃器皿應(yīng)及時(shí)更換，以免影響測(cè)量精度。

3 總結(jié)

蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)是確保市場(chǎng)上蔬菜安全的必要手段。在進(jìn)行蔬菜農(nóng)藥殘留速測(cè)時(shí)，應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照規(guī)定流程和步驟進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定過程中應(yīng)注意速測(cè)試劑的科學(xué)合理運(yùn)用，正確做好樣品前處理，同時(shí)注意專用酶活性，加強(qiáng)底物、顯色劑、提取劑的正確保存，確保最終速測(cè)結(jié)果的精準(zhǔn)性。