譚國(guó)勝， 林方增， 陳斌， 蔡鴻杰， 羅燦嶠， 戴海濤

（中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院 1 放射介入科， 2 肝外科， 3 病理科， 廣東 廣州510080）

MicroRNAs （miRNAs） 屬于非編碼小RNA， 參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的凋亡、 增殖、 遷移等［1］。 miRNAs 的表達(dá)失調(diào)或異?？纱?進(jìn) 原 發(fā) 性 肝 細(xì) 胞 癌 （HCC） 的 發(fā) 生［2］。 MicroRNA－342（miR－342） 與HCC 發(fā)生及發(fā)展相關(guān)這一現(xiàn)象近年來(lái)不斷有所報(bào)道。 轉(zhuǎn)錄因子FOXP1 （叉頭框蛋白P1） 存在于包括HCC 的多種腫瘤中［3］， 且與腫瘤生物學(xué)行為相關(guān)。 本研究擬通過(guò)檢測(cè)HCC 標(biāo)本中miR－342 及FOXP1 mRNA 的表達(dá)含量， 分析腫瘤組織及瘤旁組織中的表達(dá)差異及其相關(guān)性， 初步探討miR－342及FOXP1 在HCC 發(fā)生、 發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料及組織標(biāo)本收集我院經(jīng)外科手術(shù)后病理學(xué)確診的58 例HCC 患者的腫瘤組織和癌旁組織標(biāo)本。 本研究通過(guò)我院臨床科研倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。 患者平均年齡 （55 ± 7.5） 歲，中國(guó)肝癌分期Ⅰ～ Ⅲ期， 術(shù)前均無(wú)接受放化療及靶向治療等抗腫瘤治療。 腫瘤組織取材方法： 距肉眼可見(jiàn)的腫瘤邊緣0.5 cm以上的瘤體組織內(nèi)隨機(jī)取樣， 標(biāo)本大小約1.0 cm × 1.0 cm × 1.0 cm。 癌旁組織取材方法： 距離腫瘤邊緣≥1.0 cm 切取的肝臟組織， 取樣標(biāo)本大小同上。

1.2 檢測(cè)miR－342表達(dá)水平TRIzol 法分別提取腫瘤組織和癌旁組織細(xì)胞的總RNA， 用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA 反轉(zhuǎn)錄成cDNA。PCR 定量檢測(cè)采用Hairpin-itTMmiRNAs qPCR Quantitation kit 試劑盒。 合成用于特異擴(kuò)增的MicroRNA 引物， PCR 檢測(cè)miR－342 含量。 以U6 作為內(nèi)參， PCR 操作和反應(yīng)條件參照文獻(xiàn)［4］和試劑盒說(shuō)明書(shū)， 2－△△Ct法計(jì)算miR－342 的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 檢測(cè)FOXP1 mRNA 表達(dá)水平腫瘤組織和癌旁組織總RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄的操作方法同上。 應(yīng)用SYBR Green PCR Master Mix 試劑盒， 以相應(yīng)引物行qPCR 檢測(cè)兩組標(biāo)本細(xì)胞中FOXP1 的mRNA 表達(dá)水平。 PCR 操作和反應(yīng)條件參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。 以GAPDH 為內(nèi)參， 2－△△Ct法計(jì)算FOXP1 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。 計(jì)量資料以±s表示， 比較采用t檢驗(yàn)； 相關(guān)分析采用Pearson 相關(guān)分析法；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1miR－342、FOXP1 mRNA 在腫瘤組織及癌旁組織的表達(dá)水平腫瘤組織中， miR－342 的表達(dá)水平為0.48 ± 0.16， 明顯低于癌旁組織的0.99 ± 0.12 （P＜0.05）； FOXP1 mRNA 的表達(dá)水 平 為0.82 ± 0.17， 明 顯 高 于 癌 旁 組 織 的0.45 ± 0.08 （P＜0.05）。 見(jiàn)圖1。

圖1 腫瘤組織與癌旁組織miR-342 及FOXP1 mRNA 表達(dá)水平比較

2.2miR－342 與FOXP1 mRNA 表達(dá)水平的相關(guān)性經(jīng)Pearson相關(guān)分析， 腫瘤組織中miR－342 與FOXP1 mRNA 表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān) （r＝－0.77，P＜0.05）， 而癌旁組織miR－342 與FOXP1 mRNA 表達(dá)水平無(wú)相關(guān)性 （r＝－0.16，P＝0.22）。 見(jiàn)圖2。

圖2 腫瘤組織中miR-342 與FOXP1 mRNA 表達(dá)水平的相關(guān)性

3 討論

研究［4］表明， miR－342 在多種腫瘤中呈異常表達(dá)， 如在結(jié)腸癌、 肺癌及鼻咽癌等惡性腫瘤中， miR－342 的表達(dá)較正常組織均呈下調(diào)改變， 而在多發(fā)性骨髓瘤中則呈高表達(dá)。 本研究結(jié)果顯示， 腫瘤組織中miR－342 的表達(dá)水平明顯低于癌旁肝組織， 表明miR－342 在HCC 細(xì)胞中呈下調(diào)表達(dá)， 與Cui 等［5］的研究結(jié)果基本一致， 提示miR－342 有可能在HCC 中發(fā)揮抑癌作用。 除了miR－342， 目前還發(fā)現(xiàn)其他一些miRNAs 在HCC 中也呈表達(dá)下降改變， 如miR－214、 miR－145 等； 但亦有部分miRNAs 在HCC 中呈上調(diào)表達(dá)。 隨著研究不斷深入， 包括miR－342 在內(nèi)的多種miRNAs 將有助于從基因水平更充分了解HCC 發(fā)生的病因及機(jī)制， 并有望成為HCC 的腫瘤診斷標(biāo)記和治療的新靶點(diǎn)。

FOXP1 作為轉(zhuǎn)錄因子， 通過(guò)調(diào)節(jié)不同靶基因的表達(dá)而影響腫瘤的生物學(xué)行為。 本研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中FOXP1 mRNA 表達(dá)水平明顯高于癌旁組織， 與Zhang 等［6］的研究結(jié)果相似，提示FOXP1 在肝癌細(xì)胞中合成的活躍程度明顯高于正常肝細(xì)胞， FOXP1 轉(zhuǎn)錄因子在HCC 中呈高含量狀態(tài)。 FOXP1 mRNA在HCC 中過(guò)度表達(dá)， 使腫瘤內(nèi)的FOXP1 含量較正常肝組織明顯增加， 提示FOXP1 在HCC 的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起促癌作用。腫瘤組織中miR－342 與FOXP1 mRNA 的表達(dá)含量呈負(fù)相關(guān)，而在癌旁組織兩者含量則無(wú)相關(guān)性。 由此推測(cè)在HCC 的發(fā)生和發(fā)展中， miR－342 可能通過(guò)某種機(jī)制或通路調(diào)控FOXP1 的合成， 從而影響HCC 的生物學(xué)行為。 Cui 等［5］的研究則提示miR－342 在HCC 中可調(diào)節(jié)E2F1 因子的mRNA 轉(zhuǎn)錄。 目前本研究結(jié)果顯示miR－342 與FOXP1 表達(dá)含量的相關(guān)性僅為統(tǒng)計(jì)學(xué)上的關(guān)系， 而兩者之間是否存在相互作用或調(diào)節(jié)機(jī)制， 有待進(jìn)一步研究探討。

綜 上 所 述， 在HCC 中， miR－342 表 達(dá) 下 降， 而FOXP1 mRNA 表達(dá)升高； miR－342 對(duì)HCC 的發(fā)展可能起到抑癌作用。