李 君 梁 曉

1.湘潭醫(yī)衛(wèi)職業(yè)技術學院醫(yī)學技術學院，湖南 湘潭 411102；2桂林醫(yī)學院藥學院，廣西 桂林 541199

百合為百合科植物卷丹(LiliumlancifoliumThunb.)、百合(LiliumbrowniiF.E．Brown var. viridulum Baker)或細葉百合(LiliumpumilumDC.)的干燥肉質鱗葉，是典型的“藥食兩用”植物。百合主要分布于湖南、湖北、浙江、江蘇安、河南等省區(qū)?！吨袊幍洹穂1]和《中華本草》[2]中均有收錄。傳統(tǒng)中醫(yī)認為百合味甘，性寒，歸心、肺經；具有養(yǎng)陰潤肺，清心安神之功效。臨床常用于陰虛燥咳、勞嗽咳血、虛煩驚悸、失眠多夢、精神恍惚?，F(xiàn)已從百合藥材中分離鑒定多種化學成分，其中薯蕷皂苷為百合藥材中有效成分之一?，F(xiàn)代藥理學實驗[3-6]證實，百合藥材中的薯蕷皂苷具有抗抑郁、抗疲勞、抗氧化、提高機體免疫力等多種藥理活性。藥材合理的采收時間對藥材本身的質量有直接影響，一般認為百合藥材為栽植后第2年8月初采收，但8月初采收是否能保證百合中薯蕷皂苷的含量最高，目前尚未見此方面的研究報道。

隨著國家的“振興鄉(xiāng)村”政策，廣大村民種植中藥材產業(yè)業(yè)已成為不少農村農民脫貧致富的好途徑。百合作為臨床常用中藥，其合理的采收期對保證藥品臨床療效有直接的關系。為了更好地開發(fā)利用這一藥材資源，筆者對百合藥材中薯蕷皂苷的含量動態(tài)積累規(guī)律進行了研究。

1 儀器和材料

1.1 儀器 Waters 600型高效液相色譜儀(含Waters 468型紫外檢測器，Watres PC 800型色譜工作站，美國Waters公司)。HS6150D型超聲波清洗器(天津市恒奧科技發(fā)展有限公司)，HP-01型無油真空泵(天津市恒奧科技發(fā)展有限公司)，BS2242 型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2 藥材 研究所用百合藥材樣品分別在國內4個省區(qū)(湖南省邵陽市隆回縣，湖南省湘西土家族苗族自治州龍山縣，浙江省衢州市常山縣，河南省洛陽市欒川縣)采集，共32份，經湖南中醫(yī)藥大學劉塔斯教授鑒定，所采集樣品均為百合科(Liliaceae)植物百合(LiliumbrowniiF. E. Brown var. viridulum Baker)的肉質鱗葉。2020年7月-2020年9月采收百合的肉質鱗葉，洗凈，曬干。

1.3 材料 薯蕷皂苷對照品(批號：111539-200612，中國食品藥品檢驗研究院)，乙腈(批號：20200715，天津市科密歐化學試劑有限公司)、甲醇(批號：20200614，天津市科密歐化學試劑有限公司)、異丙醇(批號：20200712天，津四友精細化學品有限公司)為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及適應性試驗 色譜柱：Phenomenex ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液(95∶5)；流速1 mL/min；柱溫為25 ℃ ；檢測波長為204 nm。在此條件下，理論板數按木犀草素峰計算應不低于5000。

2.2 對照品溶液制備 取薯蕷皂苷對照品1.0 mg，精密稱量，置于10 mL的容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 百合藥材供試品溶液制備 取百合干燥樣品粉末(過三號篩)10.0 g，精密稱定，將藥材粉末置具塞錐形瓶中，置具塞錐形瓶中，精密加入75%乙醇50 mL，稱定重量，超聲(功率500 W，頻率40 kHz)處理45 min，放冷，再次稱定重量，用75%乙醇補足減失的重量，過濾。濾液回收乙醇后，得浸膏，加適量蒸餾水溶解，用飽和正丁醇萃取3次，每次20 mL，回收正丁醇，得浸膏，用甲醇溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測定法 分別精密吸取薯蕷皂苷對照品溶液與百合供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜，測定，即得，結果如圖1、圖2所示。

圖1 薯蕷皂苷對照品溶液色譜圖

圖2 百合供試品溶液色譜圖

2.5 線性關系考察 分別精密吸取“2.2”項下的薯蕷皂苷對照品1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得濃度為10、20、30、40、50 μg/mL系列濃度的薯蕷皂苷對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件依次注入高效液相色譜儀，進行HPLC分析，以測得的峰面積(Y)為縱坐標，薯蕷皂苷濃度(X)為橫坐標，得回歸方程為：Y=164533X+9098.6，r=0.9998。表明薯蕷皂苷溶液在10～50 μg·mL-1的濃度范圍內對照品的峰面積和濃度線性關系良好。

2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液20 μL，按“2.1”項色譜條件下，連續(xù)進樣6次，進行HPLC分析，測得各次峰面積，并計算相對標準偏差(RSD)值，結果RSD為1.08%，表明要求的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取百合藥材粉末10.0 g，精密稱定，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別于0、4、8、12、16、20、24 h依次進樣20 μL，注入高效液相色譜儀，進行HPLC分析，測得每個時間點百合藥材供試品溶液的峰面積，并計算得RSD為1.09%，表明樣品在24 h內較為穩(wěn)定。

2.8 重復性試驗 取百合藥材粉末10.0 g，精密稱定，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，平行制備樣品溶液6份，分別進樣20 μL，進行HPLC分析，測定樣品含量，并其計算RSD得1.84%，表明方法較為穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗 取已知含量的百合藥材樣品粉末6份，各約5.0 g，精密稱定。分別精密加入濃度為0.106 mg/mL的薯蕷皂苷對照品溶液1.0 mL，按 “2.3”項下方法制備供試品溶液，進樣20 μL，按“2.1”項下色譜條件進行測定，計算回收率。結果見表1。

表1 薯蕷皂苷的加樣回收率試驗

2.10 樣品測定 不同采收期、取不同產地百合藥材藥材適量，精密稱定，“2.3”項下方法制備供試品溶液。取薯蕷皂苷對照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，測定，計算百合藥材中薯蕷皂苷的含量，結果見表2。

表2 不同采收期、不同產地百合藥材中的含量

3 結論

薯蕷皂苷易溶于甲醇，故在實驗中選擇甲醇作為提取溶劑[7-8]。在實驗中對流動相的比例(體積)進行了充分的考察，先后選用甲醇-0.1%甲酸水溶液(95∶5)、甲醇-0.1%甲酸水溶液(90∶10)、乙腈-水(95∶5)等作流動相，薯蕷皂苷的分離度和理論塔板數均達不到要求。經過多次、反復摸索實驗條件，發(fā)現(xiàn)采用乙腈-0.1%磷酸水溶液(95∶5)為流動相，薯蕷皂苷可以與相鄰成分達到基線分離，且峰形較好，符合要求。

分別對不同采收期和不同產地的百合藥材中薯蕷皂苷的含量進行了測定。研究結果表明：不同產地的百合藥材在同一采收期薯蕷皂苷的含量無明顯差異；不同產地百合藥材中薯蕷皂苷的含量呈規(guī)律性變化，其中7月初到8月初百合藥材中薯蕷皂苷的含量呈上升趨勢，8月中旬薯蕷皂苷的含量較高，隨后百合藥材中薯蕷皂苷的含量逐漸下降。故建議每年8月上中旬份作為百合藥材的最佳采收期。