尹 雪，焦 陽，梅桂雪，徐興燕，丁 勃，譚樂俊，林永強(qiáng)

（山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院 國家藥品監(jiān)督管理局膠類產(chǎn)品質(zhì)量評價重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250101）

腦立清制劑包括丸劑、膠囊劑和片劑3個制劑規(guī)格，處方組成一致，僅在制劑工藝上有所區(qū)別，腦立清丸和腦立清膠囊收載于《中國藥典》2020年版一部，腦立清片收載于《中國人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（中藥成方制劑第十九冊）[1-2]。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中，腦立清丸對龍腦進(jìn)行了定量控制，腦立清膠囊對龍腦及薄荷腦進(jìn)行了定量控制，而腦立清片中無含量測定項(xiàng)目。為全面評價腦立清制劑（丸劑、膠囊劑、片劑）的質(zhì)量狀況，為質(zhì)量監(jiān)管提供科學(xué)依據(jù)，本文參考相關(guān)文獻(xiàn)[3-7]，在《中國藥典》2020年版一部腦立清膠囊及腦立清丸含量測定的基礎(chǔ)上，建立了同時測定腦立清制劑（丸、膠囊、片）中薄荷腦、龍腦、冰片（以龍腦和異龍腦總和計(jì)）3種指標(biāo)性成分含量的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器

METTLER AE240電子天平[梅特勒-托利多國際貿(mào)易（上海）有限公司]；Agilent 7890氣相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料

薄荷腦對照品（批號：110728-200506），龍腦對照品（批號：110881-201709，含量以99.6 %計(jì)），異龍腦對照品（批號：111512-201603，含量以96.7 %計(jì)），水楊酸甲酯對照品（批號：110707-201815，含量以100.0 %計(jì)，中國食品藥品檢定研究院）；腦立清系列制劑為2020年國家藥品評價性抽驗(yàn)樣品，涉及15家生產(chǎn)企業(yè)、88個生產(chǎn)批次（包括丸劑52批，膠囊劑34批，片劑2批）。按腦立清系列制劑的處方，從山東沃華醫(yī)藥科技股份有限公司購買正品藥材，經(jīng)檢驗(yàn)合格后按規(guī)定的處方和工藝自制腦立清丸、膠囊、片3種劑型，作為標(biāo)準(zhǔn)參比制劑使用。同時分別自制一批缺冰片、薄荷腦藥味的腦立清膠囊，作為腦立清陰性樣品。無水乙醇、乙醇均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 GC條件

色譜柱：Agilent HP INNOWAX（柱長：30 m，內(nèi)徑：0.32 mm，膜厚：0.25 μm）；采用恒流模式，流速：1 ml/min；分流進(jìn)樣，分流比：20:1；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；檢測器溫度：250 ℃；柱溫：160 ℃；檢測器：火焰離子化檢測器（FID）。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內(nèi)標(biāo)溶液和對照品溶液的制備

2.2.1.1 腦立清丸劑（片劑）內(nèi)標(biāo)溶液和對照品溶液的制備 取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加乙醇制成每1 ml含0.13 mg的溶液，作為腦立清丸劑（片劑）內(nèi)標(biāo)溶液。另取龍腦對照品8 mg，異龍腦對照品8 mg，薄荷腦對照品12 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為腦立清丸劑（片劑）對照品溶液。

2.2.1.2 腦立清膠囊劑內(nèi)標(biāo)溶液和對照品溶液的制備 取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1 ml含13 mg的溶液，作為腦立清膠囊劑內(nèi)標(biāo)溶液。另取龍腦對照品約5 mg、異龍腦對照品約5 mg、薄荷腦對照品約7 mg，精密稱定，置10 ml量瓶中，加無水乙醇適量使溶解，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為腦立清膠囊劑對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

2.2.2.1 丸劑供試品溶液制備 取腦立清丸30丸，精密稱定，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入腦立清丸劑（片劑）內(nèi)標(biāo)溶液25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率 250 W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用腦立清丸劑（片劑）內(nèi)標(biāo)溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2.2 膠囊劑供試品溶液制備 取腦立清膠囊內(nèi)容物10粒，混勻，取約2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入無水乙醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置10 ml量瓶中，精密加入腦立清膠囊劑內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2.3 片劑供試品溶液制備 取腦立清片30片，精密稱定，研細(xì)，取相當(dāng)于5片的重量，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入腦立清丸劑（片劑）內(nèi)標(biāo)溶液25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用腦立清丸劑（片劑）內(nèi)標(biāo)溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，即得。

2.2.3 陰性供試品溶液的制備

2.2.3.1 缺冰片陰性供試品溶液制備 取缺冰片的腦立清陰性樣品，混勻，取約 2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入無水乙醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置10 ml量瓶中，精密加入腦立清膠囊劑內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。

2.2.3.2 缺薄荷腦陰性供試品溶液制備 取缺薄荷腦的腦立清陰性樣品，混勻，取約2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入無水乙醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液 5 ml，置10 ml量瓶中，精密加入腦立清膠囊劑內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別取上述對照品、缺冰片陰性供試品溶液、缺薄荷腦陰性供試品溶液及各劑型供試品溶液各1 μl，注入氣相色譜儀，進(jìn)行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)缺冰片陰性供試品溶液、缺薄荷腦陰性供試品溶液未檢出薄荷腦、龍腦、異龍腦，腦立清制劑供試品溶液檢出薄荷腦、龍腦、異龍腦3種成分，說明腦立清制劑中其他藥味對測定無干擾。氣相色譜圖見圖1。

圖1 專屬性試驗(yàn)GC圖譜

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密稱取薄荷腦、龍腦和異龍腦對照品適量，加無水乙醇制成濃度分別為3.5260，2.4245，2.5302 mg/ml的混合對照品儲備溶液。分別精密吸取上述混合對照品儲備液0.1，0.5，1.0，2.0，3.0，5.0 ml，置10 ml量瓶中，精密加入腦立清膠囊劑內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為不同濃度的對照品溶液。分別精密吸取上述各不同濃度的混合對照品溶液1 μl，注入氣相色譜儀，進(jìn)行測定。以內(nèi)標(biāo)濃度與對照品濃度比值為橫坐標(biāo)（X），以內(nèi)標(biāo)峰面積與對照品峰面積比值為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表1。

表1 3種成分線性關(guān)系

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取2.4項(xiàng)下混合對照品儲備液2 ml，置10 ml量瓶中，精密加入腦立清膠囊劑項(xiàng)下的內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得到薄荷腦、異龍腦和龍腦濃度分別為0.7052，0.4849，0.5060 mg/ml的混合對照品溶液。精密吸取上述混合對照品溶液1 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算薄荷腦、異龍腦和龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值，結(jié)果其RSD分別為0.02 %，0.06 %和0.05 %。表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一腦立清膠囊劑供試品溶液，在0，4，8，12，24，48 h分別進(jìn)樣1 μl，計(jì)算薄荷腦、異龍腦和龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值，結(jié)果其RSD分別為0.21 %，0.26 %和0.23 %。表明供試品溶液中的3個待測成分在室溫放置48 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

2.7.1 膠囊劑 取腦立清膠囊參比制劑適量，按2.2.2.2項(xiàng)方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣1 μl，結(jié)果薄荷腦、異龍腦和龍腦含量平均值分別為30.33，12.40，17.16 mg/g，RSD分別為1.18 %，1.33 %，1.20 %。表明該方法重復(fù)性良好。

2.7.2 丸劑 取腦立清丸參比制劑適量，按2.2.2.1項(xiàng)方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣2 μl，結(jié)果薄荷腦、異龍腦和龍腦含量平均值分別為9.26，2.73、6.25 mg/g，RSD分別為1.65 %，1.58 %，1.79 %。表明該方法重復(fù)性良好。

2.7.3 片劑 取腦立清片參比制劑適量，按2.2.2.3項(xiàng)方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣2 μl，結(jié)果薄荷腦、異龍腦和龍腦含量平均值分別為1.05，1.55，2.17 mg/g，RSD分別為1.41 %，1.81 %，1.71 %。表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

2.8.1 丸劑 取已測知含量的腦立清丸參比制劑0.5 g，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入薄荷腦4.5 mg、異龍腦1.5 mg和龍腦3 mg，精密加入腦立清丸劑（片劑）內(nèi)標(biāo)溶液 25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率 50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用內(nèi)標(biāo)溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣2 μl，計(jì)算回收率。結(jié)果薄荷腦、異龍腦和龍腦的平均回收率（n=6）分別為99.5 %，99.9 %和100.4 %；RSD分別為0.76 %，1.15 %和1.75 %。測定結(jié)果表明，該方法回收率良好。

2.8.2 膠囊劑 取已測知含量的腦立清膠囊參比制劑1 g，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入薄荷腦30 mg、異龍腦12 mg和龍腦17 mg，精密加入無水乙醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置10 ml量瓶中，精密加入腦立清膠囊劑內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣1 μl，計(jì)算回收率。結(jié)果薄荷腦、異龍腦和龍腦的平均回收率（n=6）分別為99.1 %，99.9 %和99.8 %；RSD分別為1.51 %，1.39 %和1.39 %。測定結(jié)果表明，該方法回收率良好。

2.8.3 片劑 取腦立清片30片，精密稱定，研細(xì)，取相當(dāng)于2.5片的重量，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入薄荷腦2 mg、異龍腦3 mg和龍腦4 mg，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液 25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率 250 W，頻率 50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用腦立清丸劑（片劑）內(nèi)標(biāo)溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，即得。平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣2 μl，計(jì)算回收率。結(jié)果薄荷腦、異龍腦和龍腦的平均回收率（n=6）分別為100.2 %，99.9 %和99.6 %；RSD分別為1.57 %，1.73 %和1.42 %。測定結(jié)果表明，該方法回收率良好。

2.9 樣品的測定

按本文建立方法測定15家生產(chǎn)企業(yè)、88個生產(chǎn)批次的腦立清樣品。對測定結(jié)果進(jìn)行頻數(shù)分布和箱線圖分析，由于腦立清片劑樣本量少，僅2批，未做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。含量測定結(jié)果及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果見表2和圖2～13。

表2 腦立清制劑GC含量測定結(jié)果

表2（續(xù)）

圖2 丸劑薄荷腦測定結(jié)果頻數(shù)分布圖

圖3 膠囊劑薄荷腦測定結(jié)果頻數(shù)分布圖

圖4 丸劑龍腦測定結(jié)果頻數(shù)分布圖

圖5 膠囊劑龍腦測定結(jié)果頻數(shù)分布圖

圖6 丸劑冰片測定結(jié)果頻數(shù)分布圖

圖7 膠囊劑冰片測定結(jié)果頻數(shù)分布圖

圖8 丸劑薄荷腦測定結(jié)果箱線圖

圖9 膠囊劑薄荷腦測定結(jié)果箱線圖

圖10 丸劑龍腦測定結(jié)果箱線圖

圖11 膠囊劑龍腦測定結(jié)果箱線圖

圖12 丸劑冰片測定結(jié)果箱線圖

圖13 膠囊劑冰片測定結(jié)果箱線圖

2.10 結(jié)果分析

觀察薄荷腦、龍腦和冰片3個指標(biāo)成分的頻數(shù)分布圖（圖2～7），均大致呈正態(tài)分布。觀察3個指標(biāo)成分的箱式分布圖，分布狀況基本一致，不同企業(yè)之間中位值差異較大，表明不同企業(yè)之間產(chǎn)品質(zhì)量存在差異。部分企業(yè)不同批次之間測定結(jié)果的離散程度較高，說明該企業(yè)在生產(chǎn)工藝、原藥材的質(zhì)量控制以及貯存環(huán)境上存在一定的問題。

冰片、薄荷腦屬揮發(fā)性藥材，原料質(zhì)量、制備過程、貯存等因素都會影響其含量。腦立清膠囊中冰片、薄荷腦為乙醇溶解后入藥，未經(jīng)受熱，轉(zhuǎn)移率高，結(jié)合藥典中腦立清膠囊和冰片藥材項(xiàng)下的既定限值，按薄荷腦轉(zhuǎn)移率57 %、冰片轉(zhuǎn)移率55 %計(jì)算限值。腦立清丸制備過程中經(jīng)40 ℃干燥，對揮發(fā)性成分的轉(zhuǎn)移率影響較大，結(jié)合藥典中既定限值和標(biāo)準(zhǔn)制劑的實(shí)際轉(zhuǎn)移率，按薄荷腦、冰片轉(zhuǎn)移率12 %計(jì)算限值。腦立清片中冰片和薄荷腦受包合工藝、干燥等工藝的影響使轉(zhuǎn)移率進(jìn)一步降低，結(jié)合藥典中既定限值和標(biāo)準(zhǔn)制劑的實(shí)際轉(zhuǎn)移率，按薄荷腦、冰片轉(zhuǎn)移率5 %計(jì)算限值。具體限值和腦立清各個劑型平均值見表3。

表3 腦立清制劑3種成分含量測定平均值統(tǒng)計(jì)表

比較均值與擬定的限度值，可看出3個指標(biāo)成分結(jié)果較理想，含量限度值基本合理。各企業(yè)龍腦和冰片含量未出現(xiàn)不合格，有兩家生產(chǎn)企業(yè)2批次樣品（丸劑、片劑各1批）薄荷腦含量不合格，占總批次數(shù)的2.3 %。

3 討論

目前，腦立清系列制劑標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，腦立清丸對龍腦進(jìn)行了定量控制，腦立清膠囊對龍腦及薄荷腦進(jìn)行了定量控制，而腦立清片中無含量測定項(xiàng)目。且現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中腦立清丸和腦立清膠囊僅對冰片藥材中龍腦進(jìn)行了定量，單一龍腦無法客觀反映冰片藥材的整體質(zhì)量，且部分企業(yè)為追求利潤可能會存在用龍腦這一化合物代替冰片的風(fēng)險，因此本文建立了GC法同時測定腦立清制劑中薄荷腦、龍腦、冰片（以龍腦和異龍腦總和計(jì)）這3種指標(biāo)性成分含量，以全面客觀的反映腦立清制劑中冰片、薄荷腦的質(zhì)量。

冰片、薄荷腦屬于揮發(fā)性藥材，其原料質(zhì)量、制備過程、貯存等因素都會影響其含量。腦立清制劑3種劑型因生產(chǎn)工藝存在較大差異，腦立清丸劑和片劑生產(chǎn)過程中都包括干燥環(huán)節(jié)，片劑還包括β-環(huán)糊精包合環(huán)節(jié)，工藝的差別影響了冰片、薄荷腦的含量，從而對藥品的質(zhì)量和療效都會產(chǎn)生一定的影響。建議統(tǒng)一和完善腦立清3種劑型的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對處方中揮發(fā)性成分的含量進(jìn)行全面評價,同時企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)對揮發(fā)性藥材的原料管控，優(yōu)化生產(chǎn)工藝，確保藥品的質(zhì)量，以保證廣大人民群眾用藥安全。