劉偉，霍辰思，王國平，王定仙，樊新萍

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹研究所，山西 太谷 030801）

棗（Ziziphus jujubaMill.）屬于鼠李科棗屬，具有較強(qiáng)的抗逆性及適應(yīng)性，其果實(shí)既可以鮮食亦可作為加工食品的原料，因其優(yōu)良的營養(yǎng)價(jià)值而廣受歡迎［1］。棗是我國特有的經(jīng)濟(jì)林及果樹樹種，也是我國第一個(gè)完成全基因組測序的木本干果樹種［2］，具有較高的研究價(jià)值及較廣的產(chǎn)業(yè)發(fā)展前景。

棗瘋病作為我國棗樹的嚴(yán)重病害之一，近些年給整個(gè)棗產(chǎn)業(yè)造成了巨大的損失。棗樹染病后常表現(xiàn)出花變?nèi)~、叢枝和小葉癥狀，最終導(dǎo)致棗樹絕產(chǎn)，甚至樹體死亡。該病害在我國南北方各棗區(qū)均有發(fā)生，對生產(chǎn)影響極大，嚴(yán)重威脅棗產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。棗瘋病屬于一種植原體病害，由于植原體具有韌皮部專性寄生的特性，目前還無法進(jìn)行人工離體培養(yǎng)，因此使得該病害致病機(jī)理方面的研究十分困難。前人針對棗瘋病的研究主要涉及不同品種的抗病性、病原物的提取與鑒定、染病植株的生理生化指標(biāo)的改變等。郝新迪等人探索了不同棗樹品種棗瘋病的抗性差異以及病原物在染病植株體內(nèi)遷移特性差異，初步確認(rèn)了不同棗樹品種對棗瘋病植原體具有響應(yīng)差異［3］。肖京等人以駿棗不同株系為試材，篩選得到了具有較高的棗瘋病抗性的優(yōu)良株系［4］。這些為抗病品種的選育奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。針對植原體病原物的檢測鑒定，目前已開發(fā)出常規(guī) PCR 檢測［5］、多重 PCR 檢測［6］、熒光定量 PCR 檢測［7，8］以及 LAMP 可視化檢測［9］等多種檢測方法。此外，研究表明，感病棗樹葉片葉綠素含量顯著降低，光合系統(tǒng)及保護(hù)酶系統(tǒng)均受到顯著影響［10，11］。

近年來，測序技術(shù)的發(fā)展對植物病害研究領(lǐng)域產(chǎn)生了極大影響，促進(jìn)了人們對病原物特點(diǎn)及致病分子機(jī)制的深入研究，提高了對病原物、植物與昆蟲互作關(guān)系的更深層次的理解。一些棗瘋病植原體相關(guān)基因序列得到進(jìn)一步解析，比如可用于植原體亞組分類的延伸因子tuf基因、運(yùn)輸?shù)鞍谆颍╯ecY）以及核糖體蛋白基因（rp）等［12~15］。棗瘋病相關(guān)的部分致病因子被發(fā)現(xiàn)并得到初步驗(yàn)證。倪靜發(fā)現(xiàn)了具有核定位的Zaofeng 8 致病因子并明確了其致病的表型［16］。屈曉逸基于高通量測序技術(shù)及生物信息學(xué)分析預(yù)測得到11 種棗瘋病植原體的效應(yīng)蛋白［17］。一些響應(yīng)棗瘋病植原體侵染的基因也被發(fā)現(xiàn)，比如絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族 成 員ZjMAPKKKs［18］、谷 胱 甘 肽 S 移 換 酶 基 因ZjGSTU1［19］、AP2/ERF轉(zhuǎn)錄因子［20］、WRKY轉(zhuǎn)錄因子［21］、TCP轉(zhuǎn)錄因子［22］等。棗瘋病致病機(jī)理也被進(jìn)一步挖掘，F(xiàn)an 等利用轉(zhuǎn)錄組分析棗瘋病株，獲得了植原體侵染棗樹后葉片及花器官差異表達(dá)的基因［23］。Ye 等利用 iTRAQ 蛋白質(zhì)組學(xué)與轉(zhuǎn)錄組測序分析棗瘋病植原體侵染棗樹后的多重調(diào)控水平［24］。但是棗瘋病導(dǎo)致的棗花異常發(fā)育以及小葉、叢枝等異常性狀的分子基礎(chǔ)仍不清楚。

本研究基于轉(zhuǎn)錄組高通量測序，分析棗瘋病染病植株異常發(fā)育花器官差異表達(dá)基因，進(jìn)一步挖掘成花誘導(dǎo)與發(fā)育相關(guān)的關(guān)鍵基因并進(jìn)行熒光定量PCR 表達(dá)驗(yàn)證。初步探討棗花異常發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控規(guī)律，旨在為進(jìn)一步挖掘植原體導(dǎo)致的器官異常發(fā)育的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

本研究采集的植物樣本均來源于山西農(nóng)業(yè)大學(xué)果樹研究所國家棗種質(zhì)資源圃，供試棗品種為“伏脆蜜”。于2018 年6 月5 日在田間采集棗健康植株及棗瘋病染病植株花器官樣本，各取3 個(gè)重復(fù)，裝入無菌管后，迅速投入液氮速凍，放入?80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 RNA 提取及質(zhì)量檢測

采用RNAprep Pure 多糖多酚植物總RNA 提取試劑盒（天根生化科技有限公司）提取各樣本總RNA，利用DNaseⅠ去除基因組DNA。使用Agilent 2100 Bioanalyzer 生物分析儀檢測RNA 的濃度以及完整性，使用Eppendorf BioPhotometer D30核酸蛋白測定儀檢測RNA 純度。

1.2.2 轉(zhuǎn)錄組測序與數(shù)據(jù)分析

轉(zhuǎn)錄組測序由上海派森諾生物科技有限公司完成。樣品經(jīng)過RNA 抽提、純化、建庫之后，采用第二代測序技術(shù)（Next-Generation Sequencing，NGS），基于 Illumina HiSeq 測序平臺，對這些文庫進(jìn)行雙末端（Paired-end，PE）測序。測序獲得的原始數(shù)據(jù)經(jīng)過濾得到高質(zhì)量序列（Clean Data），將其與棗的參考基因組比對［2］。利用Geneontology數(shù) 據(jù) 庫（http：//geneontology. org）［25，26］和 KEGG數(shù)據(jù)庫（https：//www.kegg.jp/kegg/pathway.html）［27］進(jìn)行基因功能注釋及富集分析，用 R 軟件作圖。采用TBtools 軟件繪制差異基因表達(dá)熱圖［28］。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量qRT-PCR 檢測

利用與轉(zhuǎn)錄組測序相同的樣本進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測，3 次生物學(xué)重復(fù)。將提取的RNA參照Promega 反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書制備成cDNA。根據(jù)篩選得到的差異表達(dá)基因序列設(shè)計(jì)并合成qRT-PCR 引物，以棗Actin-depolymerizing factor 1（ACT1）基因作為內(nèi)參基因進(jìn)行qRT-PCR 檢測［29］，具體引物序列信息見表 1。qRT-PCR 反應(yīng)液按照 GoTaq qPCR Master Mix（Promega）試劑盒說明書進(jìn)行配制，反應(yīng)液總體積為20 μL，反應(yīng)體系中包含GoTaq qPCR Master Mix（2×）10 μL、上下游引物（10 μmol·L-1）各 0.4 μL、cDNA 模板 2 μL、Nuclease-Free Water 7.2 μL。利用羅氏Light Cycler 96 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀進(jìn)行qRTPCR 檢測。qRT-PCR 反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性 2 min；95 ℃變性 15 s，60 ℃退火延伸 1 min，40 次循環(huán)。

表1 棗花器官生長發(fā)育相關(guān)基因qRT-PCR 引物Table 1 qRT-PCR primers of genes involved in floral organ development of jujube

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

1.3.1 轉(zhuǎn)錄組差異表達(dá)基因分析

使用HTSeq 統(tǒng)計(jì)比對到每一個(gè)基因上Read Count 值，作為基因的原始表達(dá)量，采用RPKM 對表達(dá)量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。采用DESeq 對棗瘋病染病植株與健康植株樣品基因表達(dá)進(jìn)行差異分析，篩選差異表達(dá)基因條件為：表達(dá)差異倍數(shù)|log2 Fold-Change|＞1 ，顯著性P-value＜0.05 。

1.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

獲取qRT-PCR 檢測得到的Cq 值數(shù)據(jù)，采用2-ΔΔCt法計(jì)算基因的相對表達(dá)量及表達(dá)量的標(biāo)準(zhǔn)化［30］。利用GraphPad Prism 軟件進(jìn)行作圖及表達(dá)差異顯著性分析（T 檢驗(yàn)，P＜0.01）。

2 結(jié)果與分析

2.1 測序數(shù)據(jù)組裝與質(zhì)量分析

為深入探索棗瘋病在轉(zhuǎn)錄水平上對棗樹花器官的影響，采集棗瘋病染病植株及健康植株花器官樣本，利用Illumina HiSeq 測序平臺進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序，共獲得 37.21 Gb Clean Data，Q20 值平均為96.34%，Q30 值平均為91.75%。樣品測序獲得原始 reads 數(shù)為 39 804 662~43 115 716 條，通過對原始reads 進(jìn)行數(shù)據(jù)過濾，將有效reads 比對到棗參考基因組，平均有78.51%有效reads 能夠比對到棗基因組上。其中比對到多個(gè)位置的序列總數(shù)平均為5 520 171，占總序列的平均百分比為17.06%；只比對到一個(gè)位置的序列總數(shù)平均為26 836 114，占總序列的平均百分比為82.94%。具體測序數(shù)據(jù)信息如表2 所示。

表2 樣品轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及參考基因組比對情況Table 2 Samples of the transcriptome sequencing data statistics and comparison with the reference genome

對測序的6 個(gè)樣品數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析（Principal Component Analysis，PCA），染病植株樣本和健康植株樣本被清晰的劃分為2 類（圖1A），同一樣品類型的不同樣品之間緊密排列，說明樣品間重復(fù)性良好。PCA 分析結(jié)果表明棗花器官轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果整體評估優(yōu)良，可用于后續(xù)分析。同時(shí)，進(jìn)一步對樣品間基因表達(dá)水平相關(guān)性進(jìn)行分析。相關(guān)性分析是檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)可靠性和樣本選擇是否合理的重要指標(biāo)，也是進(jìn)行差異表達(dá)分析的基礎(chǔ)。由圖1B 可知，生物學(xué)重復(fù)的樣本之間相關(guān)系數(shù)均大于0.9，表現(xiàn)為極強(qiáng)的相關(guān)性，而不同分組的樣本間的相關(guān)系數(shù)均低于0.8，表示不同分組樣品之間的相關(guān)性較低。這進(jìn)一步證明轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果的可靠性，可進(jìn)行后續(xù)差異表達(dá)分析。

圖1 轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)評估及差異基因分析Fig.1 The transcriptome sequencing data assessment and DEGs analysis

2.2 差異表達(dá)基因鑒定

采用DESeq 對染病植株和健康植株的花器官樣本基因表達(dá)進(jìn)行差異分析，結(jié)果如圖1C 所示。棗瘋病染病植株花器官與健康植株樣本相比，有4 148 個(gè)基因存在表達(dá)差異，其中有2 305 個(gè)基因在染病植株中表達(dá)上調(diào)，占差異表達(dá)基因總量的55.57%。有1 843 個(gè)基因在染病植株中表達(dá)下調(diào)，占差異表達(dá)基因總量的44.43%。

2.3 差異表達(dá)基因的GO 分類及顯著性富集分析

首先將比對到基因組的所有基因映射到Gene Ontology 數(shù)據(jù)庫的各個(gè)條目，計(jì)算每個(gè)條目的差異基因數(shù)量，以整個(gè)基因組為背景，采用超幾何分布計(jì)算差異基因顯著富集的條目。其中14 472 個(gè)基因能夠被GO 注釋，其中差異表達(dá)基因被注釋的數(shù)量為2 188 個(gè)，被注釋的總Term 數(shù)為1 954 個(gè)。被注釋的基因在GO 數(shù)據(jù)庫中被分為細(xì)胞組件、分子功能及生物過程3 類，其中差異表達(dá)基因在細(xì)胞組分大類被注釋到196 個(gè)GO Term，分子功能大類被注釋到553 個(gè)GO Term，生物過程大類被注釋到1 205 個(gè)GO Term。由此可見，棗瘋病染病植株的許多生物反應(yīng)過程發(fā)生了改變。

通過對差異表達(dá)基因的GO 條目進(jìn)行富集分析，獲得每個(gè)大類中富集程度較高的GO 條目。由圖2 可知，細(xì)胞組件類別中，富集程度最高的條目（前10 條）依次是：類囊體部分（GO：0044436）、光合膜（GO：0034357）、類囊體（GO：0009579）、類囊體膜（GO：0042651）、光系統(tǒng)（GO：0009521）、葉綠體類囊體膜（GO：0009535）、質(zhì)體類囊體膜（GO：0055035）、胞外區(qū)（GO：0005576）、葉綠體類囊體（GO：0009534）、質(zhì)體類囊體（GO：0031976）。由此可見棗瘋病染病植株的光合系統(tǒng)及生物膜系統(tǒng)受到較大影響。分子功能類別中，富集程度最高的條目（前10 條）依次是：氧化還原酶活性（GO：0016491）、葉綠素結(jié)合（GO：0016168）、四吡咯色素結(jié)合（GO：0046906）、催化活性（GO：0003824）、單加氧酶活性（GO：0004497）、木葡聚糖木葡糖基轉(zhuǎn)移酶活性（GO：0016762）、二級主動跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性（GO：0015291）、氧化還原酶活性（GO：0016679）、果膠裂解酶活性（GO：0030570）、碳-氧裂合酶活性（GO：0016837）。生物過程類別中，富集程度最高的條目（前10 條）依次是：光合作用（GO：0015979）、氧化還原過程（GO：0055114）、光合作用：光反應(yīng)（GO：0019684）、光合作用：光捕獲（GO：0009765）、外 部 封 裝 結(jié) 構(gòu) 組 織（GO：0045229）、甘氨酸分解過程（GO：0006546）、細(xì)胞壁組織發(fā)生（GO：0071554）、碳水化合物代謝過程（GO：0005975）、單 一 組 織 形 成 過 程（GO：0044699）、水分平衡（GO：0030104）。

2.4 差異表達(dá)基因的KEGG 富集分析

在 KEGG 數(shù)據(jù)庫中，統(tǒng)計(jì)各個(gè)KEGG Pathway 不同層級上包含的差異表達(dá)基因數(shù)目，進(jìn)而確定差異表達(dá)基因主要參與的代謝途徑和信號通路。以整個(gè)基因組為背景，采用超幾何分布計(jì)算棗瘋病染病植株花器官差異表達(dá)基因顯著富集的通路，結(jié)果顯示1 845 個(gè)差異表達(dá)基因被注釋到237 條代謝途徑。其中，172 個(gè)差異表達(dá)基因富集到細(xì)胞進(jìn)程類別下的20 條代謝途徑；221 個(gè)差異表達(dá)基因富集到環(huán)境信息過程下的29 條代謝途徑；126 個(gè)差異表達(dá)基因富集到遺傳信息過程下的20條代謝途徑；426 個(gè)差異表達(dá)基因富集到新陳代謝類別下的106 條代謝途徑；305 個(gè)差異表達(dá)基因富集到有機(jī)體系統(tǒng)類別下的62 條代謝途徑。從差異表達(dá)基因數(shù)量上看（圖3A），棗瘋病染病植株主要富集的代謝通路包括淀粉與蔗糖代謝、植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、苯丙烷生物合成、碳代謝、氨基酸生物合成、光合作用、戊糖和葡萄糖醛酸相互轉(zhuǎn)化、糖酵解和糖異生、核糖體、氰基氨基酸代謝等；從顯著性上來看（圖3B），棗瘋病染病植株在12 條代謝通路中具有顯著差異，包括光合作用、光合作用-天線蛋白、淀粉與蔗糖代謝、苯丙烷生物合成、光合碳同化、氰基氨基酸代謝、甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝、5-羥色胺能突觸、戊糖和葡萄糖醛酸相互轉(zhuǎn)化、植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、乙醛酸和二羧酸的代謝、色氨酸代謝。由此可見，淀粉與蔗糖代謝途徑、植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、苯丙烷生物合成途徑、光合作用途徑、戊糖和葡萄糖醛酸相互轉(zhuǎn)化途徑以及氰基氨基酸代謝途徑中差異表達(dá)基因數(shù)量較多，且存在顯著性差異，可能是參與棗瘋病植原體響應(yīng)的重要代謝途徑。

圖3 差異表達(dá)基因的KEGG 代謝途徑富集圖Fig.3 The KEGG pathways enrichment map of DEGs

2.5 花器官生長發(fā)育相關(guān)差異表達(dá)基因分析

為進(jìn)一步挖掘棗瘋病導(dǎo)致花器官異常發(fā)育的關(guān)鍵基因，根據(jù)已發(fā)表的與成花誘導(dǎo)與發(fā)育相關(guān)文獻(xiàn)和棗基因組注釋關(guān)鍵詞對差異表達(dá)基因進(jìn)行檢索并獲得基因編號。從中篩選獲得27 個(gè)差異表達(dá)基因（表3），其中在染病植株中表達(dá)上調(diào)基因10個(gè)，表達(dá)下調(diào)基因17 個(gè)，包括MADS-box 轉(zhuǎn)錄因子、AP2 轉(zhuǎn)錄因子、SPL 轉(zhuǎn)錄因子等。MADS-box轉(zhuǎn)錄因子家族有多個(gè)基因的表達(dá)存在顯著差異，其中上調(diào)表達(dá)的有4 個(gè)，即LOC107430150（AGL14）、LOC107421471（AGL12）、LOC10742 5139、LOC107427902；表達(dá)下調(diào)的 MADS-box 轉(zhuǎn)錄 因 子 有 9 個(gè) ，即 LOC107416438（SEP1）、LOC107416339（AGL1）、LOC107421109、LOC 107417456（AGL15）、LOC107421424（AGL11）、LOC107431619（AGL18）、LOC107425386（AGL66）、LOC107425568 （FBP24-like） ，LOC112492135（AGL104）。2 個(gè)基因被注釋為 AP2 轉(zhuǎn)錄因子，即LOC107413613 和 LOC107411289，均在棗瘋病染病花器官中表達(dá)顯著上調(diào)。4 個(gè)差異表達(dá)基因被注釋為SPL 轉(zhuǎn)錄因子，其中LOC107432336 被注釋為SPL9，在染病花器官中表達(dá)顯著上調(diào)；LOC107418038、LOC107408885、LOC107408850均被注釋為SPL13，在染病花器官中表達(dá)顯著下調(diào)。圖4 利用熱圖展示了篩選獲得的差異表達(dá)基因在染病和健康植株花器官的表達(dá)情況，并根據(jù)差異基因的表達(dá)量對樣本進(jìn)行了聚類。

圖4 花器官生長發(fā)育相關(guān)基因差異表達(dá)熱圖Fig.4 Heat map of differentially expressed genes involved in floral organ development

2.6 花器官生長發(fā)育相關(guān)差異表達(dá)基因qRTPCR 驗(yàn)證

為了驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性并進(jìn)一步分析棗瘋病導(dǎo)致的花器官異常生長的機(jī)制，從篩選得到的27 個(gè)差異表達(dá)基因中選擇了8 個(gè)基因進(jìn)行qRT-PCR 檢測，分析健康樣本和染病樣本差異基因的表達(dá)變化情況。由圖5 可見，8 個(gè)基因的FPKM 值與 qRT-PCR 驗(yàn)證結(jié)果的變化趨勢基本一致，但是表達(dá)差異的變化幅度略有不同。與健康花器官相比，染病花器官LOC107421471（AGL12）、LOC107430150（AGL14）、LOC10741 3613（AP2）和 LOC107422311（bZIP27-like）基 因表達(dá)顯著上調(diào)，分別提高170.45 倍、19.02 倍、15.46 倍 、5.41 倍 。 相 反 ，LOC107421424（AGL11）、LOC107425386（AGL66）、LOC10743 1619（AGL18）和 LOC107408885（AGL13）在染病花器官中的表達(dá)顯著下調(diào)，分別下降49.77%、84.10%、75.25%和78.31%。由此可見，棗瘋病造成許多花器官生長發(fā)育的基因的異常表達(dá)。

圖5 花器官生長發(fā)育相關(guān)基因qRT-PCR 相對表達(dá)Fig.5 The relative expression by qRT-PCR of differentially expressed genes involved in floral organ development

3 討論與結(jié)論

棗瘋病作為影響棗樹的嚴(yán)重病害，其病原物與植物體的互作機(jī)理一直不是很明確。高通量轉(zhuǎn)錄組測序是一種挖掘差異表達(dá)基因、探索生物學(xué)機(jī)理的重要手段。本研究通過對健康與染病的棗樹花器官進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序分析，明確了棗瘋病導(dǎo)致棗花異常發(fā)育的相關(guān)代謝通路，其中涉及光合作用、激素信號、氨基酸合成等眾多方面，這與前人的研究報(bào)道基本一致［10，11］。本研究還針對棗瘋病導(dǎo)致的花器官生長發(fā)育差異表達(dá)基因進(jìn)行了挖掘分析，獲得的相關(guān)基因多屬于MADS-box 轉(zhuǎn)錄因子、AP2 轉(zhuǎn)錄因子、SPL 轉(zhuǎn)錄因子家族。MADS-box 基因家族是控制開花和花發(fā)育過渡網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵組成部分，該家族中有多個(gè)AGL基因參與棗瘋病導(dǎo)致棗花異常發(fā)育的過程。AGL14在擬南芥中已被證明是復(fù)雜基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的重要組成部分，是莖尖分生組織轉(zhuǎn)變的基礎(chǔ)，AGL14過表達(dá)會導(dǎo)致花器官會有營養(yǎng)器官的特征，同時(shí)導(dǎo)致擬南芥早花［31］，棗瘋病導(dǎo)致花器官變?yōu)闋I養(yǎng)器官，本研究中LOC107430150（AGL14）在棗樹染病花器官中顯著上調(diào)，這種棗花異常發(fā)育的特征與擬南芥的結(jié)果一致。對開花起抑制作用的AGL18表達(dá)量顯著下調(diào)，這可能是其與其他AGL基因存在功能互補(bǔ)或存在其他調(diào)控途徑［32］。AGL12已被證明正向調(diào)節(jié)根分生組織細(xì)胞分裂并與擬南芥的成花誘導(dǎo)相關(guān)［33］，本研究中AGL12在染病棗花器官中顯著上調(diào)，其在棗瘋病導(dǎo)致的花器官異常發(fā)育中的具體調(diào)控作用還有待進(jìn)一步研究。AGL11作為經(jīng)典的ABCDE 模型中的D 類基因，在心皮的發(fā)育中是必不可少的，本研究中AGL11在染病棗花器官中顯著下調(diào)，因此很可能在棗花器官異常發(fā)育過程中起關(guān)鍵作用。AP2 轉(zhuǎn)錄因子參與成花誘導(dǎo)及花器官的分化與調(diào)控，是植物花發(fā)育調(diào)控的重要功能基因，本研究中被注釋為AP2 的基因顯著上調(diào)，這可能打破了棗花器官正常的發(fā)育過程。此外，miR156-SPL 調(diào)控模塊也是控制花發(fā)育的重要途徑，在植物營養(yǎng)生長和生殖生長階段轉(zhuǎn)變中發(fā)揮重要作用。在番茄中干擾SPL13的表達(dá)和miR156a的過表達(dá)均會導(dǎo)致果實(shí)產(chǎn)量降低［34］，本研究中有3 個(gè)下調(diào)表達(dá)的基因被注釋為SPL13同源基因，這也可能是棗瘋病染病植株花發(fā)育異常的一個(gè)關(guān)鍵因素。

e-lik 24 X1 X2BP X2 X1 rm X1 rm fo fo rm rm rm fo tein F fo ro Descriptio fo n A iso 14釋13 9 iso A 1-like ox p 4A iso注12 1115CM 11 iso 18 iso 1366-b 1013因GL GL 2tein 2 tein GL GL GL GL tein GL DS GL tein e基tein A LA tein A TA ro LA ro 1-like olog S-like LA tein A 2FL esis M en ro MA ro tein A S -lik ES g-like p ro tein A og TA 7-like ES ro om tein A tein A g-like p e AL TA tein A ro 10 TL ro ro PE ro x p DS g-like p ro x p -lik ro g-like p GA r 2 S-bo in olog 33 PE in tein A S-bo 1 h IN TL EP x p MA IN x p YB T and T orph x p x p in ter-bind x p EIN：21 tein A OT x p in r T AD n facto JO EL ter-bind JO tein S ro r M AD S-bo om tein P S-bo AD R o r o S-bo f m ro S-bo S-bo PR defh S-bo AD scriptio AD tein tic p f F AD ro ter-bind tein B AD AD ter-bind n facto tein ro s-like M s-like M eo ro ro mo mo eo ox p tein ox p la/leafy h ro tic p ro mo tal p n facto HE tic p eo n facto ro OT LITY ro mo ro tran scriptio sa p om ro pm ment s-like M om ou ox p sa p ou Floral h scriptio ou -b en s-like M ou scriptio s-like M ou s-like M sa p uamo ox p s-like M ou ou UA-b W Q s-like M ou sa p DS am tran DS om am Ag IP因elop Ag Sq bZ meob MA Floral h DS Floricau Ho-b uamo am am am am uamo am am uamo IP基ev MA Sq Develo Tran Ag Floral h Ag Protein M Tran Ag Ag Sq Ag LO MA Ag Sq bZ達(dá)62070432030812120903 1109041613040202表an d e 120203092002150304異rg P 值E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?E?差ral o P-valu 28544184930997503612 8171875817 2.1.4.73 9.6.1.20 3.4.9.70 3.3.4.66 4.7.2.64 4.4.84911340592309關(guān)5.4.7.3.1.6.4.6.3.2.相育發(fā)長olved in flo ge生數(shù)倍an 19984412284412926 4948463831151514100505020000000000官器EG s inv異ch ld .8.9.5 406.195.174.2.2.2.2.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.Fo 差花與f D 3 ble 3 L ist o表表 對量PK M相01573940306280712 69866668197076266636280000000000織9..7 44.5 169..9 299.3.3.9.9.7..0 489.9.2..9 191.2.6.7.0.3.0.0.0.0.0.Ta 組達(dá)63662841688875 84223967病FP：F 1 7染 表對相M 62494154661024476 501440107902336156226065織量PK .6 2.0..8 5..4 5.4.7.5..3.3 4..9.8 0..5.2.3 4.7.5.8..1.0.6 6.組達(dá)159768 14283833 2537 495575 13111964 1419163441康FH：F 1 73 61 02 1健e 50117113883936891402 3838453909569068241985866851355084號am 01231436335123120279 8064286311741929141688535516218854因43424241424243414342 4141414142414243424340424249494040基Gene N 07 C107 C10707 C10707 C107070707 0707070707070707070707070712120707 LO LO LO LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO C1 LO式attern調(diào)調(diào)模上下達(dá)達(dá)達(dá)表pression p表表Ex

本試驗(yàn)獲得的棗樹花器官測序結(jié)果較為可靠準(zhǔn)確，其中光合作用相關(guān)途徑、淀粉與蔗糖代謝、苯丙烷生物合成等代謝途徑是棗瘋病導(dǎo)致花器官異常發(fā)育的重要代謝途徑。此外，MADS-box 轉(zhuǎn)錄因子可能是導(dǎo)致染病棗樹花器官異常發(fā)育的關(guān)鍵基因，具體調(diào)控模式有待進(jìn)一步挖掘。本研究結(jié)果為揭示棗瘋病病原物與植物之間互作機(jī)制提供了科學(xué)參考。