張遲蕾，張靖蕾，張江波

（1.焦作市山陽區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河南 焦作 454150；2.焦作市中站區(qū)龍翔街道辦事處）

牛結(jié)節(jié)性皮膚病，于2019年8月在我國新疆伊犁首次被報(bào)告，之后在廣東、安徽、浙江等地也陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，對我國的養(yǎng)牛業(yè)造成了極大損失。為了做好該病的防控工作，快速準(zhǔn)確的確診和對疫情及時(shí)有效的處置至關(guān)重要。因此對該病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)、疫情確診程序及處置要點(diǎn)進(jìn)行探討分析，具有十分重要的意義。

牛結(jié)節(jié)性皮膚病（LSD）是牛結(jié)節(jié)性皮膚病毒引起的牛全身性感染疫病，臨床以皮膚結(jié)節(jié)為特征，該病不會(huì)傳染人，不是人獸共患病。該病對養(yǎng)牛業(yè)危害極大，能夠?qū)е屡Ｖ幌?、品質(zhì)降低、產(chǎn)奶量降低，母牛流產(chǎn)、公牛暫時(shí)性或永久性不育，并導(dǎo)致部分牛死亡，對養(yǎng)牛場、牛奶產(chǎn)業(yè)甚至出口外貿(mào)都會(huì)帶來嚴(yán)重影響，必須高度警惕和重視。本文重點(diǎn)梳理分析了牛結(jié)節(jié)性皮膚病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)、疫情確診程序及處置要點(diǎn)，從而為做好牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治提供參考借鑒。

1 牛結(jié)節(jié)性皮膚病

1.1 流行情況

牛結(jié)節(jié)性皮膚病于1929 年首次在非洲贊比亞出現(xiàn)，1988 年，傳入埃及，1989 年傳至以色列，之后逐漸傳至土耳其和伊拉克、伊朗、沙特以及阿塞拜疆、亞美尼亞等國家，隨后逐漸傳至歐洲等國家，2019年8月，我國首次在新疆發(fā)現(xiàn)該病。

1.2 生物學(xué)特性及主要癥狀

牛結(jié)節(jié)性皮膚病屬于痘病毒科、山羊痘病毒屬，屬于DNA病毒，只有1個(gè)血清型，基因組穩(wěn)定，很少發(fā)生遺傳變異，基因組比較大。臨床癥狀主要為發(fā)熱、皮膚（黏膜、器官）表面出現(xiàn)結(jié)節(jié)、消瘦、淋巴結(jié)腫大、奶牛產(chǎn)奶量下降，甚至引發(fā)死亡。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)

2.1 抗體檢測

牛結(jié)節(jié)性皮膚病毒侵入機(jī)體后，會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，因此通過檢測抗體，來間接判定動(dòng)物是否患病。

常用的抗體檢測方法有：病毒中和實(shí)驗(yàn)、間接熒光抗體試驗(yàn)（IFAT）、瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等。但抗體檢測手段還存一些問題和不足，比如病毒試驗(yàn)，由于需要活的病毒，因此存在一定的安全隱患，對實(shí)驗(yàn)室防護(hù)能力和操作人員操作技術(shù)要求很高，操作不當(dāng)，會(huì)造成病毒的擴(kuò)散。另外抗體檢測手段，雖然是通過檢測抗體來判定動(dòng)物是否患病，但對于疫苗免疫產(chǎn)生的抗體或者病毒產(chǎn)生的抗體卻無法區(qū)別診斷，因此，抗體檢測手段存在自身的瓶頸性，而抗體測的優(yōu)勢主要在于群體抗體檢測，能夠大批量開展檢測，然而對于個(gè)體檢測，優(yōu)勢不明顯，結(jié)果也不可靠。

2.2 病原檢測

由于抗體檢測存在的諸多問題和不足，因此，牛結(jié)節(jié)性皮膚病的首選檢測手段，應(yīng)當(dāng)是分子生物學(xué)檢測技術(shù)。分子生物學(xué)技術(shù)即病原學(xué)診斷，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)，通過對牛結(jié)節(jié)性皮膚病核酸片段進(jìn)行提取、擴(kuò)增、分析，來診斷動(dòng)物體內(nèi)是否含有病毒，因此，相對血清學(xué)技術(shù)，更穩(wěn)定、更科學(xué)、更準(zhǔn)確，也是今后實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的一個(gè)主要研究方向。

主要的病原學(xué)檢測技術(shù)有：普通PCR、qRNA（實(shí)時(shí)熒光定量PCR）、RT-PCR（反轉(zhuǎn)錄酶PCR技術(shù)）等，普通PCR檢測手段是最早的分子生物學(xué)診斷技術(shù)，在實(shí)驗(yàn)室資源有限、專業(yè)人員技術(shù)水平不高的情況下，是最值得推薦的技術(shù)，在一些地方被廣泛應(yīng)用。另外一種最常用的是qRNA，即實(shí)時(shí)熒光定量PCR，該方法既能定性，也能定量，靈敏度更高，與普通PCR相比，優(yōu)勢明顯，在一些有條件的地方，已經(jīng)逐步取代了普通PCR技術(shù)，但是無法有效區(qū)分山羊、綿羊痘病毒和結(jié)節(jié)性皮膚病病毒。而RT-PCR，即反轉(zhuǎn)錄酶PCR技術(shù)，有效地解決了這一問題，能夠有效區(qū)分山羊痘病毒、綿羊痘病毒和牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒，因此，RT-PCR技術(shù)相對前兩種技術(shù)，具有定量、定性、精確、穩(wěn)定等諸多優(yōu)點(diǎn)，也是今后診斷技術(shù)的一個(gè)主要研究方向，隨著技術(shù)的成熟，將越來越多地用于牛結(jié)節(jié)性皮膚病的診斷。

3 疫情的確診

依法科學(xué)地對疫情進(jìn)行確診，是及時(shí)有效處置牛結(jié)節(jié)性皮膚病的前提，也是最大程度減小損失的關(guān)鍵。根據(jù)牛結(jié)節(jié)性皮膚病的病毒特點(diǎn)、流行規(guī)律及生物學(xué)特性，按照《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》的要求，牛結(jié)節(jié)性皮膚病的確診，主要有“可疑疫情、疑似疫情、疫情確診”三個(gè)程序。其中“可疑疫情”，是指縣級畜牧獸醫(yī)主管部門接到有關(guān)疫情報(bào)告或者疑似病例后，立即組織人員到現(xiàn)場展開調(diào)查，通過臨床診斷初步判定為牛結(jié)節(jié)性皮膚病的，認(rèn)定為“可疑疫情”，然后采集有關(guān)病料、拭子、血清等，送縣級動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心進(jìn)行病原學(xué)檢測，經(jīng)檢測病原陽性的，確定為“疑似疫情”，然后縣級畜牧獸醫(yī)主管部門采集樣品送省級動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)或者有資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原檢測，檢測結(jié)果陽性的，可認(rèn)定為“確診疫情”。需要注意的是，各省份首次確認(rèn)的牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情必須由中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。

4 疫情處置要點(diǎn)

4.1 封鎖的實(shí)施

目前，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部暫時(shí)將該病列為二類動(dòng)物疫病，按照《動(dòng)物防疫法》規(guī)定，對二類動(dòng)物疫病由縣級以上人民政府畜牧獸醫(yī)主管部門劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)和受威脅區(qū)，同時(shí)采取隔離、撲殺、銷毀、無害化處理、緊急免疫接種、限制易感動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品及有關(guān)物品出入等控制、撲滅措施，并未強(qiáng)制要求采取封鎖措施。按照《防治技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定，確診疫情后，要按照二類動(dòng)物疫病的規(guī)定進(jìn)行處置，一般不采取封鎖措施，如確實(shí)有必要的，由縣級政府發(fā)布封鎖令進(jìn)行封鎖，禁止易感動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品出入。

4.2 疫點(diǎn)的處置

關(guān)于對疫點(diǎn)的處置，主要是對于確診陽性的病牛，立即進(jìn)行隔離，并采取撲殺、銷毀等措施，對同群牛進(jìn)行采樣檢測，一旦發(fā)現(xiàn)病原學(xué)陽性的，也立即撲殺并銷毀，檢測陰性的，可繼續(xù)飼養(yǎng)，建議提前出欄屠宰，對于環(huán)境，要強(qiáng)化生物安全措施，改善動(dòng)物防疫條件，嚴(yán)格做好清洗、消毒、無害化處理等措施，加強(qiáng)對場區(qū)、生產(chǎn)區(qū)、生活區(qū)、周邊道路等清洗、消毒工作，消滅廠區(qū)內(nèi)的蚊、蠅、蜱等媒介，切斷傳播途徑。

4.3 疫區(qū)及受威脅區(qū)的處置

首先是對疫區(qū)的處理措施。要禁止牛只出入，禁止未經(jīng)檢疫的牛皮張、精液等產(chǎn)品調(diào)出。對吸血蟲媒進(jìn)行控制，滅殺飼養(yǎng)場所昆蟲及幼蟲，清除滋生環(huán)境。對監(jiān)測發(fā)現(xiàn)的病原學(xué)陽性牛只進(jìn)行撲殺和無害化處理，同群牛只隔離觀察。對疫區(qū)實(shí)施封鎖的，還應(yīng)在疫區(qū)周圍設(shè)警示標(biāo)志，在交通路口設(shè)置檢查站。

其次，是對受威脅區(qū)的處置措施。禁止牛只出入和未經(jīng)檢疫的牛皮、精液等產(chǎn)品調(diào)出。對牛只養(yǎng)殖場、牧場等場所進(jìn)行監(jiān)測排查和感染風(fēng)險(xiǎn)評估。疫情所在縣、相鄰縣可采用山羊痘疫苗按照山羊5倍的劑量要求，對所有牛只全部進(jìn)行緊急免疫。