梁 琴，李 媛

（廣西壯族自治區(qū)北海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西 北海 536000）

犬種布魯氏菌病為臨床及畜牧業(yè)常見(jiàn)傳染病，盡管近年來(lái)我國(guó)對(duì)傳染病的防控能力有很大提升，但隨著人民生活水平提高，城鎮(zhèn)家庭飼養(yǎng)寵物犬增加，犬種布魯氏菌病的隱患增大，需盡早發(fā)現(xiàn)、診斷和治療。目前對(duì)該病的診斷，常見(jiàn)診斷方法有全乳環(huán)狀試驗(yàn)（MRT）、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CET）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、膠體金免疫層析檢測(cè)技術(shù)（GICA）及病原學(xué)診斷中的分子生物學(xué)檢測(cè)等。在對(duì)該病的治療中，患病動(dòng)物多以抗生素治療為主，配合按時(shí)更換消毒劑。在對(duì)人犬種布魯氏菌病治療中，目前對(duì)中醫(yī)藥聯(lián)合治療關(guān)注度逐漸提升，為該病治療提供新思路。

1 研究背景

1.1 犬種布魯氏菌病概述

犬種布魯氏菌病，為布魯氏桿菌引發(fā)的傳染性疾病，病原菌侵入人體后，定居于局部淋巴結(jié)，通過(guò)在淋巴結(jié)組織中增殖而進(jìn)入血液傳播，引發(fā)全身感染性疾病，包括菌血癥和毒血癥等。病犬臨床特征中，公犬主要表現(xiàn)為陰囊水腫、附睪炎、睪丸炎、前列腺炎癥狀，甚至出現(xiàn)精子異常癥狀。布魯氏桿菌對(duì)懷孕子宮適應(yīng)性較強(qiáng)，母犬感染后，主要表現(xiàn)為持續(xù)排出黃色或黃褐色陰道分泌物，妊娠45～55 d 流產(chǎn)、產(chǎn)出死胎等癥狀。骨關(guān)節(jié)為最常見(jiàn)損傷部位，出現(xiàn)椎間盤(pán)炎、關(guān)節(jié)炎等癥狀，并伴關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、活動(dòng)障礙等癥狀。全身癥狀中，可見(jiàn)淋巴結(jié)、脾、肝、腎等器官形成特征性肉芽腫。在對(duì)神經(jīng)功能損傷中，布魯氏桿菌會(huì)損傷中樞神經(jīng)，并表現(xiàn)出相應(yīng)神經(jīng)功能損傷癥狀。有臨床研究發(fā)現(xiàn)，布魯氏桿菌對(duì)人聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)影響明顯，會(huì)出現(xiàn)聽(tīng)力下降癥狀，包括漸進(jìn)性聽(tīng)力下降、突發(fā)性耳聾等癥狀，且經(jīng)腰椎穿刺結(jié)果提示其存在顱內(nèi)壓輕度升高情況，提示布魯氏桿菌會(huì)造成聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)及腦組織功能損傷。

1.2 犬種布魯氏菌病流行病學(xué)

盡管人們對(duì)傳染病預(yù)防意識(shí)增強(qiáng)，但犬種布魯氏菌病發(fā)病早期無(wú)典型癥狀，在潛伏期難以發(fā)現(xiàn)。因此該病在人與動(dòng)物之間發(fā)病傳染的情況時(shí)有發(fā)生。在有關(guān)人員對(duì)榆社縣2011～2019年人間布魯氏菌病流行特征分析中發(fā)現(xiàn)，累計(jì)報(bào)告的913 例病例中，78.32%集中于3～8 月發(fā)病，發(fā)病以男性為主（5.56∶1），發(fā)病年齡主要集中于40～69 歲，提示夏、秋季中年男性布魯氏桿菌感染風(fēng)險(xiǎn)較高。在對(duì)警犬布魯氏菌病流行調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，云貴川三省犬血清抗體陽(yáng)性率較高（42.65%～8.16%），發(fā)病原因可能與氣候潮濕和溫度較高等原因有關(guān)。有關(guān)人員對(duì)2016～2017 年山東省濟(jì)南市犬布魯氏菌病血清調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，濟(jì)南市寵物犬中光滑性布魯氏菌感染發(fā)生率較高，具較高潛在傳播風(fēng)險(xiǎn)。

上述調(diào)查研究說(shuō)明，目前犬種布魯氏菌病在人與犬之間存在流行情況，感染后會(huì)對(duì)人體造成關(guān)節(jié)損傷、臟器及淋巴結(jié)損傷、神經(jīng)功能損傷等情況，影響患者生存質(zhì)量，因此需盡早診斷鑒別及積極治療。

2 診斷方法

2.1 血清學(xué)診斷

目前犬種布魯氏菌病血清學(xué)指標(biāo)診斷中，常見(jiàn)診斷方法包括凝集試驗(yàn)（MRT）、虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）、試管凝集試驗(yàn)（SAT）及CET、ELISA、GICA等。

2.1.1 MRT

MRT主要用于該病篩查診斷，具操作簡(jiǎn)單、檢出結(jié)果快速等特點(diǎn)，主要用于泌乳動(dòng)物檢查，不僅可用于個(gè)體乳樣檢查，同時(shí)也適用于混合乳樣檢測(cè)，其在檢測(cè)中主要檢測(cè)布魯氏菌LPS-O 鏈抗體，但LPS-O 鏈為多種革蘭氏陰性菌共同抗原，因此在與其他菌較差感染時(shí)，MRT檢查無(wú)法完成鑒別診斷。

2.1.2 RBPT

RBPT為國(guó)際貿(mào)易中動(dòng)物布魯氏桿菌指定試驗(yàn)檢查方式，主要通過(guò)抗原性良好的布魯氏菌經(jīng)滅劇哦、離心、虎紅染料染色制成的檢測(cè)方法；但檢查結(jié)果易受凝集較短及溫度影響，出現(xiàn)診斷誤差情況，多用于初篩診斷，且RBPT陽(yáng)性樣本還需通過(guò)SAT試驗(yàn)診斷。

2.1.3 CET

CET為目前血清學(xué)診斷中最準(zhǔn)確診斷技術(shù)，其反應(yīng)發(fā)生原理為，抗體及相應(yīng)抗原結(jié)合后，會(huì)形成抗原抗體復(fù)合物，抗體分子構(gòu)象發(fā)生改變，F(xiàn)c片段上與補(bǔ)體相結(jié)合位點(diǎn)暴露，在此基礎(chǔ)上加入紅細(xì)胞及溶血素后，補(bǔ)體無(wú)法與其相結(jié)合，因此不會(huì)引發(fā)溶血現(xiàn)象，若檢測(cè)血清中沒(méi)有特異性抗體，補(bǔ)體游離形式存在后，會(huì)立即出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，因此可通過(guò)是否發(fā)生溶血現(xiàn)象進(jìn)行診斷；但此種技術(shù)操作難度較高，結(jié)果易受主觀因素影響出現(xiàn)誤差。

2.1.4 ELISA

ELISA 具有敏感、快速、穩(wěn)定、靈敏度高等特點(diǎn)，診斷過(guò)程可自動(dòng)化操作，可同時(shí)滿(mǎn)足篩選和鑒別診斷。隨著該項(xiàng)技術(shù)發(fā)展，快速雙抗原夾心ELISA 技術(shù)逐漸成熟，可提升ELISA 方法診斷鑒別速度。目前在對(duì)布魯氏菌病檢測(cè)中，主要包括iELISA、cELISA 兩種，其檢測(cè)關(guān)鍵為抗原選擇質(zhì)量。目前在該菌抗原選擇中，主要應(yīng)用S-LPS，位點(diǎn)為L(zhǎng)PS 的O 鏈中，而粗糙型LPS 中無(wú)O 鏈，因此應(yīng)用ELISA 方法難以檢測(cè)出粗糙型布魯氏菌。布魯氏菌在特定時(shí)期會(huì)產(chǎn)生外膜蛋白OMP28，一般在感染后1 w左右出現(xiàn)，盡管持續(xù)時(shí)間相對(duì)較短，但其存在于光滑型、粗糙型布魯氏菌中，因此可將OMP28-ELISA 作為常規(guī)ELISA 補(bǔ)充試驗(yàn)。

2.1.5 GICA

GICA法，具有診斷敏感度和特異度高等特點(diǎn)，且對(duì)樣本量需求較少、操作簡(jiǎn)便快速，可用于流行病學(xué)調(diào)查和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。有人在對(duì)布魯氏菌實(shí)驗(yàn)室初篩研究中，分別應(yīng)用RBPT、GICA法檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，兩種檢驗(yàn)方法陰性完全一致，且假陽(yáng)性完全一致，但GICA操作更簡(jiǎn)便，不需要特殊儀器，診斷用時(shí)短，因此其在診斷中前景更為廣闊。

2.1.6 免疫組化法

免疫組化法檢測(cè)中，抗原位置主要位于肺巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞細(xì)胞膜上，此種診斷方案具有敏感性和特異性高等特點(diǎn)，通過(guò)檢出抗原情況以滿(mǎn)足診斷需求，對(duì)進(jìn)一步開(kāi)展病理學(xué)研究具重要意義。

2.2 病原學(xué)診斷

2.2.1 鏡下直接觀察

顯微鏡檢查，為犬種布魯氏菌病診斷方式之一，經(jīng)科茲洛夫斯基染色法可見(jiàn)布魯氏菌呈現(xiàn)紅色球桿狀，其他菌種呈現(xiàn)藍(lán)色，此種診斷方式直觀簡(jiǎn)單。

2.2.2 分子生物學(xué)技術(shù)

病原鑒定分離，為布魯氏桿菌鑒別診斷金標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)培養(yǎng)基接種、菌株分離鑒定，以滿(mǎn)足診斷需求，但此種診斷方案操作較煩瑣、檢出時(shí)間長(zhǎng)，且對(duì)實(shí)驗(yàn)室要求很高。分子生物學(xué)檢測(cè)，可滿(mǎn)足病原菌分種、分型、同源性分析等診斷需求，其中PCR 技術(shù)，僅極少樣本即可完成檢測(cè)，不僅可區(qū)分布魯氏菌與其他細(xì)菌，同時(shí)可用于特定序列描述新種和菌株特征；但此種技術(shù)對(duì)場(chǎng)地設(shè)計(jì)、設(shè)備和操作人員等要求較高。核酸探針，具靈敏度高、特異度高等特點(diǎn)，可反復(fù)多次利用，可用于大樣本量檢測(cè)，不僅可檢出布魯氏菌陽(yáng)性情況，同時(shí)可利用不同核酸探針進(jìn)行種型鑒定分型，與常規(guī)PCR 技術(shù)相比，診斷操作難度較低，但診斷靈敏度相近。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）同樣為通過(guò)基因擴(kuò)增進(jìn)行病原菌診斷，而LAMP 技術(shù)具操作簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)勢(shì)，可直接通過(guò)肉眼觀察進(jìn)行結(jié)果判斷，更適用于基層布魯氏菌診斷。

3 治療方法

清除環(huán)境中的布魯氏桿菌，可降低環(huán)境中人和動(dòng)物布魯氏桿菌感染的風(fēng)險(xiǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)，犬種布魯氏菌最低抑菌濃度中，戊二醛癸甲溴銨、二氯異氰尿酸鈉、復(fù)合酚、過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合粉的MIC分別為7.81 mg/L、125.00 mg/L、17.08 mg/L、250.0 mg/L；最低殺菌濃度中，戊二醛癸甲溴銨、二氯異氰尿酸鈉、復(fù)合酚、硫酸氫鉀復(fù)合粉分別為125.00 mg/L、31.25 mg/L、136.67 mg/L、500.00 mg/L 時(shí)，持續(xù)作用3 min 能夠殺滅犬種布魯氏菌。在對(duì)人慢性布魯氏菌病治療中，左氧氟沙星聯(lián)合多西環(huán)素對(duì)布魯氏桿菌具良好殺滅作用。有研究發(fā)現(xiàn)，口服左氧氟沙星，每次200 mg，每天2次；口服多西環(huán)素，每次200 mg，每天1次；口服復(fù)方甘草酸苷，每次3 片，每天3 次，持續(xù)治療21 d后，與單純應(yīng)用左氧氟沙星+多西環(huán)素治療相比，治療有效率顯著提升，且患者發(fā)熱、多汗、乏力、頭痛等癥狀消失時(shí)間均顯著縮短。隨著近年來(lái)臨床對(duì)中醫(yī)藥治療重視程度提升，在對(duì)該病常規(guī)西藥治療基礎(chǔ)上，聯(lián)合中藥治療應(yīng)用頻率逐漸提升。有研究表明，在對(duì)患者常規(guī)西藥治療基礎(chǔ)上，結(jié)合中醫(yī)辨證治療，患者免疫功能顯著改善，炎癥反應(yīng)水平顯著降低。

4 小結(jié)

犬種布魯氏菌病對(duì)人和犬的生理機(jī)能影響嚴(yán)重，在對(duì)其鑒別診斷中，血清學(xué)診斷和病原學(xué)診斷均為常見(jiàn)診斷方法，但不同診斷方法單獨(dú)應(yīng)用均存在一定局限性，提示應(yīng)建立綜合診斷方案，以提升診斷的準(zhǔn)確性。在對(duì)該病預(yù)防及治療中，西藥聯(lián)合中藥治療近年來(lái)備受關(guān)注，為該病控制提供新思路。