唐曉爽 張曉青 尹華春 鄭 新 李 松 楊 輝

垂體腺瘤為顱內(nèi)常見的腫瘤之一，年發(fā)病率在（3.9～7.4）/10 萬(wàn)，僅次于膠質(zhì)瘤和腦膜瘤，其中無(wú)功能腺瘤約占30%[1]。2004 年，WHO 第三版垂體腫瘤分型指南主要依據(jù)激素類型進(jìn)行分類[2]。這種分類方法存在諸多不足，例如激素改變不明顯的病人，沒有具體的分類。2017年，WHO發(fā)布了新的垂體腫瘤分型指南[3，4]，其中垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)情況被作為新的分型指標(biāo)。垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子對(duì)垂體細(xì)胞的分化十分重要，例如垂體特異性POU 類同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子1（pituitary specific POU-class homoe domain transcription factor-1，Pit-1）主要表達(dá)于生長(zhǎng)激素（growth hormone，GH）細(xì)胞腺瘤和泌乳素（prolactin，PRL）細(xì)胞腺瘤，調(diào)控GH、PRL 和促甲狀腺激素（thyroid stimulating hormone，TSH）細(xì)胞分化，PRL 細(xì)胞分化還需要雌激素受體α（estrogen receptor alpha，ERα）調(diào)控，TSH 細(xì)胞分化則受到GATA2 調(diào)控，促性腺激素（gonadotropic hormone，GnH）細(xì)胞的分化則受SF-1和GATA2的調(diào)控[5]。臨床上，很多無(wú)功能垂體腺瘤病人通常沒有血清激素的異常、缺乏典型的癥狀，從而導(dǎo)致延誤診斷和治療，所以根據(jù)垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行分型、分析，對(duì)無(wú)功能垂體腺瘤的診治可提供新依據(jù)、新方法[6]。本文探討無(wú)功能垂體腺瘤的垂體相關(guān)垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)情況與臨床特征的關(guān)系，為臨床無(wú)功能垂體腺瘤的診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集2013～2019年手術(shù)切除的無(wú)功能垂體腺瘤組織151例，均經(jīng)術(shù)后組織病理檢查確診，且排除腫瘤囊變、出血，其中男90 例，女61 例；年齡22～85 歲，平均（47.55±11.89）歲。腫瘤大小1 cm×0.5 cm×0.3 cm～6 cm×4.9 cm×6.6 cm，平均體積（18.35±5.33）cm3（計(jì)算公式：長(zhǎng)×寬2）/2[7]）。侵襲性垂體腺瘤（Knosp分級(jí)≥3級(jí)[8]）48例。

1.2 組織芯片與免疫組化染色檢測(cè) 組織標(biāo)本采用石蠟包埋，隨后進(jìn)行切片、脫蠟、水化后，采用HE 染色定位、標(biāo)記待研究的區(qū)域，使用組織芯片點(diǎn)樣儀將標(biāo)記好的組織按設(shè)計(jì)排列在空白蠟塊上。首先要利用打孔機(jī)在已經(jīng)標(biāo)記好的靶位點(diǎn)上進(jìn)行打孔，將組織芯轉(zhuǎn)入蠟塊孔中。使用切片機(jī)對(duì)陣列蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片獲得組織芯片。隨后，運(yùn)用5 個(gè)垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（Pit-1、SF-1、GATA2、Tpit、ERα）的一抗，對(duì)組織芯片進(jìn)行孵育，然后二抗孵育，最后利用軟件LAS AF Lite 和Iamge J 對(duì)圖像進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析[9]。5 種垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子染色情況見圖1。

圖1 無(wú)功能垂體腺瘤垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)（×400）

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0軟件分析；計(jì)量資料以±s表示，運(yùn)用t檢驗(yàn)和方差分析；利用R 語(yǔ)言包Upset分析作圖；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 151 例無(wú)功能垂體腺瘤的垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)情況 根據(jù)2017 年WHO 垂體腫瘤分類：5 個(gè)垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子均陰性36例；Pit-1陽(yáng)性91例，SF-1陽(yáng)性11例，GATA2陽(yáng)性9例，ERα陽(yáng)性4例。

2.2 不同類型無(wú)功能垂體腺瘤病人的臨床特征151例無(wú)功能腺瘤中，GH細(xì)胞腺瘤53例，多激素細(xì)胞腺瘤42例，零細(xì)胞腺瘤36例，GnH細(xì)胞腺瘤11例，TSH細(xì)胞腺瘤9例。

首先，各類型無(wú)功能腺瘤的年齡和Ki-67 指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），提示分型和年齡、Ki-67 指數(shù)沒有直接聯(lián)系；其次，多激素細(xì)胞腺瘤、GnH 細(xì)胞腺瘤和零細(xì)胞腺瘤體積明顯大于TSH 細(xì)胞腺瘤和GH細(xì)胞腺瘤（P＜0.05），提示無(wú)功能腺瘤的大小與相關(guān)垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)、激素水平有一定關(guān)系；第三，多激素細(xì)胞腺瘤、GH細(xì)胞腺瘤、零細(xì)胞腺瘤侵襲性比例明顯增高（P＜0.05）；第四，零細(xì)胞腺瘤P53陽(yáng)性率明顯低于其他類型（P＜0.05）。見表1。

表1 不同類型無(wú)功能垂體腺瘤病人的臨床特征

2.3 垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平與無(wú)功能腺瘤病人臨床特征的關(guān)系 與20～39 歲、＞60 歲病人相比，40～59歲病人5個(gè)垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子陽(yáng)性表達(dá)率和陰性表達(dá)率均明顯增加（P＜0.05；圖2A）；除Tpit陽(yáng)性表達(dá)為男性多于女性（P＜0.05；圖2B），其余4個(gè)垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子均為女性多于男性（P＜0.05；圖2B）；腫瘤體積、Ki-67指數(shù)與垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)水平無(wú)明顯關(guān)系（P＞0.05；圖2C、2D）。

圖2 無(wú)功能垂體腺瘤垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子陽(yáng)性表達(dá)與病人臨床特征的關(guān)系

2.4 垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平與無(wú)功能垂體腺瘤病人內(nèi)分泌激素水平的關(guān)系Pit-1 陽(yáng)性病人血清GH、TSH 水平明顯增高（P＜0.01；圖3A、3D），ERa 陽(yáng)性病人血清PRL水平明顯增高（P＜0.01；圖3B），GATA2 陽(yáng)性病人血清TSH 水平明顯增高（P＜0.01；圖3D）。血清ACTH 水平與轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平無(wú)明顯關(guān)系（P＞0.05；圖3C）。這提示Pit-1、GATA2 表達(dá)可能與GH、TSH 分泌有關(guān)，而ERα表達(dá)則與PRL 分泌有關(guān)。

圖3 無(wú)功能垂體腺瘤垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子陽(yáng)性表達(dá)與激素水平的關(guān)系

3 討論

根據(jù)2017 年第四版WHO 垂體腫瘤分型，零細(xì)胞腺瘤才是真正意義上的無(wú)功能腺瘤，所以僅僅通過(guò)血清內(nèi)分泌激素的檢測(cè)進(jìn)行垂體腺瘤分類并不完全可靠，而垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的檢測(cè)則可以作為一種補(bǔ)充，對(duì)無(wú)功能垂體腺瘤做進(jìn)一步分類。作為一種新的垂體腫瘤分類指標(biāo)，垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子可以與舊的分類方法結(jié)合，使垂體腫瘤分類變得更加準(zhǔn)確。將來(lái)，垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子或許能成為一種新的診斷方法或治療靶點(diǎn)[10]。

本文對(duì)151例無(wú)功能垂體腺瘤的垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子以及臨床特征進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Tpit 陽(yáng)性率在男性病人較高，而其他垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子陽(yáng)性率均在女性病人較高，提示垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子可能與病人的性別有一定關(guān)系；其次，無(wú)功能垂體腺瘤的腫瘤大小與垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子、血清激素水平有一定關(guān)系；GH 細(xì)胞腺瘤P53 陽(yáng)性率大于其他亞型，提示Pit-1 表達(dá)、GH 水平可能與P53 表達(dá)有一定關(guān)系，一定程度上可以預(yù)測(cè)病人預(yù)后情況。此外，垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)和病人血清激素水平也有著一定的聯(lián)系。

此外，我們發(fā)現(xiàn)，部分臨床診斷為無(wú)功能垂體腺瘤的病人的垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)并非全為陰性，原因可能是：臨床檢測(cè)水平有限，激素水平低于檢測(cè)水平下限；垂體瘤細(xì)胞表達(dá)相關(guān)垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，但未能表現(xiàn)到蛋白水平。

然而，我們的研究尚存在諸多不足之處，例如樣本量不夠大，未開展進(jìn)一步的隨訪研究，未進(jìn)行更深入的機(jī)制研究等等。在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，我們將通過(guò)分析垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)與血清激素水平、腫瘤復(fù)發(fā)情況、耐藥性和腫瘤侵襲性等等之間的關(guān)系，深入開展機(jī)制研究，為垂體腺瘤的臨床診療提供新的理論基礎(chǔ)。

總之，垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的檢測(cè)在一定程度上可以為臨床診斷的無(wú)功能垂體腺瘤分類提供新依據(jù)，對(duì)舊的分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行補(bǔ)充。與此同時(shí)，舊的分類標(biāo)準(zhǔn)同樣不能摒棄，二者相互補(bǔ)充能更好、更準(zhǔn)確地對(duì)垂體腫瘤進(jìn)行分類。除此之外，垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)與某些臨床病理特征有著密切的聯(lián)系，提示垂體相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子對(duì)指導(dǎo)診療、預(yù)測(cè)預(yù)后具有一定的價(jià)值，甚至有可能成為潛在的治療靶標(biāo)。